不同酒制工艺对丹参中丹酚酸B含量的影响*

常明泉，陈芳，黄良永，袁胜浩，叶立红，叶方，安志斌，杨光义

(1.湖北医药学院附属太和医院药学部，湖北十堰 442000;2.湖北医药学院药检学院，湖北十堰 442000)

丹参为唇形科植物丹参(Salvia mihiorrhiza Bge)的干燥根及根茎，其味苦，微寒，归心、肝经，具有祛瘀镇痛、活血通经、清心除烦、凉血消痈之功效。其水溶性成分丹酚酸B具有较强的抗氧化作用，是治疗冠心病、改善微循环、抑制血小板聚集的主要有效成分之一［1-4］。丹参因品种、气候、产地、采收期及生长年代的不同，所含主要成分差异较大。房陵丹参产于湖北省十堰市房陵地区，是当地政府重点发展的道地药材之一。特殊的地理环境、气候条件、炮制方法对房陵丹参中有效成分含量可能有一定影响，笔者采用三种传统的酒制工艺对房陵丹参进行炮制，用高效液相色谱(HPLC)法对样品中丹酚酸B含量进行测定，比较不同酒制工艺对其含量的影响，筛选最佳酒制工艺，为道地药材资源的合理开发利用、发挥最佳临床疗效提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 戴安UltiMate3000型高效液相色谱仪(包括四元梯度、自动进样器、柱温箱、紫外检测器);FA2004上皿电子天平(上海精科天平，d=0.1 mg);蒸锅(苏泊尔SZ26L2);炒锅(广东创生，直径30 cm);炖药罐(16号，康舒厨具公司);TDGC2j-2型调压式电炉(1 kW，宏达电器公司);KWY-102型电热干燥箱(2.4 kW，武汉市武昌实验仪器厂)。

1.2 试药 丹酚酸B标准品(中国药品生物制品检定所提供，批号:110722-200807);2 a生房陵丹参(产地湖北房县，批号:20090912，由湖北医药学院附属太和医院药学部叶立红副主任药师鉴定为唇形科植物丹参的干燥根及根茎);黄酒(十堰市房县神农泉皇酒有限公司，批号:20091217);甲醇:(色谱纯Tedia，批号:910900);乙腈(色谱纯，批号:20070907);甲酸(分析纯，批号:20080414)，纯化水(太和医院新鲜生产)。

2 方法与结果

2.1 黄酒的选用 选用市售完整包装的黄酒，性状为淡黄色澄清液体，具有黄酒的特异浓香，用乙醇测量仪测定含醇量应为(10±2)%。

2.2 房陵丹参原药材供试品的制备 取房陵丹参干燥根茎，除去杂质和残茎，洗净，润透，切厚片，干燥;将饮片粉碎，取本品粉末(过孔径0.355mm药筛)0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀滤过，取续滤液，即得［5-7］。

2.3 酒炙房陵丹参样品的制备 取房陵丹参饮片10 g，用带有6号针头的注射器吸取黄酒3 g均匀喷洒于药材表面，拌匀，置直径为10 cm的玻璃平皿内加盖闷润2 h，待黄酒被药材全部吸尽后，置炒药锅内，用文火炒至规定程度(嗅到药物固有香气)，取出，放凉，按原药材供试品的制备方法同法制备供试品。

2.4 酒蒸房陵丹参样品的制备 称取房陵丹参饮片10 g，按“2.3”项下方法加入黄酒处理，然后取样品置蒸锅内加热蒸制4 h，至蒸透后取出、置烘箱中50℃烘干，取出放凉，按原药材供试品的制备方法同法制备供试品。

2.5 酒炖房陵丹参样品的制备 称取房陵丹参饮片10 g，按“2.3”项下方法加入黄酒处理，然后取样品置炖药罐内，密闭，隔水加热8 h，炖至辅料完全被吸尽时，取出放凉，置烘箱中50℃烘干，取出放凉，按原药材供试品的制备方法同法制备供试品。

2.6 含量测定

2.6.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;色谱柱为 Dikma-C18(200mm×4.6mm，10 μm);流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59);检测波长为286 nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000，柱温为 30℃;流速为 1.0mL·min-1，进样量为10 μL［8］。

2.6.2 丹酚酸B标准品溶液的制备 取丹酚酸B标准品14.7 mg，精密称定，置100mL量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇匀;制成0.147 mg·mL-1标准品溶液。

2.6.3 阴性样品的制备 取不含房陵丹参的其他试剂，按“2.2”项下的方法制备成阴性样品。

2.6.4 干扰实验 分别取“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”“2.6.2”“2.6.3”项下制备的各样品溶液，按“2.6.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，结果除阴性样品外其他各组样品均在286 nm处有相同的色谱峰出现，见图1。阴性样品无干扰。

2.7 线性关系考察 分别精密吸取丹酚酸B标准品溶液 2.0，5.0，10.0，12.5，15.0，20.0mL 置于 100mL量瓶中，加 75% 甲醇制备成浓度为 2.940，7.350，14.700，18.380，22.050，29.400 μg·mL-1的样品溶液，按“2.6.1”项下色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，浓度作为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为:Y=19.44X－0.259 7，r=0.999 8，丹酚酸 B 在 2.940 ～29.400 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.8 精密度实验 取丹酚酸B原药材供试品溶液，按“2.6.1”项下色谱条件重复进样5次，依次测定各峰面积值，结果RSD为0.86%，表明该方法精密度良好。

2.9 稳定性实验 分别精密吸取房陵丹参原药材供试品、酒炙品、酒蒸品、酒炖品溶液，于 0，1，2，4，8，12，24 h 在“2.6.1”项下色谱条件各进样 10 μL，测定丹酚酸 B的含量，结果 RSD分别为 1.07%，1.30%，1.04%，1.12%，表明各样品溶液在24 h内稳定。

2.10 重复性实验 分别取房陵丹参原药材供试品、酒炙品、酒蒸品、酒炖品粉末各6份，每份0.2 g，分别按“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”项下的方法制备供试品溶液，按“2.6.1”项下色谱条件各进样，测得丹酚酸B的平均含量分别为 6.43%，2.73%，1.85%，4.66%，RSD分别为 0.94%，0.79%，0.85%，0.98%(n=5)。

2.11 加样回收率实验 分别精密量取已测知含量的房陵丹参原药材供试品、酒炙品、酒蒸品、酒炖品溶液各6份，再分别加入丹酚酸B标准品溶液(1.838 μg·mL-1)适量，按“2.6.1”项下色谱条件各进样，测定丹酚酸B的含量，结果其平均回收率分别为 97.9%，99.3%，97.8%，99.3%，RSD 分别为1.63%，1.86%，1.17%，1.47%。

图1 6种溶液的HPLC色谱图A.丹酚酸B标准品;B.房陵丹参原药材供试品;C.酒蒸样品;D.酒炙样品 ;E.酒炖样品;F.阴性样品;1.丹酚酸BFig.1 HPLC chromatograms of 6 kinds of solutionsA.standard ofsalvianolic acid B;B.miltiorrhizafrom Fangling;C.wine steamed samples;D.wine fried samples;E.wine stewing samples;F.negative samples;1.salvianolic acid B

2.12 样品含量测定 分别取“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”项下的样品溶液，按“2.6.1”项下色谱条件各进样，测定丹酚酸B的含量，结果见表1。

表1 不同工艺房陵丹参中丹酚酸B的含量测定结果Tab.1 Determination results of the content of salvian olic acid B in salvia miltiorrhiza from Fangling processed by different technology %，n=3

3 讨论

房陵丹参的干燥根及根茎质地坚实，外皮紧贴不易剥落，丹酚酸B为水溶性成分，多含在丹参外皮中，在实验过程中，药材必须粉碎完全、均匀，以免导致取、样不均造成较大偏差而不能真实药材质量。在药材软化时，采用了闷润法，使药材便于切制。

不同工艺的房陵丹参中丹酚酸B含量:原药材供试品＞酒炖品＞酒炙品＞酒蒸品，可见酒制房陵丹参虽然具有缓和药性、引药上行、矫味矫臭、防腐、且易于煎出有效成分的作用［9］，但对其中丹酚酸B含量也有较大影响。在3种炮制工艺中，酒炙是于铁锅中直接加热，在高温翻炒过程中药材中的丹酚酸B被破坏达57.5%;酒蒸是在密闭容器中循环加热，回流的冷凝水反复透过药材可能溶出一部分丹酚酸B滴入水锅中，该炮制法使丹酚酸损失达71.2%;上述两种炮制方法的丹酚酸B含量已低于《中华人民共和国药典》规定(不低于3%)的质量要求;酒炖是隔水密闭加热，丹参受热温度相对较低，没有回流蒸汽及液体的洗脱，丹酚酸B损失只有27.5%，相对上述两种方法而言损失较少，故认为酒制房陵丹参以酒炖为最佳工艺。

［1］中国药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:70－71.

［2］杨丹红，叶再元，何徐军，等.丹参多酚酸盐对实验性肝硬化大鼠肠黏膜屏障功能的改善作用［J］.中国临床药理学与治疗学，2010 ，15(7):758－763.

［3］杨海波，邓杰，王明明，等.丹参粉针剂对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响［J］.中国临床药理学与治疗学，2006，11(10):1115－1118.

［4］浦江晨，沈丽华.3类活血化瘀中成药对冠心病稳定型心绞痛血管内皮功能的影响［J］.中国临床药理学与治疗学，2010，15(3):331－334.

［5］翟学佳，徐锦凤.高效液相色谱法同时测定丹参药材水溶性和脂溶性成分的含量［J］.医药导报，2009，28(10):1345－1348.

［6］齐永秀，曹明亮，万建建，等.高效液相色谱法测定白花丹参根、茎、叶中丹参素和原儿茶醛的含量［J］.中国医院药学杂志，2007 ，28(12):1772－1773.

［7］叶方，杨光义，黄良永，等.均匀设计法优选房陵丹参水溶性成分提取工艺［J］.医药导报，2010，29(11):1469－1472.

［8］谢浙裕，钟宁远，柴军.HPLC法测定活血通脉片中丹酚酸 B 的含量［J］.西北药学杂志，2010，25(2):93－94.

［9］杨子华.浅谈中药酒制［J］.井冈山医专学报，2000，7(4):84－85.