三花膏质量控制标准研究

刘秀英，黄 平

(江西省南昌市洪都中医院药剂科，江西南昌 330008)

三花膏是我院自制中药制剂，由金银花、野菊花、木芙蓉花组成，具有清热解毒、软坚散结、消肿的作用，用于痈疽、疔疖、乳痈及无名肿毒。为确保三花膏质量，我们对其质量控制标准进行了研究，总结如下。

1 材料

北京高效液相色谱仪，Q/BKYY31-2000电热恒温干燥箱，瑞士Precisa电子天平(XR205SM-DR)，CX-100型超声波清洗机(中国北京市医疗设备二厂)，DKS-12型不锈钢新型电热恒温水浴锅(上海经济区沈荡中新电器厂)。

绿原酸对照品(批号0873-9914)、蒙花甙对照品(批号0891-9910)、野菊花对照药材(批号121164-2007101)，均为中国药品生物制品检定所提供。

甲醇为色谱纯，水为纯化水，试剂均为分析纯。

三花膏(南昌市洪都中医院制剂中心，批号100108，100227，100322)。

2 薄层色谱鉴别

金银花:取本品25g，加乙酸乙酯15mL，置水浴上加热回流1h，提取2次，合并乙酸乙酯液，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试照品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[1]分别吸取上述溶液各10μL、2μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上层溶液为展开剂展开，取出晾干，喷以2%三氯化铁乙醇液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与金银花对照药材液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上不显相同的荧光斑点。

野菊花:取本品25g，加石油醚(60～90℃)5mL，置50℃水浴中温浸15min，时时振摇，倾去上清液，药渣再用石油醚同法处理1次，弃去石油醚液，药渣挥尽溶剂，加甲醇20mL，在60℃水浴中浸渍15min，时时振摇，放冷，滤过，滤液作为供试照品溶液。另取野菊花对照药材0.2g，加石油醚(60～90℃)10mL，置50℃水浴中温浸30min，弃去石油醚液，药渣挥尽溶剂，加甲醇10mL，加热回流30min，放冷，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取蒙花甙对照品，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[1]分别吸取上述溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以2%三氯化铝试液，略加热至干置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材液色谱和对照品色谱相应位置上分别显相同颜色的荧光斑点。

3 绿原酸含量测定

色谱条件:色谱柱为DikmaKromasilC18(250mm×4.6 mm，5μm)，流动相为乙腈 -0.4% 磷酸溶液(12∶88)，流速0.8mL/min，柱温 30℃，检测波长326nm。

对照品溶液的制备:取经五氧化二磷减压干燥至恒重的绿原酸对照品4.0mg，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含绿原酸80μg)。

供试品溶液的制备:取本品适量，研匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密取续滤液5mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适应性实验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。得出绿原酸的保留时间约为10min，绿原酸峰与其前后色谱峰的分离度分别为 12.60，3.34，均大于 1.5，拖尾因子为1.03，理论塔板数以绿原酸峰计为15417，绿原酸峰纯度因子为1000。

线性关系考察:分别精密吸取绿原酸对照品溶液(80μg/mL)2，4，6，8，10，15，20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积A对进样量C(μg)进行回归，得标准曲线方程:A=34.8152C+0.2685，r=0.9999。结果表明，绿原酸在0.16～1.6μg范围内，峰面积与进样量有良好的线性关系。

精密度实验:精密吸取同一供试品溶液10μL，按上述色谱条件连续进样5次，测得绿原酸峰面积RSD为0.46%。表明仪器精密度良好。

重复性实验:取同一批号(100322)本品，按供试品溶液制备方法制得5份供试品溶液，分别精密进样测定，测得绿原酸的平均含量为3.2692%，RSD为0.82%。表明本方法重复性良好。

稳定性实验:取同一批号(100108)本品供试品溶液，分别于制备后0，2，4，6，8，10，12，24，36h 精密进样 10μL，测得绿原酸的平均含量0.507mg/支，RSD为1.54%，表明供试品溶液在36h内稳定。

加样回收实验精密称取已知含量(3.2692%)的三花膏(批号100322)5份，每份约0.5g，分别精密添加绿原酸对照品溶液(4.108mg/mL)3mL、4mL、5mL，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，并计算回收率。结果见表1。实验结果表明，本法具有良好的回收率。样品测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以外标法计算样品中绿原酸的含量。结果见表2。

表1 加样回收率实验测定结果 (n=5)

表2 3批样品测定结果 (n=3)

4 讨论

金银花清热解毒、疏散风热，用于治疗痈肿、疔疮、丹毒、温病发热，为君药;野菊花清热解毒消肿，用于治疗疔疮痈肿、丹毒，能增强君药解毒消肿作用，为臣药;木芙蓉花清热解毒消肿，用于治疗痈肿、疔疮。经过20余年的临床应用，证实其对痈疽、疔疖、乳痈及无名肿毒有独特的疗效，未见不良反应。

通过分析，找出了金银花、野菊花2种具有专属性成分的药材做为质量标准中鉴别的试验对象，可通过控制金银花、野菊花来控制全方的质量。

[1]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[M].北京:化学工业出版社，2005.471，596，附录31.