关于药物异烟肼分析方法的教学讨论

苏倩倩 高 珣 马卫兴

(江苏海洋大学 药学院，江苏 连云港,222005)

异烟肼的化学名称是4-吡啶基甲酰肼，是一种抗结核杆菌的药物，主要用于肺结核病的治疗[1]。异烟肼含量测定方法是药物异烟肼分析的教学内容，也是制剂质量控制的重要组成部分，因此在异烟肼分析方法教学中深入讨论异烟肼分析方法的原理非常必要。本文从异烟肼分子的分离性质、紫外光谱性质、红外光谱性质、氧化还原性质、缩合性质和电荷转移性质深入讨论异烟肼分析方法的来源，为药物分析学习者释疑解惑。

1 分离性质

中国药典(2020版)制定了异烟肼含量测定的标准分析方法-高效液相色谱法(HPLC)，以填充剂十八烷基硅烷键合硅胶作为分离用固定相材料，以体积比为85∶15的用磷酸调pH值至6.0的0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液-甲醇混合溶液作为流动相，进样体积10 μL，采用紫外检测器，检测波长为262 nm[2]。

2 紫外光谱性质

异烟肼是具有吡啶基的杂环共轭体系分子，能在近紫外区吸收紫外光，异烟肼水溶液在263 nm的波长处有最大吸收，可以建立紫外光谱测定异烟肼含量的分析方法，工作曲线线性范围10～30 mg/L，平均回收率为99.2%，RSD为1.67%，用于测定异烟肼片的含量，方法简便，结果准确[3]。

3 红外光谱性质

异烟肼是具有吡啶基和甲酰肼的杂环共轭体系分子，能在红外区吸收红外光，结合数据处理技术，可以建立近红外光谱测定异烟肼含量的分析方法，用于测定异烟肼片中异烟肼含量，所测结果相对误差≤±0.8%，说明近红外光谱法测定结果准确可靠，其优势是这是一种无损检测分析技术[4]。

4 氧化还原性质

氧化剂能与异烟肼的酰肼基发生氧化还原反应，利用这种性质，可以建立氧化还原滴定法、可见光度法、原子吸收光度法、共振光散射法、化学发光分析法、电化学分析法用于测定异烟肼含量的分析方法。

基于溴酸钾与异烟肼在盐酸介质中发生氧化还原反应，2005版中国药典制定了溴酸钾滴定测定异烟肼含量的标准分析方法，采用基准试剂溴酸钾配制标准溶液滴定剂，过量的溴酸钾标准溶液与溶液中提前加入的1滴甲基橙指示剂发生氧化还原反应使甲基橙的偶氮基氧化断裂而褪色，以褪色指示滴定终点，根据溴酸钾标准溶液滴定剂消耗的实际体积计算异烟肼含量[5]。

某些氧化性金属离子(如Cu2+、Ag+和Fe3+)能与异烟肼发生氧化还原反应，基于此可建立异烟肼的分析方法。如异烟肼可将Cu2+还原成Cu+，而新生的Cu+与新亚铜试剂发生络合显色反应生成黄色络合物阳离子，其在454 nm处有最大吸收，测定异烟肼的线性范围为0.1～1.8 μg/mL，用于异烟肼片中异烟肼的含量测定[6]。又如异烟肼可将Ag+还原成Ag单质沉淀，将析出的单质Ag用硝酸溶解，采用原子吸收分光光度法测定Ag，实现原子吸收分光光度测定异烟肼的含量，测定波长328.1 nm，检测限是0.29 μg/mL，用于异烟肼片剂及血清中异烟肼的含量测定[7]。再如异烟肼在一定条件下可以将Fe3+还原成Fe2+，而剩余的Fe3+可与4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚形成有色配合物产生共振光散射光谱，由于Fe3+的减少而导致共振光散射光谱强度降低，建立了共振光散射测定异烟肼含量的分析方法，测定在325 nm 处，工作曲线线性0.05～0.30 μg/mL，用于异烟肼片的测定，结果与药典法(2005版，溴酸钾滴定法)一致[8]。

某些氧化剂(如KIO4和铁氰化钾)能与异烟肼发生氧化还原反应产生化学发光现象，基于此建立化学发光分析测定异烟肼的方法。如在NaOH碱性介质中，KIO4可以直接氧化异烟肼产生化学发光，结合流动注射分析技术，可直接利用化学发光法测定异烟肼[9]。同理，铁氰化钾在碱性介质中也能直接氧化异烟肼产生很强的化学发光，从而实现异烟肼的定量分析，该方法测定的异烟肼线性范围为0.05～6.0 mg/L，检出限为2×10-2mg/L，该法可用于异烟肼片剂及针剂中异烟肼的含量测定[10]。

异烟肼能在多壁碳纳米管-石墨烯纳米复合物修饰的玻碳电极上发生氧化反应，导致氧化峰电流升高，建立线性扫描伏安测定异烟肼的方法，线性范围为1.0×10-7～1.0×10-4mol/L，可用于测定注射液中异烟肼的含量[11]。

5 缩合性质

羰基试剂糠醛能与异烟肼的酰肼基上伯氨基发生缩合反应，具有缩合性质。异烟肼与糠醛缩合反应生成异烟腙或糠醛缩异烟肼Schiff碱[12]，在315 nm 处有最大吸收峰，与异烟肼本身的吸收峰不同，因此可用紫外光度法进行定量分析。

6 电荷转移性质

异烟肼是具有吡啶基和甲酰肼的杂环共轭体系分子，其吡啶氮原子与酰肼基上伯氨基氮原子能作为电子给予体与电子接受体试剂发生电荷转移反应形成电荷转移配合物，具有电荷转移性质[13,14]。利用这种性质，可以建立荷移分光光度法测定异烟肼含量的分析方法。

总之，异烟肼分子具有多种性质，如分离性质、紫外光谱性质、红外光谱性质、氧化还原性质、缩合性质和电荷转移性质，帮助药物分析学习者理解依据这些性质所开发的异烟肼分析方法原理，为未来开发异烟肼分析新方法提供思路。