Twist在乳腺癌中的表达及其临床病理意义

沈阳医学院奉天医院病理科(110024) 孙 虓 白 阳 王 星 王翠芳

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，造成乳腺癌患者死亡的根本原因并不是原发癌的生长，而是肿瘤的转移。近期研究显示，转录因子Twist在肿瘤发生、发展和转移等方面起着重要的作用。我们采用免疫组织化学法检测乳腺组织中Twist的表达情况，探讨其在乳腺癌癌变过程中的意义，以期为乳腺癌治疗开辟新途径。

1 资料与方法

1.1 一般资料 沈阳医学院奉天医院2007年1月至2010年1月女性乳腺手术标本共120例。年龄31～74岁，平均48.53岁。依据WHO2003年乳腺肿瘤组织学分类标准进行分类，其中浸润性导管癌60例，导管不典型增生40例(轻度、中度14例，重度及原位癌26例)，普通导管增生20例。所有病例术前均未做化疗、免疫及放射治疗。

1.2 主要试剂与方法 鼠抗人Twist单克隆抗体(H-81，SC15393)购自 Santa Cruz公司，SP试剂盒及AEC显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。乳腺癌标本经10%甲醛固定、石蜡包埋，4μm厚连续切片。本研究采用SP法进行免疫组化染色，Twist单克隆抗体浓度为1∶200，具体步骤按说明书进行。用已知组织表达抗体作阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断 Twist阳性染色主要位于细胞浆中，少数细胞核中亦有表达。结果判断采用Fromowitz[1]的阳性细胞半定量分级法。

1.4 统计学分析 应用SPSS13.0软件进行Χ2检验或Fisher确切概率法，P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

免疫组织化学SP法结果显示，Twist表达主要定位于乳腺组织的细胞浆。Twist在乳腺普通导管增生(10.0%)、轻度、中度不典型导管增生(14.29%)、重度不典型增生及导管原位癌(38.46%)、浸润性导管癌(58.33%)中呈递增趋势。乳腺普通导管增生与重度不典型增生及原位癌比较，重度不典型增生及原位癌与浸润性导管癌比较，Twist阳性表达的差异均有显著性，P ＜0.05。见图1。

60例浸润性导管癌中Twist阳性表达与患者的年龄、肿瘤大小无相关性，与组织学分级(Χ2=5.487，P=0.019)、临床分期(Χ2=6.334，P=0.012)和淋巴结转移有关(Χ2=6.459，P=0.011)，见表1。

表1 乳腺癌组织中Twist的表达及其与临床病理因素的关系

3 讨论

Rosivatz[2]和 Stasinopoulos[3]的研究结果表明，Twist能通过抑制细胞分化、干预P53肿瘤抑制基因通路、诱导上皮-间质转变等在肿瘤的侵袭和进展中发挥重要作用。Hoek[4]和 Kyo[5]的研究结果表明，Twist过表达与黑色素瘤和子宫内膜癌的预后有关。可见Twist表达在促进细胞增殖、转化及肿瘤形成中发挥重要作用。我们用免疫组织化学法检测Twist在乳腺组织中的表达情况，包括浸润性导管癌60例，导管不典型增生40例(轻度、中度14例，重度及原位癌26例)及普通导管增生20例。结果发现，Twist在乳腺普通导管增生(10.00%)、轻中度不典型导管增生(14.29%)、重度不典型增生及导管原位癌(38.46%)、浸润性导管癌(58.33%)中呈递增趋势。乳腺普通导管增生与重度不典型增生及原位癌比较，重度不典型增生及原位癌与浸润性导管癌比较，Twist蛋白阳性表达的差异均有显著性(P均＜0.05)。60例浸润性导管癌中Twist阳性表达与患者的年龄、肿瘤大小无相关性，与组织学分级(Χ2=5.487，P=0.019)、临床分期(Χ2=6.334，P=0.012)和淋巴结转移有关(Χ2=6.459，P=0.011)。迄今已在多种人类上皮来源肿瘤中发现Twist基因表达增高，并与患者预后关系密切。研究证实，Twist对肿瘤细胞的分裂增殖和侵袭性起着重要的调节作用，它可能是引起肿瘤细胞侵袭和转移的关键分子之一。Twist参与了某些上皮来源肿瘤的发生，并促进其侵袭转移[6]，如前列腺癌[7]、乳腺癌[8]和消化道肿瘤等。Twist基因促进肿瘤发生、发展的机制可能是:1)Twist可作用于P53依赖性和非依赖性通路以及NF-κB通路来调控凋亡，促进肿瘤的形成。2)Twist在转录水平上通过影响E-box启动子的表达，诱导形成EMT[9]，从而抑制E-cadherin的转录，使由E-cadherin所调控的细胞黏附作用失效，促进肿瘤转移[10]。3)Twist上调可增强 VEGF的表达，促进血管生成，提高染色体的不稳定性，促进肿瘤侵袭转移[11]。Yang 等[12]用裸鼠的乳腺癌模型显示，Twist蛋白高表达的乳腺癌细胞系容易发生转移。我们的研究结果表明，Twist阳性表达率在乳腺普通导管增生与重度不典型增生及导管原位癌之间有显著差异，提示Twist可能在乳腺癌的进展中发挥了一定作用。为进一步探讨Twist表达与乳腺癌进展的关系，分析了Twist表达与不同临床病理特征的关系，结果发现，乳腺癌组织中Twist的阳性表达率为58.33% ，与淋巴结的转移情况、临床分期、组织学分级相关，提示Twist参与了乳腺癌的浸润转移，与患者的预后密切相关。Twist在乳腺癌中的表达上调，其准确性能尚需深入的研究，但是证实Twist作为胚胎发生中起重要作用的调节分子具有癌基因功能，支持了肿瘤是由于正常发育异常导致的结果。

综上所述，Twist在乳腺癌癌变过程中可能发挥了重要作用，将其作为靶点将为乳腺癌的治疗提供新思路。

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