黑龙江产山里红叶提取液对血栓的影响

于晓瑾，张树明，刘莉，于翔龙

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2.哈尔滨工业大学，黑龙江 哈尔滨 150001;3.黑龙江省中医研究院，黑龙江 哈尔滨 150036;4.兰格药业，黑龙江 哈尔滨 150036)

目前，对于华北以南地区的山里红叶研究甚广，也有很多成型制剂。但作为资源大省的黑龙江产山里红叶提取物的研究报道较少。为充分开发、应用其天然资源，本文对黑龙江产的山里红叶做了初步药理学研究。借鉴相关方法和研究，本实验通过延长大鼠体内动脉血栓形成时间、减少静脉形成重量，溶解家兔体外血栓实验来观察山里红叶提取液溶栓及抑制血栓形成的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

Wistar大鼠，体质量180g～200g，雌雄兼用(黑龙江省肿瘤防治所提供，动物合格证号:SCXK黑20050001)。

1.2 药品与试剂

供试品:山里红叶提取液，取黑龙江省大兴安岭地区产山里红叶，加10倍量50%乙醇，2h回流提取，挥发成浸膏，并将其配制成每毫升含5mg总黄酮的溶液。

阳性对照药:刺五加注射液(黑龙江乌苏里江制药有限公司，批号 040601，7mg·kg－1)

1.3 实验仪器

DSJ多道生理记录仪(成都仪器厂);血小板聚集仪(美国);BACL型半自动生化测定仪(德国);TGL－16型离心机(上海医疗器械厂);S648型恒温水浴箱(国营创新医疗器械厂);AG135型电子天平(梅特勒－托利多仪器上海有限公司)。

1.4 统计学处理

2 山里红叶提取液对大鼠体内动脉血栓形成的影响

2.1 分组及给药方法

取大鼠50只，体质量在180～220g，雌雄各半，将其随机分为5组，每组10只，雌雄各5只，山里红叶提取液高剂量组1.512g·kg－1，山里红叶提取液中剂量组 0.756g·kg－1，山里红叶提取液低剂量组 0.378g·kg－1，阳性对照药组刺五加注射液 0.390g·kg－1，空白对照组给予等容量生理盐水。采用灌胃给药，每天1次，连续7天。

2.2 实验方法与观测指标

末次给药30min后，将大鼠用20%乌拉坦麻醉，剥离大鼠颈总动脉，在远心端进行动脉插管，用四道生理记录仪加测血压，在近心端用45%的三氯化铁溶液浸泡的0.5cm宽的滤纸条包裹动脉，记录从包裹到血压降为0时的时间为动脉血栓形成时间，记录数据，各组进行组间t检验统计分析。

2.3 实验结果

结果见表1。山里红叶提取液各剂量组及刺五加注射液组与空白对照组比较均能延长动脉血栓形成时间，但只有山里红叶提取液高、中剂量组差异有显著性意义(P＜0.05)，刺五加注射液、山里红叶提取液低剂量组虽有延长但无统计学意义，山里红叶提取液各剂量组与刺五加注射液组比较，延长动脉血栓形成时间均较长。

表1 山里红叶提取液对大鼠体内动脉血栓形成的影响(s)

表1 山里红叶提取液对大鼠体内动脉血栓形成的影响(s)

注:与空白对照组比较，#P＜0.05。

组别 n 剂量(g·kg－1)动脉血栓形成时间(min)空白对照组 10 等容量10.55 ±1.54提取液高剂量组 10 1.512 12.90 ±2.25#提取液中剂量组 10 0.756 12.70 ±2.74#提取液低剂量组 10 0.378 11.25 ±1.30刺五加注射液组10 0.270 10.81 ±3.31

3 山里红叶提取液对大鼠体内静脉血栓形成的影响

3.1 分组及给药方法

3.2 实验方法与观测指标

末次给药后30min，将大鼠用20%乌拉坦麻醉，剥离大鼠下腔总静脉，在左肾静脉下端用线结扎下腔总静脉，3h后打开下腔总静脉取出血栓称重，记录数据，各组进行组间t检验统计分析。

3.3 实验结果 结果见表2。

表2 山里红叶提取液对大鼠体内静脉血栓形成的影响(s)

表2 山里红叶提取液对大鼠体内静脉血栓形成的影响(s)

注:与空白对照组比较，△△P＜0.01;与刺五加注射液组比较，##P＜0.01。

组别 n 剂量(g·kg－1)血栓称重(g)空白对照组 10 等容量10 0.27 10.65 ±1.93 11.05 ±3.2提取液高剂量组 10 1.512 6.50 ±2.71##△△提取液中剂量组 10 0.756 7.11 ±1.89##△△提取液低剂量组 10 0.378 9.94 ±2.91刺五加注射液组

山里红叶提取液各剂量及刺五加注射液组与空白对照组比较均能减少静脉血栓重量，但只有山里红叶提取液高、中剂量组差异有显著性意义(P＜0.05)，刺五加注射液、山里红叶提取液低剂量组虽有降低但无统计学意义，山里红叶提取液各剂量组与刺五加注射液组比较均降低静脉血栓重量，山里红叶提取液高、中剂量组差异有显著性意义(P＜0.05)。

4 山里红叶提取液对家兔体外血栓溶解的影响

4.1 分组及给药方法

取健康家兔1只，颈动脉采血，静止2h，用手术刀仔细分取0.5g血块40粒，称重后放入试管中。将试管分为5组，即空白对照组、山里红叶提取液低剂量组、山里红叶提取液中剂量组、山里红叶提取液高剂量组、刺五加注射液组。每只试管加5mL相应试药。空白对照组加蒸馏水，山里红叶提取液低、中、高剂量组分别加2.8%、5.6%、11.2%的山里红叶提取液混悬液，刺五加组加刺五加注射液2.7%混悬液。

4.2 实验方法与观测指标

37℃水浴箱中水浴3h，取出吸去水分后称重，按下列公式计算溶解率:溶解率=(溶解前重量－溶解后重量)/溶解前重量×100%。

4.3 实验结果 结果见表3。

山里红叶提取液各剂量及刺五加注射液组与空白对照组比较均能增加体外血栓溶解率，但只有山里红叶提取液各剂量组差异有极为显著性意义(P＜0.01)，刺五加注射液虽有增加体外血栓溶解的作用，但无统计学意义。山里红叶提取液各剂量组与刺五加注射液组比较均能加速血栓溶解，差异具有极为显著性意义(P＜0.01)。

表3 山里红叶提取液对体外血栓溶解的影响(s)

表3 山里红叶提取液对体外血栓溶解的影响(s)

注:与空白对照组比较，△△P＜0.01;与刺五加注射液组比较，##P ＜0.01。

组别 n 剂量(%)溶解率(%)空白对照组 10 等容量10 2.7 13.89 ±4.55 11.82 ±2.89提取液高剂量组 10 2.8 46.81 ±5.34##△△提取液中剂量组 10 5.6 39.66 ±4.11##△△提取液低剂量组 10 11.2 24.6 ±4.81##△△刺五加注射液组

5 结论

通过借鉴了三氯化铁形成动脉血栓的实验方法［1］，建造了大鼠动脉血栓模型。利用最早的 Reyers［2］等通过结扎大鼠下腔静脉建立了大鼠深静脉血栓形成的模型来进行了试验药品的研究。

本实验结果表明，通过对实验动物的体内、体外实验，从大鼠体内动脉血栓形成的时间、大鼠体内静脉血栓形成的重量和对家兔体外血栓的溶栓效果来看，山里红叶提取液具有延长动脉血栓形成时间，降低静脉血栓重量，且加速体外血栓溶解的作用。以上作用的效果均好于对照组刺五加注射液。对于血栓疾病的研究主要在于对动脉血栓和静脉血栓的形成的时间和重量延缓和减轻，同时可以对已有的血栓进行溶栓作用。山里红叶提取液与其对照液刺五加注射液相比较，对于体内的动、静脉血栓的形成都有很好的延缓和减轻作用，同时也对家兔的体外血栓溶解效果远远优于刺五加注射液。该研究结果对于黑龙江产山里红叶的进一步研究提供了实验依据。

［1］李大元，丁文惠，赵丽，等.简易快速的大鼠动脉血栓形成模型［J］.中国介入心脏病学杂志，1996(3):18.

［2］Reyers T，Mussoni L，Konati MB，et al.Failure of aspirin at different doses to modify experimental thrombosis in rats［J］.Thromb Res，1980，18(5):669.