HPLC法同时测定复方樟脑搽剂中苯酚和樟脑含量

陆松伟，宋洪杰，陈方剑(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)

复方樟脑搽剂是《中国人民解放军医疗机构制剂规范》中收载的外用制剂，由液化苯酚、樟脑、薄荷脑和乙醇为主要成分组成，有消炎止痒作用，广泛用于皮肤瘙痒症的治疗。其主要成分常温下都不稳定，在生产和储存过程中控制其主要成分的含量很有必要，但本制剂的质量标准中没有含量测定项，为进一步提高和控制复方樟脑搽剂的质量，笔者参考有关文献［1～3］，建立了同时测定苯酚和樟脑两种成分含量的HPLC法，用于复方樟脑搽剂的质量控制。

1 仪器和试药

1.1 仪器 LC-10ADVP高效液相色谱仪(日本岛津制作所，包括LC-10AT泵、SPD-10A紫外检测器、CLASS vp色谱工作站和SCL-10Avp系统控制器);FA-2004电子天平(上海天平仪器厂)。

1.2 药品和试剂 苯酚(含量100.0%，江门市恒键药业有限公司，批号 080601);樟脑(含量96.4%，福建轻松股份有限公司，批号100402);复方樟脑搽剂(第二军医大学长海医院自制，批号101024、101101、101102、101103);水为蒸馏水，甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 供试品溶液 精密量取供试品0.5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液备用。

2.1.2 模拟样品和阴性对照样品溶液 按处方工艺制备阴性对照和模拟样品，按供试品溶液制备方法制备成溶液。

2.1.3 对照品溶液 精密称取苯酚对照品0.103 4 g、樟脑对照品0.250 1 g一同置于100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得含苯酚、樟脑成分的对照品贮备液;精密量取上述贮备液各1.0、2.0、4.0、6.0 和8.0 ml，分别置于 10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制得苯酚和樟脑对照品混合溶液，苯酚浓度分别为 103.4、206.8、413.6、620.4 和 827.2 μg/ml，樟脑浓度分别为 205.1、410.2、820.4、1 230.6 和1 640.8 μg/ml。

2.2 色谱条件和系统适用性实验 Kromasil-C18色谱柱(200 mm ×4.0 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(55∶45);检测波长287 nm;流速0.8 ml/min;进样量20 μl;柱温为室温［4］。苯酚和樟脑与相邻峰的分离度均＞1.5，处方中的薄荷脑和其他辅料对2种成分的含量测定没有干扰。阴性样品溶液、对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1。

图1 复方樟脑搽剂的HPLC色谱图

2.3 标准曲线的制备 精密吸取上述混合对照品溶液各20 μl，进样，测定峰面积。以对照品溶液浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，求得两组分的回归方程。结果显示，苯酚在 103.4 ～827.2 μg/ml范围内线性良好，其回归方程为A=2 149.4C+241 882(r=0.999 1，n=5)，樟脑在205.1 ～1 640.8 μg/ml范围内线性良好，其回归方程为A=305.03C+1 163.3(r=0.999 5，n=5)。

2.4 回收率试验 精密称取已知含量的模拟样品适量，按供试品溶液制备项下操作，进样，记录峰面积，代入线性回归方程，计算含量并求算回收率，结果见表1。苯酚和樟脑的平均回收率分别为99.60%(RSD=1.20%，n=9)、99.82%(RSD=1.18%，n=9)，表明所建立的HPLC方法准确度高。

表1 苯酚和樟脑的回收率试验结果(n=3)

2.5 精密度实验 分别取低、中、高3组浓度的混合对照品溶液，在上述色谱条件下日内精密度重复进样3次，日间精密度重复进样5次，每次进样间隔时间日内精密度为4 h，日间精密度为24 h，记录峰面积，代入线性回归方程，计算含量。苯酚413.6、620.4、827.2 μg/ml浓度的日内精密度RSD分别为0.66%、1.31%和0.74%，日间精密度 RSD分别为1.59%，1.88%和1.86%;樟脑820.4、1 230.6、1 640.8 μg/ml浓度日内精密度 RSD分别为0.36%、0.42%和0.52%，日间精密度 RSD分别为1.62%，1.48%和1.98%(n=3)。结果表明所建立的HPLC方法重现性好，且测定时间内样品溶液稳定性良好。

2.6 重复性实验 取批号101103供试品溶液5份，按样品处理方法操作，并按含量测定方法测定，代入各自的回归方程计算含量，结果显示，苯酚和樟脑的含量分别为97.43%和100.16%，RSD分别为0.65%和0.67%(n=5)，表明方法重复性良好。

2.7 样品测定 取复方樟脑搽剂，按2.1.1项下的操作制备供试品溶液，进样20 μl，记录峰面积，代入线性回归方程计算含量，共测定4个批号，结果见表2。苯酚和樟脑两组分含量均在标示量的90.0% ～110.0%之间，符合外用制剂的含量限度要求［5］。

表2 复方樟脑搽剂含量测定结果( ，n=3)

表2 复方樟脑搽剂含量测定结果( ，n=3)

3 讨论

本研究建立了同时测定复方樟脑搽剂中苯酚和樟脑的HPLC法。经方法学研究表明，所建立的HPLC方法简便、快速、准确，重复性好，可为复方樟脑搽的质量控制提供依据。由于樟脑在水中极微溶解，且樟脑在样品中含量较高，因此本实验中用甲醇作为溶剂，以增强其溶解性，避免有少量樟脑结晶析出，影响测定结果。

预实验中，经过在190～400 nm波长范围内对苯酚樟脑对照品溶液进行紫外光谱扫描，结果发现，苯酚在273 nm处有最大吸收峰，樟脑在287 nm处有最大吸收峰，由于苯酚的紫外吸收特别强，故选择287 nm为检测波长，以增强樟脑的色谱信号响应。

实验中比较了不同比例的流动相和流速，发现苯酚和樟脑的保留时间随甲醇比例的增大而缩短，流速的增加而缩短，以甲醇-水(55∶45)为最佳比例流动相，流速0.8 ml/min为最佳流速。

［1］宗永辉.高效液相色谱法测定复方氧化锌涂剂中樟脑和苯酚含量［J］.中国药业，2009，18(1):16.

［2］余小平，舒金富，黄 华.高效液相色谱法同时测定樟脑苯酚溶液中两组分的含量［J］.药物分析杂志，2006，26(8):1161.

［3］杨 娟，黄敬群，李 红，等.高效液相色谱法测定复方樟脑搽剂中苯酚的含量［J］.中国医院药学杂志，2008，28(18):1616.

［4］宋洪杰，陆松伟，朱全刚，等.反相离子对色谱法测定三利巴布膏剂中盐酸利多卡因的含量［J］.中国现代应用药学杂志，2008，25(2):137.

［5］李丽萍，毕雪艳，景金柱.HPLC法测定盐酸利多卡因胶浆(I)的含量［J］.齐鲁药事，2006，25(2):92.