应用NCCLS EP9-A文件对街头半自动生化分析仪ALT测定结果进行比对

王学刚 孙国栋 李艳艳 魏淑梅

在无偿献血采血前进行快速初筛丙氨酸氨基转移酶(ALT)，将极大降低采血后不合格率，提高采集效率，避免不合格血的采集，从而节约采集及检验成本，具有良好的社会效益和经济效益［1］。但是在ALT初筛工作中，如何加强该项目的全面质量管理，保证初筛结果与站内检验结果的一致性，成为血站检验工作面临的一项新的课题。笔者尝试采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)EP9-A2文件［2］对街头半自动生化分析仪与站内全自动生化分析仪进行ALT测定结果进行比对及偏差评估，以期了解NCCLS EP-9A方法在该项工作中的适用性，报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器 Vital scientific生产的microlab 300半自动生化仪2台。OLYMOUS AU640全自动生化分析仪。

1.2 试剂及质控品 宁波美康生物科技公司生产的ALT检测(单试剂法)试剂盒，批号20100811;OLYMOUS提供的检测(双试剂法)，批号1022;Roche公司生产的生化全项质控品:低值批号10651257，高值批号10651265。

1.3 标本 河北省邯郸市中医院和河北省邯郸市中心血站日常检验标本。

1.4 测定及分析方法［3－5］(1)每天选取8份检验标本分别用3台仪器按1→8进行测定，再按相反顺序8→1重复测定。连续测定 5 d。(2)记录测定结果(X1i，X2i和Yi)X1i，X2i分别为2台实验仪器microlab 300的测定结果，Yi为比较仪器AU640的测定结果，i为标本编号(1～40)，计算每个标本测定结果的均值标本重复测定值间差值的绝对值(Dx1i，DX2i和Dyi)及2台半自动生化与比较方法——AU640测定结果均值间的差值(Yi－X1i和Yi－X2i)。(3)以Yi对X1i和X2i分别作散点图。(4)以对X1i和X2i分别作偏差图。(5)目测离群点。计算:计算样本重复测定结果均值间差值)的平均数。判断:超出上述平均数4倍时检验结果视为无效。

1.5 数据处理［3－5］

1.5.1 离群点检验(仪器内):分别对3台仪器测定的所有点进行离群点检验。根据下列公式计算比较仪器AU640(Y)与实验仪器microlab 300(X)2次测定结果差值的绝对值的均值:

若microlab 300与AU640内部各样本的2次测定结果的差值绝对值小于4倍差值绝对值的均值，则认为仪器内部无离群点。如果超出4倍均值，需计算相对的差值绝对值(Dxi’，Dyi’)的均值:

若仪器内部各标本的2次测定结果的差值绝对值小于4倍相对差值绝对值的均值，则认为仪器内部无离群点。反之则认为该点为离群点。如果只有1个离群点，可将这个点删除，继续下述分析。如果离群点超过2个以上，需分析原因，若找到明确原因，重新测定这些样本，并记录原因。然后再进行离群点检验;若未能找到明确原因，必须重新收集样本。如果未能找到明确原因而且并非收集标本错误，也并未超过仪器检测范围。必须停止实验。检测仪器状态。

1.5.2 绘制散点图:2台microlab 300的测定结果分别为X1、X2，AU640测定值为Y，i为标本编号(i=1～40)，j为测定次序(j=1或2)绘制2种散点图。可直观观察到离群点、线性程度、偏倚等。①分别绘制2台microlab 300均值与AU640均值)的散点图;②分别绘制AU640均值与2台microlab 300与AU640的均值差的散点图。

1.5.3 线性相关的目测检查:通过观察前一种散点图，可直接目测microlab 300与AU640之间的线性关系，如果是线性的，进入下述分析。如果是非线性的，需先确定是否存在超过检测项目浓度范围的极端值，剔除后再进行线性测定;如果是线性的，进入下述分析:如果还是非线性的，需停止试验，检测仪器状态。增加标本含量重新进行比对。

1.5.4 X值适合范围检验:通过相关系数r或r2评价比较仪器microlab 300与AU640纳入数据范围是否适合。若r≥0.975或r2≥0.95认为纳入数据范围足够宽。r2＜0.95，需要拓宽数据范围。增加标本含量。

1.5.5 计算回归方程:选择EXCEL统计软件得出80组(40×2)数据的microlab 300与AU640之间回归方程Y=a+bX。

1.5.6 计算方法间的系统误差:根据临床使用要求，将各个项目给定的医学决定水平浓度Xc代入回归方程，计算实验方法(Y)与比较方法(X)之间的系统误差(SE)。

2 结果

2.1 2台microlab 300测定均值分别与AU640测定均值数据散点图(图1，2)。

图1 1号设备对AU640散点图

图2 2号设备对AU640散点图

2.2 2台microlab 300ALT测定均值分别与AU640测定均值偏倚图(图3，4) 方法内及方法间离群值检查:EP9-A文件允许从分析数据中删除2.5%的离群值，有一样本2次测定的差值超过允许范围为离群点，在方法内离群值检查中2台microlab 300半自动生化分析仪最初各有3和4个离群点，我们又对相应的样本进行了重新测定，最终3个系统内部均无离群点，但是2台microlab 300半自动生化系统分别与AU640全自动生化系统间仍各有1个离群点，从数据中删除。

图3 1号设备对AU640偏差散点图

图4 2号设备对AU640偏差散点图

2.3 2台microlab 300与AU640测定ALT的相关系数和回归方程 测定结果的相关性:以AU640系统作为目标检测系统，两半自动系统与其进行相关与回归分析。各检测系统间的相关系数均大于0.975，说明回归统计的斜率和截距可靠，可以用它们去估计不同检测系统间的系统误差。见表1。

表1 2台半自动生化系统的相关系数及直线回归方程

2.4 根据上述线性方程，2台microlab 300与AU640测定ALT间在不同Xc上的预期偏差和相对偏差，以方法学比较的系统误差＜1/2 CLIA'88的允许误差范围为临床可接受性能的判断标准。两半自动生化系统在给定医学决定水平(Xc)的预期偏差除了在20 U时设备1在允许偏差界线上以外，其余各医学决定水平上2台半自动生化分析系统ALT的测定结果在比较范围内与AU640全自动生化分析系统具有可比性。见表2。

表2 2台microlab 300系统与AU640间在不同Xc上的预期偏差和相对偏差

3 讨论

我们依据NCCLS的标准化文件EP9-A对测定ALT的2种设备(半自动和全自动)进行了比较，EP9-A文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测同一被测物的2种方法之间偏倚的实验设计。对于使用者，评价的目的在于确定2种方法在允许范围内能否得到相同的结果。在临床实验室中，经常会进行方法学评价的实验，EP9-A为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径［6］。

本试验结果表明，使用microlab 300半自动生化分析仪配国产单试剂系统与AU640全自动生化分析仪与仪器厂家配套试剂(双试剂)测定患者血清样本ALT浓度时，测定结果的相对偏倚在线性范围内能被接受，其结果的可比性良好。但是，鉴于半自动生化分析系统与全自动生化分析系统的差异，事先使用商品化的标准品对半自动生化分仪的系数进行调整和操作人员的操作规范性培训是取得良好检测结果的保证。

使用半自动生化分析仪和速率法对血液ALT项目进行初筛，经检测，其精密度可达到CV＜6%;使用全自动生化分析仪和速率法对标本进行ALT的复检，经检测，其精密度可达到CV＜5%。且两设备定期使用ALT定值血清进行校准，并使用室内质控品对精密度进行监测，仍然有大量的珍贵血液因ALT不合格而报废。我们通过对ALT报废血液进行调查和分析，发现这部分血液使用全自动生化分析仪进行检测，90%为41～45 U的标本，100%为＜50 U的标本，而这部分血液初筛检测值80%以上为35～40 U的标本，100%为30～40 U的标本。而献血者健康检查标准中规定ALT＞40 U/L，即为不合格。由于初筛标本为末梢血标本，而复检标本为静脉血标本，本身存在差异，且初筛使用设备、试剂与复检使用设备、试剂不同，这可能导致两设备准确与精密度均符合要求，却因设备本身不精密度的叠加及标本本身差异造成初筛合格，而复检不合格的情况发生，导致珍贵的血液资源被浪费。因此为减少血液浪费，加强初筛设备与复检设备的日常比对显得十分重要［7］。

1 陈长荣，张永昌，张辽明，等.采血前ALT快速检测的意义.中国输血杂志，2004，17:164.

2 The National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method Com-parison and bias Estimation using Patient samptes.Approved Guideline，Second Edition，2002，EP92A2.

3 李传达.国产酶试剂盒在Beckm an Syn chron CX9生化仪上的应用研究.泸州医学院学报，2001，24:330.

4 郭健，谢洁红，赵海舰.方法学比较实验的设计及两种白蛋白测定方法的比较.中华检验医学杂志，2000，23:343-345.

5 张秀明，庄俊华，徐宁，等.不同检测系统血清酶测定结果的偏倚评估与可比性研究.中华检验医学杂志，2006，29:347.

6 李传达，袁平宗.两种丙氨酸氨基转移酶试剂的对比研究及偏倚.中华检验医学杂志，2005，28:1082.

7 张维.运用设备比对及改进初筛设备降低血液ALT报废率.职业与健康，2010，26:1226.