助脾散精复方颗粒对胰岛素抵抗模型大鼠海马及皮质TNF-α、IL-1β 水平的影响

第五永长 许建秦 贾妮

任何与慢性炎症有关的过程都会削弱胰岛素作用，造成胰岛素抵抗的产生;作为恶性循环，胰岛素抵抗又会使炎症恶化引起一系列机体内环境的改变［1］。在胰岛素抵抗与老年性痴呆(Alzheimer’s disease，AD)联系的病理生理机制中，炎症起着非常重要的作用。研究表明，AD患者存在慢性的中枢神经系统炎症免疫反应。本实验观察了具有改善胰岛素敏感性作用的助脾散精复方颗粒对胰岛素抵抗模型大鼠海马及皮质炎症因子TNF-α、IL-1β水平的影响，以期探索干预胰岛素抵抗相关的AD病理进展的新方法。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

助脾散精复方颗粒由人参、苍术、黄连、虎杖等药物组成(1 g提取物颗粒相当于2.94 g生药)，由陕西中医学院附属医院制剂中心代加工。链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)，Merck公司产品，批号:S0130。主要试剂:ELISA法TNF-α、IL-1β测定试剂盒，武汉博士德生物工程公司产品。

1.2 动物与分组

健康雄性清洁级SD大鼠60只，约2月龄，由第四军医大学实验中心提供，实验动物合格证号0034642。

适应性喂养1周后，随机取45只大鼠按30 mg/kg尾静脉注射STZ并普食喂养2周。以葡萄糖耐量试验法筛选糖耐量异常大鼠18只，分为助脾散精复方颗粒组、罗格列酮组和模型组各6只。并以同批6只未造模大鼠做为正常对照组。

助脾散精复方颗粒组:将助脾散精复方颗粒以含5%羧甲基纤维素的PBS溶液稀释(0.218 g/ml)，按2.18 g·kg-1·d-1体重剂量给大鼠灌服药物，每天1次。

罗格列酮组:灌服罗格列酮6 μg·kg-1·d-1。

模型组:灌服与助脾散精复方颗粒组等体积的含5%羧甲基纤维素的PBS溶液。

以上3组在治疗期间喂高糖高脂饮食，蔗糖∶猪油∶奶粉∶鸡蛋∶普通饲料 =30∶20∶4∶2∶63(质量比)。

正常对照组:以普通饲料喂养，不作任何特殊处理。

1.3 脑组织处理及检测

全部实验大鼠按4.0 ml/kg的剂量腹腔注射10%水合氯醛麻醉，脱颈处死，完整取出鼠脑，冰上剥离海马及皮层，取一侧海马及皮层以低温(4℃)高速匀浆机制成10%匀浆，在低温离心机(4℃)3000转/分钟离心20分钟，分别按照TNF-α、IL-1β测定试剂盒说明以ELISA法进行检测。

1.4 统计学处理

2 结果

与正常对照组比较，模型组大鼠海马及皮质 TNF-α、IL-1β水平明显增高，差异有显著性(P＜0.01)。与模型组比较，助脾散精复方颗粒组及罗格列酮组治疗后海马及皮质TNF-α、IL-1β水平明显下降，差异有显著性(P＜0.01)。罗格列酮组和助脾散精复方颗粒组比较，TNF-α、IL-1β水平均无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

表1 助脾散精复方颗粒对胰岛素抵抗模型大鼠海马及皮质TNF-α、IL-1β 水平的影响(±s，n=6)

表1 助脾散精复方颗粒对胰岛素抵抗模型大鼠海马及皮质TNF-α、IL-1β 水平的影响(±s，n=6)

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3 讨论

既往研究显示，在AD患者脑内，受弥漫性或纤维性淀粉样蛋白(Amyloid β-protein，Aβ)的刺激，脑内小胶质细胞由静止状态快速活化，产生许多前炎性介质(IL-1、IL-6、TNF-α等)及有神经毒性潜能的物质，引起大脑局灶或广泛性损伤直至神经元丢失［2］。其中，白介素-1(IL-1)可能是导致AD病理改变的关键性因子，在AD患者脑内，活化的小胶质细胞所表达的IL-1几乎能达到相同年龄对照组的30倍［3］。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是目前发现与胰岛素抵抗关系最为密切的炎症因子，并且在AD脑内，活化的小胶质细胞表达 TNF-α 上调［4］。

本实验研究表明，胰岛素抵抗模型大鼠海马及皮质TNF-α、IL-1β水平明显增高，提示胰岛素抵抗大鼠脑组织存在明显的炎症免疫反应。具有改善胰岛素敏感性作用［5］，功能燥湿解毒、助脾散精的中药复方助脾散精复方颗粒能够明显降低胰岛素抵抗模型大鼠海马及皮质TNF-α、IL-1β的水平。提示该方可能通过影响脑组织炎症免疫反应及胰岛素信号转导起到干预胰岛素抵抗相关性AD病理进展的作用。有关该方潜在的防治AD认知损害及病理改变的深层机制，有待于进一步深入研究。

［1］Fernndez-Real JM，Ricart W.Insulin resistance and chronic cardiovascular inflammatory syndrome［J］.Endocrine Reviews，2003，24(3):278-301.

［2］Xiang Z，Haroutunian V，Ho L，et al.Microglia activation in the brain as inflammatory biomarker of Alzheimer's disease neuropatho1ogy and clinical dementia［J］.Dis Markers，2006，22:95-102.

［3］Griffin WS.Inflammation and neurodegenerative disease［J］.Am J Clin Nutr，2006，83(2):470-474.

［4］Weisman D，Hakimian E，Ho GJ.Interleukins，Inflammation，and Mechanisms of Alzheimer’s Disease［J］，Vitam Horm，2006，74:505-530.

［5］第五永长，陈荣，高洁，等.ZPSJ方对2型糖尿病胰岛素抵抗患者胰岛素敏感性的影响［J］.国际中医中药杂志，2009，31(4):299-300.