幽门螺杆菌感染与原发性肝癌相关性研究*

覃月秋 黄赞松

右江民族医学院消化疾病研究所消化内科，广西 百色 533000

原发性肝癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，死亡率在消化系恶性肿瘤中居第3位，仅次于胃癌、食管癌。原发性肝癌发病原因目前尚未完全明确，主要与肝硬化、乙型和丙型肝炎病毒感染、黄曲霉素、寄生虫、酒精、饮用水污染等因素有关，约10%左右的肝癌患者发病原因不明。幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种螺旋状、寄生于消化道的微需氧的革兰氏阴性菌，于1983年由澳大亚学者Warren和Marshall从慢性胃炎患者胃黏膜中分离并培养出来。全球自然人群中Hp感染率超过50%，我国感染率为40%～90%，平均为59%。Hp与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌及胃黏膜相关性淋巴样组织样（MALT）恶性淋巴瘤发生的密切联系已得到医学界的认可，并于1994年被世界卫生组织列为Ⅰ类致癌物，而Hp感染与胃肠外疾病的关系也越来越引起医学界的广泛关注，其中Hp感染与肝脏疾病，特别是原发性肝癌的关系是近年研究的新热点。近年研究表明Hp感染可能与肝癌的发生有一定的相关性[1-2]。本研究就Hp感染与原发性肝癌研究进展作一综述。

1 Hp感染与原发性肝癌相关性研究

1.1 国外研究

1994年学者Ward JW、Fox JG等[3-4]从小鼠肝组织分离、检测发现肝螺杆菌（Hp）后引发了人们对肝脏疾病与螺杆菌关系的思考:肝螺杆菌与Hp是否同源？人肝脏组织是否存在Hp？人类肝脏疾病与Hp感染有无相关性？学者们就此展开了大量研究。Avenaud P等[5]应用聚合酶链反应（PCR）检测8例原发性肝癌、肝内胆管癌组织，结果发现有螺杆菌16S rRNA基因的存在，阳性率达100%，进一步的测序结果表明与Hp有97～99%的同源性，而对照非肝癌组仅1例阳性，证实人肝癌组织中存在Hp感染，且感染率很高。Nilsson HO等[6]应用PCR及DNA测序检测16例原发性肝细胞癌和14例肝内胆管癌标本，发现75%(12/16）原发性肝癌组织螺杆菌16S rRNA基因阳性，71.4%(10/14）胆管癌组织螺杆菌16S rRNA基因阳性，而作为对照的20例肝转移瘤无一例阳性，测序证实与Hp或HH同源性最高，分析后认为Hp感染与原发性肝细胞癌和原发性肝内胆管癌的发生密切相关。Ponzetto A等[7]检测70名丙肝肝硬化患者血清抗Hp IgG抗体，其中54例阳性，阳性率为77.2%，310例对照组中183例阳性，阳性率为59%，两者有显著差异。用PCR方法检测25例伴有肝硬化的原发性肝癌患者手术切除标本，92%(23/25）阳性，测序结果与Hp相近，认为Hp在丙肝肝硬化患者和肝癌患者的发病过程中起重要作用。

1.2 国内研究

范学工等[8]研究96例慢性乙型肝炎患者Hp感染情况，结果乙肝患者感染率为57.3%，而对照组仅42.3%，其中HBeAg、HBV-DNA阳性者Hp感染率高达75.6%，提示Hp感染可能对乙肝病毒的复制有促进作用。黄燕等[9]用PCR检测38例肝癌患者肝组织中螺杆菌感染情况，结果发现52.6%(20/38）的肝癌组织中发现螺杆菌存在，而非肝癌组无一例阳性（P＜0.01），PCR扩增产物测序分析显示与Hp有99%～100%的同源性。宣世英等[10]应用PCR及原位杂交技术检测21例肝癌组织，13例标本中证实有螺杆菌16S rRNA存在，而对照组（12例)无阳性检出（P＜0.01），测序结果显示，肝癌组织螺杆菌属16SrRNA序列与Hp的16S rRNA序列97.8%的同源性。郑盛等[11]采用碳-14呼气法检测85原发性肝癌患者及289健康体检者幽门螺杆菌感染情况，结果原发性肝癌患者阳性率达85.5%，而健康体检者阳性率仅40.4%；用ELISA法检测幽门螺杆菌抗体（Hp-CagA-IgG），结果原发性肝癌患者阳性率达85.0%，而健康体检者阳性率仅22.5%，原发性肝癌患者存在高的幽门螺杆菌感染率，提示幽门螺杆菌感染与原发性肝癌有相关性。

国内外研究结果表明，人肝脏组织中存在螺杆菌，该菌与Hp高度同源，提示Hp感染可能与各种肝脏疾病，尤其是肝癌的发生有一定的相关性。

2 Hp感染肝组织的可能途径

过去长期认为Hp仅寄生于胃黏膜，但近年来这一观点受到挑战。近年研究人员在胆汁、胆道黏膜及肝脏中检测到Hp的存在，并对其入肝途径作出推测。Myung SJ[12]用PCR检测43例肝胆管疾病患者的肝内胆汁、胆管组织、胆石标本，结果以Hp 26 Kda蛋白为引物者阳性率为9.3%（4/43），以Hp尿素酶A基因为引物者阳性率为11.6%（5/43），而对照组均为阴性，阳性患者肝内胆汁PH值较阴性者明显下降，提示肝内胆汁pH值的降低可能有利于患者Hp的生存。陈东风等[13]用W-S银染色法和免疫组化染色法检测524例胆囊炎手术标本石蜡切片，71例（13.55%）镜下观察到类似Hp的细菌，37例（7.1%）Hp抗体染色阳性；用Hp尿素酶A、B基因引物对81例慢性胆囊炎手术切除新鲜标本胆囊黏膜DNA行PCR扩增，结果11例（13.6%）尿素酶A、B基因皆阳性，4例仅有尿素酶A基因阳性，7例仅有尿素酶B基因阳性，提示部分慢性胆囊炎患者胆囊内确有Hp存在。目前研究提示Hp可能经奥狄氏括约肌逆流至胆道进入肝脏，也可能是Hp通过门静脉循环或淋巴循环到达肝脏，然后进一步排泄到胆汁中。此外，研究还发现Hp感染有可能导致菌血症。研究者采用PCR法，在经动脉内膜切除的颈动脉粥瘤及动脉粥样硬化斑块中检测出了Hp DNA，提示Hp可以通过菌血症这一途径到达肝脏[14-15]。

3 Hp导致肝癌发生、发展的机制

Hp导致肝癌发生、发展的确切机制尚未明了，目前研究认为Hp在肿瘤发生中的机制主要包括以下几个方面:Hp自身及其代谢产物的影响；Hp感染继发炎症过程中释放多种细胞因子、自由基及一氧化氮等多因素协同作用[16-18]。张艳等[19]报道，CagA+Hp能够不同程度地上调体外培养肝细胞的Cyclin D1及增生细胞核抗原（PCNA）的表达，进而引起肝细胞增生动力学的异常。他们的研究还发现，CagA+Hp可诱导人肝细胞系HepG2原癌基因C-fos表达升高，提示Hp的CagA毒力因子在肝癌的发生上可能起一定作用[20]。陈仁等[21]利用体外细胞培养技术，将不同浓度的CagA（+）Hp和CagA（-）Hp与肝癌细胞HepG2共同培养，发现随着CagA（+）Hp菌液浓度的增大和作用时间的延长，HepG2细胞形态由贴壁的梭形变为圆形，贴壁细胞减少，悬浮细胞增多，并且细胞周围出现碎片，其杀伤率及HepG2细胞凋亡率随CagA（+）Hp菌液浓度增加逐渐增强。张福星等[22]研究了180例原发性肝癌癌组织的石蜡标本，发现高侵袭性组原发性肝细胞癌Hp16S rRNA阳性率（86.44%）显著高于低侵袭性组（58.06%），Hp16S rRNA阳性的原发性肝癌标本中Transgelin及Integrin2的表达水平均显著高于Hp16S rRNA阴性标本，认为Hp感染与肝癌的侵袭转移密切相关，其机制与Hp促进肝细胞Transgelin及Integrinu2的表达有关。

4 Hp感染肝组织的病因学意义

研究认为Hp感染在肝炎向肝硬化、肝癌发展过程中起桥梁或协同作用[23]。季尚玮等[24]应用酶联免疫吸附法检测502例HBV感染患者和429名健康对照者血清抗Hp-IgG。同时56例肝穿刺活检组织进行PCR扩增，结果发现HBV感染患者血清抗HpIgG阳性率（63.9%）显著高于健康对照者（43.4%），其中肝癌组、肝硬化组、慢性乙型肝炎组阳性率分别为80.6%、77.1%、59.5%。56例肝穿刺活检患者中，35例肝组织中发现螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因，其中肝硬化组17例，肝癌组7例，慢性乙型肝炎组11例。进一步的扩增结果证实35例中21例为HpDNA。认为螺杆菌在慢性乙型肝炎向肝硬化和肝癌的发展过程中可能发挥致病作用。此外他们还用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测了慢性丙型肝炎组、丙型肝炎肝硬化组和合并肝癌组HCV-RNA的含量，结果发现Hp在慢性丙型肝炎组、丙型肝炎肝硬化组和合并肝癌组的感染率（55.5%、76.5%、78.6%）明显高于健康对照组（43.4%， P＜0.05），Hp感染率与病变严重程度呈正相关。认为Hp在慢性丙型肝炎向肝硬化和肝癌的发展过程中可能与HCV发挥协同作用[25]。

肝癌的发生是多因素长期作用的结果，肝炎病毒感染是肝癌发生的重要病因之一，Hp可能通过促进肝炎病毒的复制在肝炎向肝癌发展过程中起桥梁或协同作用；或者Hp感染有可能本身即是肝癌的另一个独立致病因素？这尚需进一步研究证实。

5 问题与展望

Hp感染可能对原发性肝癌的发生、发展起着重要的作用。然而目前的研究仅为初步探讨，Hp感染与原发性肝癌之间的确切关系需如何？其作用机制如何？Hp感染与嗜肝病毒在肝癌的发生过程中的相互关系如何？如何从肝组织中分离培养出Hp并建立相应的动物模型？解决这些问题还将有大量的研究工作有待完成。随着这些研究的深入开展，Hp感染与原发性肝癌的关系将进一步明了，这将为抗感染和疫苗注射防治肝癌可能提供理论基础。

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