HPLC法测定复方益肾胶囊中马钱苷的含量*

东 红，刘 毅

(1.天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂，天津 300457； 2.天津药物研究院，天津 300193)

复方益肾胶囊是由山茱萸、枸杞、熟地黄、骨碎补等多味中药制成的复方制剂，其主要组成药味山茱萸具有补肝肾的功效，以往选定山茱萸中的熊果酸作为含量测定指标，但根据药理研究，熊果酸是降血糖的有效成分[1]，且专属性不强，而马钱苷为山茱萸中具有调节机体免疫功能的主要活性成分[2]，故选择马钱苷作为控制本品质量的指标成分。有关马钱苷的含量测定，已有报道，方法包括薄层扫描法、高效液相色谱法[2，3]等。本试验采用高效液相色谱法对复方益肾胶囊中马钱苷含量进行定量分析，建立了该产品的质量标准定量控制方法。该方法具有专属性强、分离效果好、灵敏准确等优点。

1 仪器和试药

HP1100系列高效液相色谱仪，G1310A泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1314A紫外检测器，HP1100色谱工作站。马钱苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号111640-200401 ，纯度98%以上)，复方益肾胶囊(批号为090515，090518，090522)及阴性样品由本实验室自制。乙腈为色谱纯，水为去离子水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Kromasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)天和填装；流动相：乙腈-水(12∶88)；检测波长：238 nm；体积流量：1.0 ml/min；柱温：室温。

2.2对照品溶液的制备 精密称取马钱苷对照品11.57 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.2314 mg/ml的溶液，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液1ml，置10 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备 取复方益肾胶囊5粒，倾出内容物，混匀，取约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，加热回流20 min，取下，放冷，称重，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀；滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.4阴性溶液的制备 取除去山茱萸的其余药味，按处方配比，照制备工艺制成缺山茱萸的阴性样品，按供试品溶液的制备方法处理，作为阴性溶液。按上述色谱条件测定，结果表明，阴性溶液在马钱苷色谱峰相应位置上无色谱峰，阴性溶液无干扰，见图1。

1．马钱苷

2.5线性关系考察 精密量取马钱苷对照品储备液(0.2314 mg/ml)0.5、1.0、2.0、3.0和5.0 ml分别置10 ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μl，测定峰面积。以马钱苷的量(μg) 为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程Y=1 598.1X+10.2(r=0.999 9)。结果表明：在0.2314～2.314 μg范围内，马钱苷峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

2.6精密度试验 精密吸取同一供试品溶液20 μl，重复进样6次，记录马钱苷峰面积值，计算其RSD值为0.58%。

2.7稳定性试验 取同一供试品溶液于0、1、2、4、8和24 h分别测定，每次进样20 μl，记录马钱苷的峰面积，结果其RSD值为1.56%，表明供试品溶液在24 h内保持稳定。

2.8重现性试验 按供试品溶液的制备方法，对同一批号的样品分别制备6份供试品溶液，进样20 μl测定，计算马钱苷的含量，结果其RSD值为0.86%。

2.9回收率试验 采用加样回收法。取已知马钱苷含量的复方益肾胶囊090518批内容物0.1 g，精密称定6份，分别精密加入马钱苷对照品溶液(0.231 4 mg/ml)1.0 ml，照供试品溶液制备方法制备，进样20 μl测定，结果平均回收率为99.55%，RSD为0.91%。见表1。

2.10样品的测定 取3批不同批号样品，按供试品溶液制备方法操作，即得供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20 μl，按上述色谱条件测定马钱苷的含量，结果见表2。

表1 马钱苷回收率试验结果

表2 复方益肾胶囊中马钱苷的含量测定结果(n=2)

3 讨论

采用几种样品提取溶剂进行考察，结果，用甲醇作提取溶剂，含量较低，而且，色谱峰峰底过宽；70%甲醇、50%甲醇和30%甲醇作提取溶剂三者含量结果没有显著性差异，考虑到本品中有水提和醇提两种工艺，因此采用50%甲醇作为提取溶剂。在本实验色谱条件下，制剂中马钱苷与其他组分间有较好的分离度，而且，样品分析时间短，准确度、精密度均较好，完全可以用于该产品的定量控制方法。

1 张明发，沈雅琴．齐墩果酸和熊果酸的抗糖尿病药理．上海医药，2010，31(8)：347

2 宋梅．山茱萸含量测定和药理作用研究进展．江苏中医药，2010，42(9)：80.

3 屠万倩，张留记，刘怡，等.知柏地黄泡腾颗粒的质量标准研究.中国新药杂志，2010，19(5)：439