骨肉瘤中低氧诱导因子-2α(HIF-2α)、骨桥蛋白(OPN)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义

谢 虎,李永忠*,郭风劲,张继平,林 华,习 巍

(1.宜昌市第二人民医院骨科,湖北宜昌443000;2.华中科技大学附属同济医院骨科)

骨肉瘤是一种常见的骨的原发性恶性肿瘤,好发于青少年患者,亦称成骨肉瘤,其侵袭力强、转移早且转移率高等特点往往使得临床治疗失败[1]。虽然近几年辅助化疗、保肢手术的运用使骨肉瘤患者5年生存率和保肢成功率显著提高,但长期疗效及患者的远期存活率并无明显改善。这就使越来越多的学者将目光转向了对于骨肉瘤发生、发展、转移机制以及影响这些过程的相关因素的研究[2,3]。本研究采用免疫组化法,从蛋白水平上检测了93例骨肉瘤组织中低氧诱导因子-2α,骨桥蛋白,血管内皮生长因子,以期探讨三者在肿瘤转移、复发中的作用及相互关系,进而反映其能否作为检测骨肉瘤预后的相关指标。

1 资料与方法

1.1一般资料选用我院病理科1991年元月-2005年六月期间收治的93例骨肉瘤标本和25例瘤周正常骨组织。肿瘤直径5-26 cm,平均12 cm。组织学分型参照Dahlin分型标准[4]及WHO新分型法。全部标本经临床、病理、X线相结合确诊。患者分为初发组75例,复发组18例,伴肺转移组 20例,不伴肺转移组73例。

1.2免疫组化方法所有一抗及二抗系浓缩型,储存于-20℃冰箱备用,用前以缓冲液(0.01M的磷酸钠、0.25 M 的 NaCl、pH7.6)及稳定剂(15 mg/ml的牛血清白蛋白)按照1∶100稀释。

检测用SP法(SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)。选用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3评价指标①细胞核内有呈浅黄、棕或棕褐色颗粒为HIF-2α阳性,观察5个高倍镜视野(10×20倍)阳性细胞所占比例。无阳性细胞或阳性细胞数＜1%为(-),1%-10%为(+),11%-50%为(++),＞50%为(+++)。②OPN表达的计数同样采用上述图文分析系统,按阳性细胞所占比例分为(-):瘤细胞染色阴性或＜5%的瘤细胞有少量着色;(+):5%-20%的瘤细胞呈弱阳性;(++):21%～50%的瘤细胞阳性;(+++):＞50%的瘤细胞阳性且着色较强。③肿瘤组织VEGF表达的计数方法也同样采用上述图文分析系统,以肿瘤组织VEGF阳性率及阳性细胞质中颗粒数及大小分为如下级别:阴性(-):瘤细胞完全不染色;弱阳性(+):瘤细胞染色＜25%呈浅黄色;阳性(++):26%-50%的瘤细胞染色呈棕黄色;强阳性(+++):＞50%的瘤细胞染色呈棕褐色。

1.4统计学处理数据采用SPSS 12.0软件进行统计学处理和分析,资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1HIF-2α,OPN,VEGF在不同组织中的表达情况比较与正常骨组织相比,瘤组织中HIF-2α,OPN,VEGF的表达明显提高,差别均具有统计学意义(P＜0.05);另外,与不伴肺转移组相比,复发组和肺转移HIF-2α,OPN,VEGF的表达明显提高,差别亦具有统计学意义(P＜0.05)。结果见表1。

表1 HIF-2α,OPN,VEGF在不同组织中的表达情况比较 例(%)

2.2骨肉瘤组织中HIF-2α、OPN表达与VEGF的关系VEGF阳性组中HIF-2α的阳性表达率与VEGF阴性组中HIF-2α的表达率具有统计学意义(P＜0.05)。另外 VEGF阳性组中OPN的阳性表达与VEGF阴性组表达率在具有统计学意义(P＜0.05)。由此可见,HIF-2α和OPN的表达与VEGF有显著相关性。结果见表2。

表2 骨肉瘤组织中HIF-2α、OPN表达与的 VEGF关系例(%)

3 讨论

恶性肿瘤的生长侵袭和转移是一个多环节,多步骤的复杂过程,有多种因子参与。低氧诱导因子(HIF)是近年来研究较多的与肿瘤行为的许多重要方面均有关的因子。HIF是广泛存在于人和哺乳动物体内的一种结合因子,主要HIF-1、HIF-2和HIF-3。HIF-2和HIF-1的基因序列有48%同源,有相同的DNA结合位点。HIF-2是缺氧诱导的一种异源二聚体转录因子,主要由HIF-2α和HIF-1b两个亚单位组成,其活性由HIF-2α决定[5]。OPN是一种具有多种生物学功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白,在细胞的黏附、迁移、信号转导及组织修复中具有重要作用。随着肿瘤研究的深入,人们发现OPN在肝癌、肺癌、乳腺癌及头颈部肿瘤等原发肿瘤及其转移瘤组织中高表达,提示OPN可能与肿瘤的侵袭转移密切相关[6,7]。实体肿瘤的血管新生与瘤细胞分泌的多种血管生长因子有关。在已发现的20多种多肽类血管生长因子中,VEGF是针对内皮特异性最高,促血管生长作用最强的关键调节因子[8],它以旁分泌方式通过调节内皮细胞整合素及蛋白酶激活因子的表达激活细胞内信号传导通路,增加微血管通透性等途径而诱导内皮细胞增殖,迁移。因此是一种内皮细胞特异的致分裂原,并参与肿瘤性基质形成及新生血管形成。

本研究结果表明,93例骨肉瘤的HIF-2α表达阳性率为33.3%,25例癌旁正常骨组织中HIF-2α表达阴性。但与其他肿瘤比,HIF-2α在骨肉瘤组织中表达率较低。另外,VEGF阳性组中HIF-2α和OPN的阳性表达率与VEGF阴性组中HIF-2α的表达率具有统计学意义(P＜0.05)。因而为寻找新的肿瘤治疗靶点提供了更多的途径。

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