食管鳞状细胞癌中Survivin的表达

王会恩 张霄鹏 王志康 刘会宁 周韶辉 段国辰

食管癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率有逐年增高的趋势。随着人们对肿瘤研究的深入，目前认为凋亡相关基因Survivin与食管癌的发生发展密切相关，本研究采用免疫组化方法研究食管癌中Survivin的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2003至2004年食管鳞状细胞癌蜡块标本58例为试验组，其中男35例，女23例;年龄39～79岁，平均年龄56.61岁;高分化28例，中分化21例，低分化9例。所有患者均为术前未经放疗及化疗的初发病例。正常食管黏膜组织32例为对照组，其中男22例，女10例;年龄20～68岁，平均年龄31.30岁。为囊肿等良性肿瘤旁的正常黏膜组织。以上每例标本均进行HE染色后经有经验的病理医师阅片后确诊。

1.2 主要试剂 羊抗人Survivin多克隆抗体，为SantaCruz公司产品。SP免疫组化试剂盒，DAB显色剂，多聚赖氨酸(Poly-L-lysine)防脱片剂均购自北京中山生物技术有限公司。

1.3 方法 采用免疫组织化学SP法(过氧化物酶标记的链酶卵白素法)。将每个蜡块切为4～5 μm的切片，共切3张，1张HE染色，1张作为阴性对照，另1张Survivin染色。免疫组化步骤均严格按照试剂盒要求操作。常规设立阳性对照和阴性对照。

1.4 实验结果判定 细胞浆呈棕黄色者为Survivin阳性细胞。首先按染色强度记分:0为阴性，1为弱阳性，2为阳性，3为强阳性。再按照阳性细胞所占百分比记分:阳性细胞＜5%为0分，5% ～25%为1分，25% ～50%为2分，50% ～75%为3分，＞75%为4分。两者之和≥2分可判为阳性。

1.5 统计学分析 应用SPSS 11.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin蛋白在正常食管黏膜组织和食管癌组织中的表达 Survivin蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达，阳性表达55.17%(32/58)，阴性 44.83%(26/58);在正常食管组织中阳性表达9.38%(3/32)，阴性 90.62%(29/32)。2组比较差异有统计学意义(χ2=18.24，P＜0.01)。见表1、图1。

表1 Survivin在正常食管组织和食管癌组织中的表达 例

图1 食管鳞癌组织中Survivin的表达(SP×200)

2.2 Survivin蛋白表达与患者的临床病理学特征的关系 Survivin蛋白的表达与患者的性别、年龄及肿瘤的部位无明显的相关性(P ＞0.05)，而与肿瘤的分化程度相关(P＜0.05)。见表2。

表2 Survivin的表达与临床病理学指标的关系 例

3 讨论

我国是食管癌的高发国，且病死率居高不下。食管癌的发生发展是一个多因素、多阶段、多基因参与的复杂过程，因此从细胞水平深入到基因分子水平探讨食管癌病变的发生、发展机制具有重要的临床意义。

Survivin又名生存素，是一种分子量为6.5 kDa的胞内蛋白，编码基因定位于染色体17q25。生存素只表达于胚胎和发育的胎儿组织，除胸腺、生殖腺外不见于其他终末分化的正常成人组织。相反在大多数肿瘤组织如肺癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌中均可检测到生存素的表达。生存素能抑制各种凋亡诱导因子所诱导的细胞凋亡。

Satoh等［1］发现胰腺癌 Survivin蛋白的表达阳性率为76.9%，认为在肿瘤发生早期阶段即有Survivin蛋白表达上调，并与凋亡指数明显相关。Kishi等［2］研究了82例前列腺癌标本和80例正常对照前列腺组织，结果表明Survivin表达在有淋巴结转移和血管侵犯的癌中表达增高，而且与癌细胞增殖活性成正相关，提示Survivin表达的程度与前列腺癌发生、发展有关。Li等［3］报道了 Survivin mRNA在肝癌中的表达情况，Survivin mRNA表达阴性肿瘤的癌细胞凋亡率明显高于阳性者(P=0.0019)，Survivin mRNA表达阳性患者5年生存率明显低于阴性者(P=0.0148)，提示Survivin mRNA表达情况可作为预测肝癌切除术后预后的独立指标。另外，研究发现34.5%的胃癌，70.7%的乳腺癌，77.8%的膀胱癌，85.5%的非小细胞性肺癌中都有不同程度的Survivin mRNA表达，Survivin蛋白通过级联式激活并溶解蛋白质，主要抑制Caspase-3和Caspase-7的活性，阻断细胞的凋亡，是迄今发现的最强的凋亡抑制因子［4］。Survivin蛋白表达与患者的性别、年龄及肿瘤部位无明显关系，但与肿瘤组织的浸润深度及淋巴结转移的关系各家报道不一。多数研究表明Survivin蛋白的表达与多种肿瘤的生物学特性、分期密切相关［5］。Lu等［4］的资料显示，Survivin蛋白表达与胃癌的组织学类型及淋巴管浸润有关。Lo等［6］研究显示，Survivin蛋白在口腔及皮肤鳞癌组织中的表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有密切关系。少数研究认为Survivin蛋白的表达与上述临床病理因素无关。本研究结果显示 Survivin蛋白的表达随食管鳞状细胞癌的浸润深度加深而增强，但无统计学意义(P＞0.05)，而在有淋巴结转移的食管鳞癌组织显著高于淋巴结无转移组织，结合长期生存组表达明显低于短期生存组，提示Survivin蛋白是一个有研究价值的肿瘤标志物及判断食管鳞状细胞癌预后的参考指标，并有可能成为基因治疗的新靶点。

本研究结果显示:在58例食管鳞癌组织中Survivin有32例阳性表达，为胞浆染色。而在32例正常黏膜中，Survivin仅有3例阳性表达，也为浆染色，这与多数实验结果基本一致，少数研究发现Survivin也可出现核表达，出现不一致的原因可能与所取样本数目多少有极大关系，还可能与肿瘤的组织分型、免疫组化技术等多种因素有关。

本试验阳性率与年龄、性别及部位无关，只与分化程度相关，随分化程度的降低，Survivin的表达有升高趋势，我们的结果显示，低分化和中分化均与高分化差异有统计学意义，但低分化和中分化差异无统计学意义。

综上所述，Survivin与食管癌的发生发展密切相关，它作为一种新的凋亡抑制蛋白在肿瘤发病机制中的作用以及治疗靶点的应用已经引起了广泛关注，但是仍有很多问题亟待阐明，如Survivin基因表达的调控、与癌基因、抑癌基因和其他凋亡相关基因的关系，以及在肿瘤诊治中的具体的应用价值等。

1 Satoh K，Kaneko K，Hirota M，et al.Expression of Survivin is correlated with cancer cell apoptosis and is involved in the development of human pancreatic duct cell tumors.Cancer，2001，92:271-278.

2 Kishi H，Igawa M，Kikuno N，et al.Expression of the Survivin gene inprostate cancer:correlation with clinicopathological characteristics，proliferative activity and apopt.J Urol，2004，171:1855.

3 Li F，Ambrosini G，Chu EY，et al.Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by Survivin.Nature，1998，396:580-584.

4 Lu CD，Altieri DC，Tanigawa N，et al.Expression of a novelantiapoptosis gene，Survivin，correlated with tumor cellapoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas.Cancer Res，1998，58:1808-1812.

5 Altieri DC，Marchisio C.Survivin apoptosis:an interloper between cell death an cell proliferation in cance.Lab Invest，1999，79:1327.

6 Lo Muzio L，Staibano S，Pannone G，et al.Expression of theapoptosis inhibitor Survivin in aggressive squamou cell carcinoma cell careinoma.Exp Mol pathol，2001，70:249.