食管鳞状细胞癌组织中PTEN、E-cadherin和CD44v6蛋白的表达

张思森，张谢夫，张云汉

1)郑州大学第一附属医院普通外科郑州450052 2)郑州人民医院普通外科 郑州450003 3)郑州大学第一附属医院病理科;河南省肿瘤病理重点实验室郑州450052

食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一。食管癌浸润及转移是致死的主要原因，因此，对食管癌浸润转移机制的探讨已成为研究热点之一。目前的研究主要集中于细胞与细胞间黏附功能的丧失和恶性肿瘤细胞突破基底膜向远处游走的过程等相关因素。PTEN是继p53、pRb、p16后又一重要抑癌基因，最早由Li等［1］从原发性乳癌、前列腺癌以及胶质母细胞瘤细胞株克隆得到，是迄今为止惟一具有酪氨酸、磷酸丝氨酸/苏氨酸双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因。E-cadherin是上皮细胞中的黏附分子，对维持正常上皮细胞形态和结构完整性起着重要作用，有抑制肿瘤转移的功能［2］。CD44v6是一种变异型CD44分子，主要介导细胞与细胞及细胞外基质间的黏附作用，其过度表达可使肿瘤细胞获得转移潜能［3］。作者探讨了PTEN、E-cadherin和CD44v6的表达与食管癌发生、发展及浸润转移的关系，旨在寻求早期食管癌浸润转移指标及抑制食管癌浸润转移的有效方法。

1 材料与方法

1.1 标本来源 食管癌标本52例，取自食管癌高发区安阳市肿瘤医院2002年8月至10月的手术切除标本，标本离体0.5～1.0 h内，冰上分离切取癌组织，常规石蜡包埋，3 μm厚切片。52例中男32例，女20例，年龄 38 ～77(58.6 ±16.3)岁;伴有淋巴结转移20例，无淋巴结转移32例;高分化9例，中分化13例，低分化30例;浸润达浅肌层11例，深肌层11例和纤维膜30例;经病理证实均为食管鳞状细胞癌。另取该院同期23例癌旁中重度不典型增生标本和39例正常食管黏膜标本。患者术前均未接受化疗、放疗及其他治疗。

1.2 PTEN、E-cadherin、CD44v6检测 采用免疫组化 SP法检测。兔抗人 PTEN、E-cadherin及CD44v6多克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术工程有限公司，SP免疫组化试剂盒为武汉博士德生物技术有限公司产品，PTEN、E-cadherin、CD44v6一抗均按1∶100稀释。实验步骤按试剂盒说明书进行。用已知的食管鳞状细胞癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 判定标准 PTEN蛋白阳性细胞表现为胞核淡黄色或棕黄色颗粒状着色，胞质内少量着色。E-cadherin蛋白阳性细胞表现为胞膜和胞质棕褐色着色。CD44v6蛋白阳性细胞表现为胞膜上粗细一致的棕黄色颗粒样着色，可出现少量胞质着色。在高倍镜下(400×)选取切片平展、细胞形态和组织结构清晰的5个视野，共计数100个细胞，计算阳性细胞百分比，阳性细胞百分比＞10%为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 10.0进行统计学处理。不同组织间3种蛋白阳性表达率的比较采用χ2检验或精确概率法，癌组织中3种蛋白表达的关系采用列联系数评价，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 PTEN、E-cadherin和CD44v6蛋白在正常食管黏膜、癌旁不典型增生和食管鳞状细胞癌组织的表达 见表1。

2.2 PTEN、E-cadherin、CD44v6 蛋白表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系 见表2。

2.3 PTEN、E-cadherin与CD44v6蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达的关联性 见表3～5。

表1 食管正常黏膜、癌旁不典型增生和食管鳞状细胞癌中PTEN、E-cadherin、CD44v6蛋白的表达例(%)

表2 PTEN、E-cadherin和CD44v6蛋白的表达与食管鳞状细胞癌临床病理因素的关系 例(%)

表3 PTEN、E-cadherin蛋白在癌组织中表达的关系 例

表4 PTEN、CD44v6蛋白在癌组织中表达的关系 例

表5 E-cadherin、CD44v6蛋白在癌组织中表达的关系 例

3 讨论

食管癌的发生、发展是个多步骤、多因素的复杂过程，在此过程中，抑癌基因的缺失或表达失调是其发生发展的重要原因之一。恶性肿瘤组织中PTEN主要通过基因的突变、缺失或甲基化而失活，其失活可以发生在 DNA、mRNA 和蛋白三个水平［4］，而PTEN基因突变在食管癌组织中的发生频率较低。研究［5］发现食管癌组织中PTEN基因在转录水平表达没有改变，因此，在蛋白水平研究PTEN与食管癌的关系可能有重要意义。近年来在一些消化道恶性肿瘤如胃癌、结肠癌等的研究中发现PTEN基因突变比较常见［6］，但这些肿瘤的组织学类型均为腺癌，而食管癌多为鳞状细胞癌，PTEN基因突变在食管癌组织的低频率发生是否与此有关值得探讨。该研究结果显示食管鳞状细胞癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率明显低于癌旁不典型增生和正常食管黏膜组织;且PTEN蛋白阳性表达率从高分化癌、中分化癌到低分化癌逐渐降低，无淋巴结转移者的阳性表达率高于有淋巴结转移者，随浸润深度的增加阳性表达率也逐渐降低。以上结果表明PTEN的表达与食管鳞状细胞癌的恶性程度、浸润深度及转移潜能有关。

近年来在乳癌、甲状腺乳头状癌、膀胱癌、前列腺癌、大肠癌及鼻咽癌等肿瘤的研究［7-9］中证实，E-cadherin表达降低与癌的分化、侵袭和淋巴结转移有显著的相关性。该研究结果显示，食管鳞状细胞癌组织中E-cadherin表达水平显著低于正常食管黏膜和癌旁不典型增生组织;低分化癌组织中E-cadherin的表达低于中、高分化者，有淋巴结转移者E-cadherin表达水平低于无淋巴结转移者，并且随着浸润深度的加深，E-cadherin阳性表达率亦下降。因此推测癌组织中E-cadherin的表达下降与肿瘤分化程度、发展和转移密切相关。肿瘤细胞E-cadherin阳性表达不利于其脱离转移，E-cadherin低表达可能与不良预后有关。但最新研究［10］发现，血清中可溶性E-cadherin的水平与食管鳞状细胞癌分化程度、发展和淋巴结转移没有显著相关性。因此E-cadherin蛋白能否作为食管鳞状细胞癌预后的一个独立预测因子有待进一步研究。

已有一些研究［11-13］报道CD44v6的过表达与肺癌、胃癌、结肠癌等肿瘤的浸润和转移相关。该研究结果显示，CD44v6在食管鳞状细胞癌组织中表达明显上调，并随着癌组织分化程度的降低和浸润深度的增加而逐渐升高，有淋巴结转移者阳性表达率高于无转移者。说明CD44v6的阳性表达与食管鳞状细胞癌的分化、浸润和淋巴结转移有关，提示CD44v6的高表达是预示食管癌预后不良的标志。

作者还发现，食管鳞状细胞癌组织中PTEN与E-cadherin蛋白的表达呈正关联，而CD44v6蛋白的表达分别与PTEN、E-cadherin蛋白呈负关联。再次说明恶性肿瘤的侵袭转移是一个复杂、连续、多基因协同的过程，肿瘤的发生、发展和转移的各个阶段至少有两个或两个以上功能不同的异常激活的癌基因各自发挥着不同作用，协同促进了细胞的癌变和转移。联合检测这3项指标对食管癌的预后判断具有重要的参考价值，对食管癌治疗的临床实践具有一定的指导意义。

［1］Li J，Yen C，Liaw D，et al.PTEN，a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain，breast，and prostate cancer［J］.Science，1997，275(5308):1943

［2］Berx G，van Roy F.Involvement of members of the cadherin superfamily in cancer［J］.Cold Spring Harb Perspect Biol，2009，1(6):a003129

［3］Orian-Rousseau V.CD44，a therapeutic target for metastasising tumours［J］.Eur J Cancer，2010，46(7):1271

［4］Leslie NR，Spinelli L，Tibarewal P，et al.Indirect mechanisms of carcinogenesis via downregulation of PTEN function［J］.Adv Enzyme Regul，2009，50(1):112

［5］Ding Y，Shimada Y，Kano M，et al.PTEN/MMAC1 expression in esophageal squamous cell carcinomas［J］.Int J Oncol，2000，17(4):695

［6］Liu W，Zhou Y，Reske SN，et al.PTEN mutation:many birds with one stone in tumorigenesis［J］.Anticancer Res，2008，28(6A):3613

［7］Yap AS，Crampton MS，Hardin J.Making and breaking contacts:the cellular biology of cadherin regulation［J］.Curr Opin Cell Biol，2007，19(5):508

［8］Nozawa N，Hashimoto S，Nakashima Y，et al.Immunohistochemical alpha-and beta-catenin and E-cadherin expression and their clinicopathological significance in human lung adenocarcinoma［J］.Pathol Res Pract，2006，202(9):639

［9］Salon C，Moro D，Lantuejoul S，et al.E-cadherin-betacatenin adhesion complex in neuroendocrine tumors of the lung:a suggested role upon local invasion and metastasis［J］.Hum Pathol，2004，35(9):1148

［10］Chung Y，Law S，Kwong DL，et al.Serum soluble E-cadherin is a potential prognostic marker in esophageal squamous cell carcinoma［J］.Dis Esophagus，2010，24(1):49

［11］Situ D，Long H，Lin P，et al.Expression and prognostic relevance of CD44v6 in stage I non-small cell lung carcinoma［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2010，136(8):1213

［12］Okayama H，Kumamoto K，Saitou K，et al.CD44v6，MMP-7 and nuclear Cdx2 are significant biomarkers for prediction of lymph node metastasis in primary gastric cancer［J］.Oncol Rep，2009，22(4):745

［13］Amirghofran Z，Jalali SA，Hosseini SV，et al.Evaluation of CD44 and CD44v6 in colorectal carcinoma patients:soluble forms in relation to tumor tissue expression and metastasis［J］.J Gastrointest Cancer，2008，39(1/4):73