复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠的抗炎作用

谭庆玲

湖北民族学院附属医院核医学科，湖北恩施 445000

复方竹节参片选用土家族名贵中草药竹节参（为五加科植物竹节人参的干燥根茎）为主药，配以淫羊藿、白芍、穿山龙等，经浓缩提取，制备成的复方竹节参糖衣片剂型，临床主要用于治疗类风湿关节炎、骨关节炎以及跌打损伤等各类风湿疼痛病症[1-2]。本文旨在研究复方竹节参片对小鼠佐剂性关节炎（AA）的治疗效果，并观测AA小鼠血清细胞因子IL-6、IL-8、TNF指标的变化情况，探讨其对小鼠实验性关节炎可能的作用机制及抗炎效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种小鼠（由湖北民族学院实验中心提供），共48只，随机将其分为4组，每组12只，其中，模型组（A组）体重（17.14±1.15）g， 雷公藤多苷片对照组 （B组） 体重 （18.05±1.20）g，复方竹节参片高剂量组（C 组）体重（18.14±1.17）g，复方竹节参片低剂量组（D 组）体重（18.09±1.19）g。 各组间体重等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 器材

TL-16G型高速离心机（上海实验仪器厂生产）；精密电子分析天平；容积测量仪（自制）；GC-1200 r放射免疫计数器（安徽科大创新公司生产）；AXIOSKOP2PLUS光学显微镜（德国ZEISS公司生产）。

1.3 药品

复方竹节参片（由湖北民族学院医学院附属医院制剂室提供，批号：080915），制作方法：除去糖衣后粉碎，加水煎制成1∶2的浓缩液后过滤，于滤液中加入95%乙醇并搅拌，冷藏24 h后再过滤，回收乙醇溶液，并浓缩至每毫升含生药2.0 g，最后高压灭菌保存备用；雷公藤多苷片（由湖北省黄石市制药厂生产，批号：070，每片含雷公藤多苷10 mg）；弗氏完全佐剂；TNF、IL-8、IL-6试剂盒 （由中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供）。

1.4 方法

所有实验小鼠均按0.1 ml/只于左后足跖皮内注射费氏完全佐剂致炎，第8天开始灌胃给药，每日1次，连续21 d，其中，关节炎模型组（A组），每只给予生理盐水0.200 ml，阳性药雷公藤多苷片对照组（B组）给药剂量为0.020 g/kg，复方竹节参片高剂量组（C组）给药剂量为6.000 g/kg，复方竹节参片低剂量组给药剂量为3.000 g/kg。

1.5 小鼠佐剂性关节炎模型的关节炎指数分级[3-4]

关节炎指数由轻到重评价：没有红肿为0级；足小趾关节红肿为1级；趾关节和足跖部都红肿为2级；踝关节以下均红肿为3级；包括踝关节全部红肿为4级。该实验从第一次免疫后的第7天开始，每周评分1次。

1.6 指标测定方法[5-6]

足爪体积测量采用排水法。复方竹节参片对病变的抑制作用以足爪肿胀抑制率为依据。耳廓肿胀模型采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀，阳性药采用地塞米松（0.005 g/kg）。病变小鼠外周血IL-8、IL-6、TNF浓度采用放免法测定。小鼠踝关节继发病变者，摘取做病理切片。病理学光镜观察软骨破坏、骨侵蚀，以及关节滑膜组织、炎性细胞浸润情况。

1.7 统计学方法

采用SPSS for Windows 10.0软件对试验数据进行统计学分析，计量资料数据以均数±标准差（）表示，采用t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 病理测定结果

A组：踝关节骨质疏松，滑膜充血、水肿呈不规则增厚，表面可见灶性坏死。踝关节发生明显病变者，可见关节软骨毛糙甚或缺损改变，软骨细胞发生固缩，重者甚至形成软骨空陷窝。滑膜内可见大量中性粒细胞、浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润；B组、C组及D组：踝关节未见明显病理改变，关节软骨面光滑，仅见少量炎性细胞浸润，滑膜细胞轻度增生，但细胞排列整齐，形态规则。

2.2 复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠足踝关节肿胀的影响

致炎后第2天，C组与D组足肿胀程度低于A组 （P＜0.05或P＜0.01）。与雷公藤多苷片相比，大剂量复方竹节参片更能抑制关节肿胀，表明大剂量复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠原发病变的防治效果更显著，并且优于雷公藤多苷片，而低剂量组各时段对AA小鼠的影响不明显。见表1。

表1 复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠足踝关节肿胀的影响（，n=12）

表1 复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠足踝关节肿胀的影响（，n=12）

注：与 A 组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；与 B 组比较，△P＜0.05。

造模后不同时间小鼠右后足肿胀度（mm）第2天 第3天 第7天 第14天 第21天A组B组C组D组组别 剂量（g/kg）-0.0206.0003.0005.66±1.644.47±1.19*4.23±1.12**△4.16±1.08*6.63±1.185.23±1.14*5.12±1.46**△5.29±1.75*8.30±1.727.18±1.40*6.27±1.30**△7.40±1.41*11.11±1.659.30±3.00**8.71±2.11**△9.20±2.16*10.09±2.308.54±1.15**7.29±1.48**△8.20±2.16*

2.3 复方竹节参片对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

复方竹节参片同地塞米松一样，对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用，且复方竹节参片剂量越大，抑制作用越明显。见表2。

2.4 复方竹节参片对佐剂性关节炎模型小鼠外周血细胞因子的影响

A组小鼠血清中 TNF、IL-6、IL-8水平与B组、C组、D组比较明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。灌服复方竹节参片或雷公藤多苷片一周后，病变小鼠血清中IL-6、IL-8水平降低（P＜0.05）。

表2 复方竹节参片对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响（，n=12）

表2 复方竹节参片对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响（，n=12）

注：与 A 组比较，**P＜0.01；与 D 组比较，ΔP＜0.05

A组地塞米松组C组D组组别 剂量（g/kg）-0.0056.0003.000肿胀值（ml）13.84±3.816.44±1.50**8.50±2.40**Δ 11.91±2.60

表3 复方竹节参片对AA小鼠外周血IL-6、IL-8、TNF 的影响（，n=12）

表3 复方竹节参片对AA小鼠外周血IL-6、IL-8、TNF 的影响（，n=12）

注：与 A 组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与 B 组比较，ΔP＜0.05

A组B组C组D组组别 剂量（g/kg）-0.0056.0003.000 IL-6（pg/ml）202.02±27.45158.41±33.60*137.50±34.09**Δ 134.85±23.00**Δ IL-8（ng/ml）1.77±0.201.30±0.16*1.05±0.44**Δ 1.15±0.50**Δ TNF（pg/ml）3.64±0.252.71±0.32*2.79±0.77*2.72±0.34*

3 讨论

类风湿性关节炎（RA）是以全身多处关节对称性慢性增生性滑膜炎症为特征的免疫性疾病。以侵犯关节囊和关节软骨为主而致关节强直畸形。弗氏完全佐剂诱导的小鼠关节炎病理特征和人类风湿性关节炎相似。复方竹节参片治疗类风湿性、风湿性关节炎和骨质增生性、损伤性关节炎等[1]效果显著，具有通络止痛、益气活血、温肾壮骨、祛风除湿的功效。复方竹节参片以竹节参为主要成分，闵静[4]通过动物试验证实竹节参通过降低血中炎性因子而起到明显的抗炎作用。本试验表明复方竹节参和雷公藤片都能显著改善实验小鼠佐剂性关节炎的肿胀程度，降低其关节炎指数，两组比较差异不显著。细胞因子为免疫细胞间的联络“信使”，维持免疫细胞功能的协调运转。本研究结果显示，病变小鼠外周血中的TNF、IL-6、IL-8水平显著升高，复方竹节参片能显著抑制TNF、IL-6、IL-8的释放，从而有助于抗炎因子和促炎因子间的平衡[7-8]，对降低组织破坏和减轻炎症反应有积极作用。同时复方竹节参片与雷公藤多苷片一样能有效改善试验小鼠佐剂性关节炎炎性细胞浸润，降低炎症因子对软骨和骨的侵蚀破坏，显著改善AA小鼠的病变发展，同时，还能抑制IL-6、IL-8、TNF炎症因子的病理性升高。

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