氯化钠原料药细菌内毒素检查方法研究

贾瑞波，张兴哲，姜素云

(辽宁省大连市药品检验所，辽宁 大连 116021)

氯化钠作为电解质补充药，是氯化钠注射液等大输液的原料药以及制药工业的重要辅料，在2010年版《中国药典(二部)》中，其仍无细菌内毒素检查项，而国外药典对此均有详细规定。笔者根据2010年版《中国药典(二部)》附录ⅪⅩM[1]的要求，参照国外药典最新版本(EP6.0，BP2010，USP32)的标准，对氯化钠原料药细菌内毒素检查方法进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试药

DHG－9075A型电热干燥箱(上海一恒科技有限公司);旋涡混合器(德国IKA公司);TAL－40D型试管恒温仪(湛江安度斯生物有限公司)。氯化钠原料药(某厂家提供，批号分别为4100901，4100902，4100903);鲎试剂 1(TAL－1，批号为 1002080，规格为0.1 mL/支，灵敏度为 0.25 EU/mL，湛江博康海洋生物有限公司);鲎试剂 2(TAL －2，批号为 1005181，规格为 0.1 mL/支，灵敏度0.25 EU/mL，湛江安度斯生物有限公司);细菌内毒素工作标准品(WSE，批号为150601－200862，规格为120 EU/支，中国药品生物制品检定所);细菌内毒素检查用水(BET用水，批号为1003210，规格为5 mL/支，湛江博康海洋生物有限公司)。

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素限值确定[2]

2010年版《中国药典(二部)》收载的以氯化钠为主药的注射剂有氯化钠注射液、浓氯化钠注射液和复方氯化钠注射液。根据《临床用药须知》及药品说明书，其临床用途广泛，用法用量复杂多样，难以准确计算出 M值(人每千克体重每小时的临床最大用药剂量)。对于体积在100 mL以上的复方静脉输液类品种，内毒素限值一般按 0.50 EU/mL 计[2]。2010 年版《中国药典(二部)》中氯化钠注射液与复方氯化钠注射液的细菌内毒素检查限值均为0.50 EU/mL，根据氯化钠注射液的浓度0.9%(g/mL)计算得出，氯化钠原料药的细菌内毒素限值应小于55 EU/g。2010年版《中国药典(二部)》中浓氯化钠注射液的限值为25 EU/g。为保证安全用药，对于大输液的原料药，限值可适当严格至计算值的1/3～1/2[1]，在欧美通常以1/10～1/4作为质量控制的监测限值。参考欧洲药典(EP6.0)和英国药典(BP2010)的最新版本，均规定氯化钠的限值为5 IU/g(1个内毒素国际单位IU与1 EU相当)，故拟订氯化钠细菌内毒素检查的限值为5 EU/g。

2.2 鲎试剂灵敏度复核

按2010年版《中国药典(二部)》附录ⅪE的要求对鲎试剂进行了灵敏度复核，经复核，所用鲎试剂的灵敏度测定值均在0.5 λ～2.0 λ 之间，符合规定，结果见表 1。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果

2.3 供试品稀释浓度范围计算

目前市售鲎试剂灵敏度范围一般在0.5～0.03 EU/mL之间，则供试品溶液最大质量浓度 Cmax=λ0.5/L=(0.5 EU/mL)/(5 EU/g)=0.1 g/mL，供试品溶液最小质量浓度 Cmin= λ0.03/L=(0.03 EU/mL)/(5 EU/g)=0.006 g/mL。

2.4 预干扰试验

将3批氯化钠用细菌内毒素检查用水配制并稀释成0.2，0.1，0.05，0.025，0.0125 g/mL 的系列质量浓度，作为供试品溶液(NPC);同时每一质量浓度下均制备含有2 λ细菌内毒素的系列溶液;作为供试品阳性对照(PPC)，并设阳性对照和阴性对照。结果见表2。预试验结果表明，氯化钠溶液对鲎试剂与细菌内毒素的反应有抑制作用，但当质量浓度稀释至0.05 g/mL以下时，其抑制作用有可能被排除。

表2 氯化钠的预干扰试验结果

2.5 干扰试验

通过预试验的结果，初步确定氯化钠的最大不干扰质量浓度为0.05 g/mL。将氯化钠用细菌内毒素检查用水配制成0.05 g/mL的溶液作为供试品溶液，进行正式干扰试验。使用较低灵敏度(0.25 EU/mL)的鲎试剂，尽量避免供试品所含的内毒素对干扰试验造成的阳性影响。用细菌内毒素检查用水和供试品溶液分别将细菌内毒素工作标准品稀释成 0.5，0.25，0.125，0.0625 EU/mL 的系列浓度，同时各系列分别以细菌内毒素检查用水和供试品溶液作阴性对照，依法检查，结果见表 3。结果表明，ES均在 0.5 λ ～2.0 λ 范围内，且 E t均在0.5 ES～2.0 ES范围内。说明3个批号的氯化钠在0.05 g/mL的质量浓度时对鲎试剂与细菌内毒素的反应无干扰作用。

表3 氯化钠的干扰试验结果

2.6 细菌内毒素检查

根据干扰试验结果和拟订的细菌内毒素限值5 EU/g，采用两个厂家灵敏度为0.25 EU/mL的鲎试剂，对3个批号的氯化钠进行细菌内毒素检查，依法操作[2010年版《中国药典(二部)》附录ⅪE]，结果均符合规定。结果见表4。

表4 氯化钠的细菌内毒素检查结果

3 讨论

预干扰试验以市售鲎试剂灵敏度计算，所得的供试液最大质量浓度 Cmax为0.1 g/mL，但为探索氯化钠的干扰程度，故往上两个质量浓度级(0.2，0.4 g/mL)进行考察。0.4 g/mL 的溶液在室温下为过饱和，故以0.2 g/mL作为起始质量浓度进行预干扰试验。试验证明，氯化钠的最大不干扰质量浓度为0.05 g/mL，可采用凝胶法对氯化钠进行细菌内毒素检查。为提高氯化钠注射制剂临床使用的安全性和质量可控性，建议在对新版《中国药典》进行修订时，考虑增加氯化钠原料药的细菌内毒素检查项。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录212.

[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M].北京:中国医药科技出版社，2010:310－325.