反相离子对高效液相色谱法测定盐酸乙胺丁醇片中盐酸乙胺丁醇含量*

薛士荣

(天津市大港药品检验所，大港 300270)

盐酸乙胺丁醇是一种抗结核病药物，常与异烟肼、链霉素等联合用药，以增强疗效，并延缓细菌耐药性的产生。由于盐酸乙胺丁醇没有紫外吸收官能团，不能通过常规的高效液相色谱-紫外检测法进行检测，《中国药典》2005年版中是采用非水滴定法进行含量测定[1]。本文根据盐酸乙胺丁醇与铜离子络合得到的络合物有较强的紫外吸收,在酸性条件下该络合物与庚烷磺酸钠形成离子对,用反相离子对色谱法可测定盐酸乙胺丁醇的含量[2-4]。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪 LC-2010C，岛津高效液相色谱仪工作站LC-Solution，盐酸乙胺丁醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号100165-200103)，四氢呋喃、磷酸、庚烷磺酸钠均为色谱纯，硫酸铜为分析纯，水为纯化水。盐酸乙胺丁醇片(沈阳某药厂，批号0902101、0909131、0910111)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Diamond C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：四氢呋喃-0.4%庚烷磺酸钠(含有0.016%硫酸铜,用磷酸调pH至4.5±0.5)(25∶75)；流速1.0 ml/min;检测波长 258 nm;柱温:40 ℃，进样量20 μl。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液的制备 取盐酸乙胺丁醇对照品置干燥箱中105 ℃干燥2 h后，精密称取9.87 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含0.197 4 mg盐酸乙胺丁醇的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 取本品10片,研成细粉,混合均匀,精密称取适量(约相当于含盐酸乙胺丁醇20 mg)置于100 ml量瓶中,加入水适量,振摇使主药溶解,再用水稀释至刻度,摇匀,过滤,作为供试品溶液。

2.2.3空白辅料溶液的制备 按处方比例制备不含盐酸乙胺丁醇的空白样品，按“2.2.2”项下方法制成空白辅料溶液。精密量取对照品溶液、供试品溶液和空白溶液各20 μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。色谱见图1。

1.盐酸乙胺丁醇

2.3线性关系的考查 精密吸取含有2.55 mg/ml盐酸乙胺丁醇对照品溶液1、2、4、6、8和10 ml，分别置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度摇匀。按“2.1”项下的色谱条件，分别进样20 μl，记录峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归分析，得回归方程Y=16 129 145.2X-11 184.9(r=0.999 6)。结果表明：盐酸乙胺丁醇浓度在0.051～0.51 mg/ml范围时，线性关系良好。

2.4精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样5次，测得峰面积值的RSD为0.06%，表明进样精密度良好。

2.5重复性试验 取同一批样品(批号0910111)6份，按“2.2.2”项下方法配制供试品溶液，采用“2.1”项下色谱条件分别测定盐酸乙胺丁醇的含量，结果测得盐酸乙胺丁醇的平均含量为97.99%，RSD为0.08%。表明本方法重现性良好。

2.6稳定性试验 取样品(批号0910111)，按“2.2.2”项下方法配制，每隔3 h进样1次，共5次，结果RSD为0.18%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7加样回收 精密称取已知含量同一批样品(批号0910111)细粉约相当于含盐酸乙胺丁醇10 mg(本法测得样品含量97.99%)共6份，分别精密加入浓度为1.02 mg/ml盐酸乙胺丁醇对照品溶液10 ml。按“2.2.2”项下方法配制，按“2.1”色谱条件测定盐酸乙胺丁醇的含量，盐酸乙胺丁醇的平均回收率为99.4%，RSD为0.68%。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

2.8含量测定 取3批样品，分别按供试品溶液的制备方法制备待测溶液。精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算样品中盐酸乙胺丁醇的含量，结果见表2。

表2 盐酸乙胺丁醇片剂含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1流动相的选择 分别采用乙腈、四氢呋喃为有机相试验，前者峰形不好，理论塔板数偏低。四氢呋喃虽黏度稍大，但分离度、峰形均很好，保留时间稳定，故选择四氢呋喃为有机相。

3.2流动相pH的影响 在本实验中,考查了流动相不同pH值(3.0、4.0、5.0、6.0用磷酸或氨水调节)对测定的影响。当流动相的pH值逐渐增大时, EMB的峰形随之变得尖锐和狭窄。然而,当pH值调节为4～5时,色谱图的峰形变化不大，并且理论塔板数(n)均大于6 000、拖尾因子(T)均在0.95～1.05之间。故选择流动相pH值为4.5±0.5。

3.3含量测定方法的选择 本文测定盐酸乙胺丁醇片含量用《中国药典》2005年版方法和HPLC法做了比较。《中国药典》方法采用三氯甲烷多次提取的非水滴定法，其中有机溶剂的大量使用易对人体造成危害，并且在提取液滤过时，取无水硫酸钠的量对结果也有一定的影响，不易得到平行结果，此法操作较烦琐。HPLC法测定了盐酸乙胺丁醇片的含量，溶剂为水，方法简便准确，灵敏度高。适用于盐酸乙胺丁醇片的质量控制。

1 中国药典. 二部.2005：456

2 孙进，宋洪涛，张天虹，等.柱前衍生化高效液相色谱法测定固定剂量复方抗结核制剂中盐酸乙胺丁醇的含量和溶出度.色谱，2006,24(2)：164

3 戚燕,杨庆云,吴松. 反相离子对高效液相色谱法测定四联抗结核复方制剂中盐酸乙胺丁醇的含量.药物分析杂志，2009,29(4):645

4 赵瑞仙，胡萍，吴秀玲，等.RP-HPLC法测定盐酸乙胺丁醇片的含量.大理学院学报，2007,6(10):10