结核散质量标准研究

鲁金凤，姜 丽

(1.吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132001;2.吉林康乃尔药业有限公司，吉林 吉林 132001)

结核散由白及、麦芽、天花粉、异烟肼组方，用于消瘿散结，对各种结核均有很好的治疗作用。原标准中只有显微鉴别，笔者对白及的薄层色谱鉴别和异烟肼的含量测定进行了研究，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;Sartorius Bp211D型电子天平;SB5200型超声振荡器。白及对照药材和异烟肼对照品均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为090625，090712，090819;结核散(市售品);硅胶G板为青岛海洋化工厂生产;其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别[1]

取供试品5 g，加70%甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥至1 mL，作为供试品溶液。取不含白及的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。另取白及对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯 － 甲醇(6 ∶2.5 ∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，放置。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同的桃红色斑点，阴性对照无干扰(图1)。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Apollo C18柱 (250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH至6.0)－甲醇(85∶15);检测波长:262 nm。

2.2.2 溶液制备

精密称取异烟肼对照品，加水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。取供试品5包，混匀，精密称取 0.62 g，置 50 mL量瓶中，加水 30 mL，超声处理 20 min，用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取续滤液3 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取不含异烟肼的阴性样品，按供试品溶液处理方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

图1 薄层色谱图

专属性考察:分别精密吸取阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图2。可见，在该色谱条件下，阴性对照对测定无干扰。

图2 高效液相色谱图

标准曲线制备:精密称取异烟肼对照品，加水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的溶液，精密吸取上述对照品溶液2，5，10，15，20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标(Y)、异烟肼进样量为横坐标(X)绘制标准曲线，得回归方程 Y=－29.4783+3415.34 X，r=1.0000(n=5)。结果表明，异烟肼进样量在0.2～2.0 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积积分值。结果的 RSD=0.2%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，放置 0，2，4，6，8，10 h 后，测定峰面积积分值。结果的 RSD=0.6%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

重现性试验:精密称取同一批号供试品6份，按供试品溶液处理方法制备溶液，依法测定含量。结果供试品中异烟肼含量为25.5 mg/g，RSD=0.5%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量(25.5 mg/g)的供试品约0.31 g，平行取样6份。另精密称取异烟肼对照品50.09 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并制成质量浓度为1.0018 g/L的溶液。分别精密吸取该对照品溶液适量，加入6份供试品中，按供试品溶液的制备方法制备溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 异烟肼加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

分别取3批样品，按供试品溶液和对照品溶液的制备方法制备成溶液，在拟订的色谱条件下测定，计算含量。结果批号为090625，090712，090819 的样品中，异烟肼含量分别为 25.5，26.4，24.9 mg/g。

3 讨论

在含量测定中，对供试品的取样量进行了考察。取样量过多，则不利于过滤，过少则误差大，故选择本方法的取样量。同时考察了0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH至6.0)－甲醇(90∶10)和0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH至6.0)－甲醇(87∶13)两个流动相，发现本方法采用的流动相峰形和时间均较好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅥB.