HPLC测定天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量

司 娜 刘 文 宋信莉 徐 剑 陈龙富

贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002

天麻钩藤饮出自《杂病证治新义》，具有平肝潜阳、补益肝肾、清热活血的作用，是中医治疗肝阳上亢的经典代表方。六版《中医诊断学》定义肝阳上亢为“由于肝肾阴亏，肝阳扰于上所表现的上实下虚症候。”阴虚阳亢确实反映了高血压病的主要病理基础［1］。

有报道［2－3］称，杜仲的有效降压成分有木质素类的成分松脂醇二葡萄糖苷。天麻钩藤饮中天麻和杜仲两味药的主要有效的降压成分是天麻素和松脂醇二葡萄糖苷。本实验采用HPLC法同时测定天麻钩藤饮复方中两个有效降压成分的含量，方法简捷稳定，为天麻钩藤饮复方的质量控制提供了检测方法。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪 (日本岛津LC－20AT，检测器:SPD－20A检测器)，电子天平 (日本岛津AUY220)，JA2003型电子天平 (上海良平仪器仪表有限公司)。

乙腈为色谱纯 (TEDIA COMPANY．INC);磷酸、乙醇为分析纯 (重庆川东化工有限公司);水为纯净水 (杭州娃哈哈有限公司)。天麻素、松脂醇二葡萄糖苷对照品 (中国药品生物制品检定所，批号分别为110807－200205和111537－200502，供含量测定用)。药材均为市售 (据2010年版《中国药典》一部各品种项下要求进行检测，为正品)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Inertsil ODS－3分析柱 (250mm×4.6mm，5μm)，流动相:乙腈 (A):0.2%磷酸水(B)，梯度洗脱 (A－B=2:98保持20min，20－22min，A－B=2:98－11:89);流速1.2ml/min;检测波长220nm;柱温30℃;进样体积10μL;理论板数:天麻素不低于5000，松脂醇二葡萄糖苷不低于10000。在此条件下，样品分离度良好。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品4.83mg，松脂醇二葡萄糖苷对照品1.53mg置25mL容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液 (天麻素:0.1932mg/mL;松脂醇二葡萄糖苷:0.0612mg/mL)。精密称取天麻素对照品1.54mg，置10ml容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，作为天麻素的对照品溶液 (0.154mg/mL)。另精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品1.04mg，置10mL容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，作为松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液 (0.104mg/mL)。

2.3 供试品溶液的制备 按处方量称取复方12味药 (钩藤后下)，12倍水煎煮三次，每次30min，合并水提液浓缩，置真空干燥箱里干燥得干浸膏，将干浸膏打粉并过100目筛。称取浸膏粉1g，精密称定，加入稀乙醇50mL称重，加热回流3小时，放冷补重，过滤取续滤液10mL挥干，以流动相溶解并转移至10mL容量瓶中，定容得供试品溶液。

2.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品液1、2、5、8、10mL，分别置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成系列混合对照品液。按2.1色谱条件，各精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积A为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得天麻素回归方程为:y=15018746x+29741;r=0.9997，线性范围为19.3－193.2 μg/mL;松脂醇二葡萄糖苷回归方程为:y=10990200x+4315，r=0.9999，线性范围为 6.12－61.2μg/mL。

2.5 精密度考察 取上述混合对照品，按2.1色谱条件重复进样6次，分别测定峰面积积分值，结果天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分别为0.95%和1.15%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一份供试样品溶液分别在配制后0、2、6、12、24h进样10μL，记录峰面积积分值，结果天麻素峰面积的RSD为0.79%，松脂醇二葡萄糖苷峰面积的RSD为2.43%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验 取某一批供试品6份，按提取方法提取测定，计算其质量分数，天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分别为1.56%和2.59%。

表1 回收率实验结果

2.8 加样回收率试验 平行取同一批供试品 (天麻素0.606%，松脂醇二葡萄糖苷0.0078%)粉末6份，每份1g，精密称定，分别加入对照品 (天麻素0.193mg/mL，松脂醇二葡萄糖苷0.0612mg/mL)0.2mL，按样品测定方法进行测定，计算天麻素和麻松脂醇二葡萄糖苷的回收率，结果见表1。

2.9 样品的测定 按处方称取天麻钩藤饮处方3份，按2.3项下方法制备得3份供试品溶液。分别进样10μL，测得天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的峰面积，计算质量分数，结果见表2。

表2 3批样品测定结果

3 讨论

3.1 在样品检测波长的选择上，供试品色谱图中的天麻素和松脂醇二葡萄糖苷色谱峰的紫外光谱与对照一致，均在220nm处有最大吸收，故确定检测波长为220nm。

3.2 在样品提取方法选择上，分别选择了稀乙醇加热回流提取3h，60%甲醇回流提取1h后氯仿萃取3次，超声40分钟，50%甲醇回流1h，氯仿索氏提取6h后甲醇索提6h等多种方法，对各方法制得的供试品溶液进行检测，结果表明稀乙醇回流提取3h，天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量最高，且得到的图谱峰型良好。

3.3 在流动相的选择上，分别选择了乙腈－0.5%甲酸，乙腈－0.1%磷酸，甲醇－水，乙腈－水等流动相系统，最终选择乙腈－0.2%磷酸溶液为流动相，以梯度洗脱法将待测的两个成分与杂质分离，并得到较好的峰型。

3.4 本实验首次将天麻素和松脂醇二葡萄糖苷作为天麻钩藤饮复方的含量测定指标，方法简便，准确可行。填补了单一指标成分作为复方质量控制手段的不足，提升了天麻钩藤饮复方质量的控制方法。

［1］胡世云．天麻钩藤饮治疗高血压的研究进展［J］．时珍国医国药，2002，13(5):307．

［2］罗丽芳，吴卫华，欧阳东生，等．杜仲的降压成分及降压机制［J］．中草药，2006，37(1):150－152．

［3］江春艳，许激扬，卞筱泓，等．杜仲降血压成分的组合及血管舒张作用［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(6):218－220．