壳聚糖对肉仔鸡抗氧化能力及免疫器官指数的影响

枣庄学院生命科学系 刘 梅

枣庄宏宇饲料有限公司 史 挺

山东临沂绿色和美饲料有限公司 刘秋菊

壳聚糖是甲壳素脱乙酰基后的产物，化学名称为1，4-2-氨基-2脱氧-β-D-葡聚糖。壳聚糖具有良好的生物相容性，易被组织吸收，降解产物无毒害。研究表明，壳聚糖作为饲料添加剂，具有降低脂肪代谢、增强免疫等效果，是一类新型的绿色饲料添加剂（罗赞等，2008；刘海英等，2003）。近年来的研究发现，壳聚糖还是一种良好的抗氧化剂。不同相对分子质量壳聚糖对苹果汁中2，2-二苯基-1-苦阱基自由基（DPPH自由基）、羟基自由基、超氧阴离子自由基等的清除效果的研究表明，低相对分子质量的壳聚糖抗氧化活性最高 （刑荣娥等，2005）。本试验研究壳聚糖对肉仔鸡抗氧化能力及免疫器官指数的影响机制。

1 材料与方法

1.1 试验动物与设计 选择96只1日龄AA肉仔鸡，随机分成4个日粮处理组，每个日粮处理组分4个重复，每个重复6只鸡。第1组为对照组，饲喂基础日粮，第2、3、4组分别在日粮中添加50、100、150 mg/kg的壳聚糖。基础日粮参考NRC（1994）肉鸡营养需要配制，基础日粮组成及营养水平见表1。

1.2 饲养管理 试验肉鸡双层笼养，自由采食和饮水，控制舍内温度、湿度和光照，卫生学指标符合鸡的卫生要求。7日龄进行新城疫弱毒苗首免，14日龄进行法氏囊疫苗饮水免疫，21日龄新城疫弱毒苗加强免疫。

表1 基础日粮组成及其营养水平（风干基础）

1.3 样品采集与测定 分别在21、42日龄时（采血前停止喂食12 h），从每组随机取6只肉鸡（雌雄各半），从翅静脉采血，3000 r/min离心10 min分离得血清。装于1.5 mL的eppendorf管中，置–20℃冰箱中保存备用。

1.3.1 血液生化指标测定 血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶 （GSH-Px）、CAT活力的测定采用试剂盒法，所用试剂盒由南京建成生物工程研究所购买。

1.3.2 免疫器官指数测定 分别在21、42日龄从每个处理中随机选取4只鸡（1只/重复）宰杀，完整摘取脾脏、胸腺、法氏囊并称重，用免疫器官的重量占体重的相对重量表示免疫器官指数（g/kg·BW）。

免疫器官指数=（免疫器官鲜重/活重）×100。

1.4 统计分析 数据采用SPSS 11.5统计处理软件进行方差分析，试验结果采用平均值±标准差表示。

2 结果分析

2.1 壳聚糖对肉仔鸡抗氧化能力的影响

2.1.1 壳聚糖对肉仔鸡血清中MDA含量的影响由表2可见，肉鸡血清中MDA的含量，在21日龄时，与对照组相比，各试验组之间肉鸡血清的MDA含量无显著差异 （P＞0.05）。而在42日龄时，与对照组相比，壳聚糖150 mg/kg组肉仔鸡血清中的MDA显著降低7.10%（P<0.05）。

2.1.2 壳聚糖对肉仔鸡血清中SOD、GSH-Px和CAT活力的影响 由图1可知，在21日龄时，与对照组相比，各试验组之间肉鸡血清的SOD含量无显著性差异（P＞0.05）。而在42日龄时，与对照组相比，壳聚糖100 mg/kg组和150 mg/kg组鸡血清中的SOD活力显著上升（P<0.05）。

表2 壳聚糖对肉鸡仔血清中MDA含量的影响mmol/mL

由图2可知，在21日龄和42日龄时，与对照组相比，各试验组之间肉鸡血清的GSH-Px含量均无显著性差异（P＞0.05）。

由图3可知，在21日龄和42日龄时，与对照组相比，壳聚糖100 mg/kg组和150 mg/kg组肉仔鸡血清中的CAT显著上升（P<0.05）。

图1 壳聚糖对肉仔鸡血清中SOD活力的影响

图2 壳聚糖对肉仔鸡血清中GSH-Px活力的影响

图3 壳聚糖对肉仔鸡血清中CAT活力的影响

2.2 壳聚糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响 由表3可知，21日龄时，各处理组的脾脏指数差异不显著（P＞0.05），而42日龄时各组间表现出显著差异 （P＜0.05），其中 100 mg/kg壳聚糖组和150 mg/kg壳聚糖组较高，分别比对照组高40.7%和37.2%。各处理组肉仔鸡的法氏囊指数在整个试验期间均未表现出显著性差异（P＞0.05）。在21日龄时，壳聚糖150 mg/kg组的法氏囊指数最高；42日龄时，仍以100 mg/kg壳聚糖组和150 mg/kg壳聚糖组较高。胸腺指数在21日龄时组间差异不显著（P＞0.05），但在42日龄时，壳聚糖100 mg/kg组和壳聚糖150 mg/kg组要显著高于其他各组，分别比对照组高 63.8%和34.9%（P＜0.05）。

表3 壳聚糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响%

3 讨论

3.1 壳聚糖对肉仔鸡抗氧化能力的影响 生物体内存在多种防御自由基损伤的抗氧化酶类，GSH-Px、SOD及 CAT是比较重要的几种。而MDA为脂质过氧化产物 （LPO），因此测定MDA的量可反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映细胞损伤的程度（王述柏等，1998）。

SOD是酶促抗氧化体系中非常重要的一种抗氧化剂，其活性的高低可以反映机体清除氧自由基的能力（王镜岩等，2002），往往与GSH-Px协调工作，阻止氧自由基启动的自由基链锁反应。卢美鸾等（2008）报道，添加低分子量壳聚糖的试验组中肉鸡血清中SOD酶活力显著提高，说明壳聚糖可通过调节相关抗氧化防御酶系活性来降低机体的脂质过氧化水平，进而使机体免受脂质过氧化损伤。本试验表明，在21日龄时，与对照组相比，各试验组之间肉鸡血清的SOD含量无显著差异 （P＞0.05）。而在42日龄时，与对照组相比，100 mg/kg组和150 mg/kg组肉仔鸡血清中的SOD显著上升（P＜0.05）。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。正常情况下，GSH-Px特异性地催化GSH对 H2O2的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用，属于体内主要的抗氧化酶之一 （王镜岩等，2002）。刘静娜（2009）报道，高脂饲粮组（HF 组）大鼠血清GSH-Px活性显著低于正常饲粮组（NF组），表明机体对氧化产物清除能力减弱；壳聚糖组 （CIS组）大鼠血清 GSH-Px活性与 NF组相近，表明壳聚糖能增强 GSH-Px活性，减少过氧化对机体的伤害。本试验结果表明，在21日龄和42日龄时，与对照组相比，各试验组之间肉鸡血清的GSH-Px含量均无显著性差异 （P＞0.05）。

过氧化氢酶（CAT）是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶，能清除氧自由基反应生成过氧化氢，使其成为无毒的水，保护机体组织免受损害。CAT属于机体抗氧化系统中酶系统的重要组成之一，在清除自由基的过程中，与SOD具有协同作用。因而CAT含量的多少，亦为衡量机体抗氧化能力大小的重要因素（王镜岩等，2002）。刘静娜（2009）报道，高脂饲粮组（HF 组）大鼠血清 CAT活性显著低于正常饲粮组（NF组），表明机体清除过氧化氢的能力减弱；壳聚糖组（CIS组）大鼠血清 CAT活性在正常饲粮（NF组）和高脂饲粮组（HF组）之间，表明壳聚糖能适当增强CAT活性。本试验结果表明，在21日龄和42日龄时，与对照组相比，壳聚糖100 mg/kg组和150 mg/kg组肉仔鸡血清中的CAT显著上升（P＜0.05）。

自由基造成生物体系损伤的重要因素是产生脂质过氧化物，其中最主要的是丙二醛（MDA）。MDA作为细胞膜不饱和脂肪酸过氧化反应的最终产物，可反映机体内脂质过氧化的程度，即MDA含量的增减代表着脂质过氧化作用的强弱，间接反映出细胞的受损程度。卢美鸾等（2008）报道，添加低分子量壳聚糖的试验组中肉鸡血清中MDA含量影响不显著。刘静娜（2009）报道，高脂饲粮组（HF组）大鼠的血清MDA含量显著高于脂质过氧化物的产物MDA含量显著升高；壳聚糖组（CIS组）大鼠血清 MDA含量水平与 NF组相近，说明壳聚糖能抑制脂质过氧化。本试验结果表明，在21日龄时，与对照组相比，各试验组之间肉鸡血清的MDA含量无显著性差异（P＞0.05）。而在42日龄时，与对照组相比，壳聚糖150 mg/kg组肉仔鸡血清中的MDA显著降低7.10%（P<0.05）。

3.2 壳聚糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响 法氏囊指数、脾脏指数和胸腺指数是从免疫器官发育的角度来评价机体免疫状态的指标。王秀武等（2002）研究发现，在肉仔鸡日粮中添加 0.1%的壳聚糖显著增加了胸腺和法氏囊的相对重量。Huang等（2007）研究发现，向日粮中添加不同剂量（50、100、150 mg/kg）的低分子壳聚糖对肉鸡的免疫器官发育具有促进作用。这与本试验的结果一致。

4 结论

肉仔鸡日粮中添加壳聚糖能够提高肉仔鸡的抗氧化能力，增强免疫功能。

[1]刘海英，于淼，杨桂琴.壳聚糖对肉鸡生产性能、脂肪代谢的影响[J].饲料博览，2003，5：1 ～ 4.

[2]刘静娜.壳聚糖抗脂作用机理研究：[博士学位论文][D].无锡：江南大学，2009.

[3]卢美鸾，邱晓燕，郑森林等.壳聚糖对肉鸡抗氧化能力及生产性能的作用[J].生态学杂志，2008，27（10）：1749 ～ 1752.

[4]罗赞，贺建华.壳聚糖在肉鸡生产中的应用[J].中国饲料，2008，13：21～23.

[5]王镜岩，朱圣庚，徐长发.生物化学，第三版[M].北京：高等教育出版社，2002.

[6]王述柏，王宝维，张丽英，等.壳聚糖对肉鸡生产性能及血液生化指标的影响[J].中国饲料，1998，12：19 ～ 21.

[7]王秀武，杜昱光，白雪芳，等.壳聚糖对肉仔鸡矿物质代谢、肠道菌群、免疫器官及肠黏膜形态的影响[J].动物营养学报，2002，16：62

[8]刑荣娥，刘松，于华华，等.不同分子量壳聚糖和壳聚糖硫酸酯的抗氧化活性[J].应用化学，2005，22（9）：958 ～ 961.

[9]Huang R L，Deng Z Y，Yang C B.Dietary oligochitosan supplementation enhances immune status of broilers[J].Sci Food Agric，2007，87：153 ～ 159.