围绝经期和绝经后子宫内膜息肉局部雌孕激素受体的表达及意义

郭伟男 孙立敏 张锺元 马翠卿 李晓 胡建秀 范秀华

子宫内膜息肉的发生与其局部雌孕激素(E2、P)水平及其受体［雌激素受体(ER)，孕激素受体(PR)］表达有关，局部内膜组织接受甾体信号，并刺激相关蛋白表达，造成本病的发生与发展，甚至有学者认为子宫内膜息肉与子宫内膜癌有必然联系［1］。通过研究围绝经期和绝经后子宫内膜息肉患者局部雌孕激素受体的含量并与正常内膜进行比较，揭示甾体激素因素在围绝经期、绝经后女性子宫内膜息肉发生中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2009年1月至2010年6月就诊于河北省正定县人民医院和河北医科大学第二医院门诊宫腔镜室经子宫内膜息肉切除术(TCRP)，或因子宫肌瘤合并子宫内膜息肉而行子宫切除的围绝经期(围绝经期组，11例)及绝经后(绝经组，8例)子宫内膜息肉患者共19例，选取同期因生殖道脱垂而行子宫切除，排除子宫内膜病变患者9例(对照组)，年龄42～60岁，体重具有可比性，排除雌激素替代及肝肾疾患，无妇科恶性肿瘤病史。

1.2 方法

1.2.1 资料采集:组织取下后分成2份，一部分4%多聚甲醛固定，用于HE染色及免疫组化SP法检测组织中ER和PR表达;另一部分置于EP管中液氮保存，用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测ER和PR转录水平。

1.2.2 SP法免疫组化检测ER、PR表达:采用免疫组化SP法检测各组中ER、PR蛋白的表达。阴性对照一抗以 PBS替代，阳性对照由试剂公司提供的乳腺癌标本。ERα兔抗人多克隆抗体、ERβ兔抗人多克隆抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司;二抗、DAB显色剂等均购自北京中杉生物技术有限公司。采用计算机图像分析系统，对于每张样片随机取5个部位进行图像采集。

1.2.3 RT-PCR 检测转录水平

1.2.3.1 引物:ER 引物:上游5’-GGAGACATGAGAGCTGCCA-3’，下游 5’-CCAGCAGCATGTCGAAGATC-3’，扩增产物大小:438 bp;PR引物:上游 5’-TCATGAGCCGGTCCGGGTGCAAG-3’，下游 5’-CGGGGTGGACGAGGCACAGG-3’，扩增产物大小:196 bp;β-actin引物:Actb-F:5’-TACCCAGGCATTGCTGACAGG-3’，Actb-R:5’-ACTTGCGGT GCACGATGGA-3’，目的片段长度205 bp。

1.2.3.2 PCR 扩增:扩增体系包括:上下游引物:2.5 μl、逆转录产物(cDNA):1 μl、dNTP(2 mmol/L):1 μl、Buffer:2 μl、ddH2O:14.85 μl，共 25 μl。ER 扩增条件:95℃ 预变性 5 min，95℃变性 30 s、53℃退火 30 s、72℃ 30 s，72℃ 延伸5 min，30 个循环，4℃保存;PR扩增条件:95℃预变性5 min，进入循环，95℃变性 45 s、55℃退火 30 s、72℃延伸 30 s，30 个循环后 72℃最后延伸5 min，4℃保存。

1.2.3.3 产物分析:紫外透射仪上观察结果并照相，选用Band Scan 5.0凝胶图像处理软件进行光密度值分析，采用目的基因与β-actin光密度的比值表示目的基因的表达水平。

1.3 统计学分析应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化比较 见表1。

表1 3组免疫组化比较

表1 3组免疫组化比较

注:与对照组比较，*P＜0.05

ER PR对照组(n=9)组别0.578±0.146 0.521±0.143围绝经期组(n=11) 0.779±0.311* 0.692±0.214绝经后组(n=8) 0.904±0.432* 0.847±0.384*

2.2 RT-PCR比较 见表2。

表2 2组RT-PCR比较

表2 2组RT-PCR比较

注:与对照组比较，*P＜0.05;与围绝经期组比较，#P＜0.05

ER PR对照组(n=9)组别0.734±0.302 0.421±0.107围绝经期组(n=11) 1.253±0.305* 0.768±0.201*绝经后组(n=8) 1.004±0.238* 0.832±0.424*#

2.3 免疫组化及RT-PCR图 围绝经息肉中ER表达上调，而围绝经息肉中ER、PR的表达均上调。围绝经期息肉中及绝经后息肉中的ER、PR的RNA转录水平较正常组都有所提高，同时绝经后息肉组较围绝经期组中的PR的RNA转录水平有所提高。见图1、2。

图1 3组免疫组化检测ER、PR蛋白表达(IHC×40)

图2 3组RT-PCR检测ER、PR转录水平

3 讨论

E2通过与ER结合，形成二聚体，再通过与靶基因中的雌激素反应元件(ERE)特异性结合，形成细胞信号刺激靶基因转录［2］，造成一系列促进靶器官细胞增殖和分化的蛋白表达，对子宫内膜作用即表现为促进子宫内膜的增生和血管增殖。此外E2通过正反馈作用还可在DNA复制转录水平上诱导ER和PR生成，长期过度的作用即可使子宫内膜发生增生甚至癌变，而增生的一个表现即为形成子宫内膜息肉。在对孕龄女性的研究中发现，并非ER都参与了子宫内膜息肉的形成，E2及ER在其中起着更为重要的作用［3］，而PR在息肉中的表达降低，可能提示P及PR途径对本病发生起保护作用。

增殖期息肉中PR处于低水平、相对缺乏的状态，使其进入分泌期后对P的反应能力下降，从而使P抑制ER产生的作用减弱，导致ER持续高水平表达，细胞增殖形成息肉［4，5］。我们研究发现，围绝经期子宫内膜息肉患者局部ER表达升高，无论从蛋白水平还是从转录水平均得到证实，与肖艳景等［6］研究结果相一致，与孕龄女性子宫内膜息肉发病机制相一致［7］，而在绝经后子宫内膜息肉的研究中发现，局部雌孕激素受体表达均升高，这在转录水平的研究更为明显(P＜0.05)，这与孕龄女性子宫内膜息肉中的表达相悖［8］，与传统E2、P及其受体途径作用观点相反(E2与ER结合，产生促进细胞增殖相关信号，导致子宫内膜呈增生期改变，P与PR结合后产生一系列相关信号促进细胞成熟，导致子宫内膜向分泌期转化)。本实验结果提示:绝经后子宫内膜息肉的发病机制与围绝经期及孕龄女性不同，因此在治疗绝经后子宫内膜息肉的方法选择上，建议绝经后女性避免使用E2、P替代治疗。

随着对激素路径的不断研究，发现ER、PR均存在亚型，有学者研究发现:ERα是造成子宫内膜癌的重要原因，而ER β则对子宫内膜恶变起保护作用［9］。近年来有越来越多学者着手于P亚型的研究，发现不同P亚型可能作用不同［10］，在绝经后子宫内膜息肉的发病中是否由于不同孕激素亚型造成，还有待进一步研究。

1 张莹，刘洁，崔月梅.宫腔镜电切术诊治子宫内膜息肉的临床应用.河北医药，2010，32:2516-2517.

2 Jeffers WN，Couse JF，Banks EP，et al.Expression of estrogen receptor beta is developmentally regulated in reproductive tissues of male and female mice.Biol Reprod，2000，62:310-317.

3 Suzuki T，Shimizu T，Yu HP，et al.Salutary effects of 17beta-estradiol on T-cell signaling and cytokine production after trauma-hemorrhage are mediated primarily via estrogen receptor-alpha.Physiol Cell Physiol，2007，292:2103-2113.

4 Taylor LJ，Jackson TL，Reid JG，et al.The differential expression of oestrogen receptors，progesterone receptors，bcl-2 and ki-67 in endometrial polyps.Obstet Gynaecol，2003，110:794-798.

5 Bakout SH，Gupta JK，Khan KS.Risk factors associated with endometrial polyps in abnormal uterine bleeding.Menopause，2003，10:534-537.

6 肖艳景，张全武，谢林森，等.ER与PR等在绝经后子宫内膜息肉中的表达.实用技师杂志，2006，13:1659-1661.

7 范秀华，邢小芬，刘淳，等.ER、PR、HSP70和HSP90在子宫内膜息肉治疗前后的表达及意义.河北医药，2009，31:3343-3345.

8 罗雪梅，程秋蓉，孟晓军，等.子宫内膜息肉发病的相关因素研究.中国全科医学，2010，13:588-590.

9 王海霞，解其贵，赵俊红，等.子宫内膜癌雌激素受体α、β亚型和孕激素受体mRNA表达与临床病理的关系.中国临床医学，2008，15:863-865.

10 陈锐，于丽，廖秦.子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达及其甲基化状态的研究.现代妇产科进展，2008，7:501-505.