针刺丰隆和曲池及三阴交穴对高脂血症小鼠血清ET和NO含量的影响

王志波 王丽芳 肖红玲 杨继军 张瑞娟 肖丽梅 杨云峰

高脂血症(hyperlipemia，HLP)是一种脂质代谢紊乱性疾病，研究表明，高脂血症会使巨噬细胞活化，内皮细胞损伤，血清一氧化氮(NO)浓度降低，血清内皮素(ET)含量增高［1－3］。本文取丰隆、曲池、三阴交穴针刺治疗高脂血症，系多年临床经验总结的配穴方法，为进一步研究其作用机制，本文将其对高脂血症模型小鼠血清NO、ET含量的影响结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 体重18～22 g的清洁级昆明小鼠120只，雄性，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，合格证号scxk(鄂)2004-0007。饲养于18～22℃明暗各12 h的清洁级动物实验室，自由饮水进食，适应性喂养1周后，随机分为4组:正常组40只、模型组40只、针刺组20只和药物组20只。

1.2 主要仪器与试剂 1-15K型离心机，德国Sigma;Humalyzer 2000型半自动生化仪，德国Human;TGL-16B型离心机，上海安亭;FJ-2020型γ射线免疫计数器，国营262厂;LH202H韩氏电针仪，南京济生医疗科技有限公司。

辛伐他汀胶囊(山东鲁抗医药股份有限公司，批号:070101);血清三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量测定，均为中生北控生物科技股份有限公司产品;ET放射免疫试剂盒，南京建成生物工程研究所第一分所;NO测定试剂盒，为南京建成生物工程研究所产品。

1.3 动物模型制备 参照文献［4］采用高脂饮食诱导法，并在实验中进行改良。4组动物饲养于18～22℃明暗各12 h的清洁级动物实验室，自由饮水进食，正常组喂饲普通平价饲料，其余3组喂饲高脂饲料，饲养15 d后，选取正常组和模型组小鼠各20只，断头采血测定血清TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量，通过2组数据对比证实造模成功，实验继续。高脂饲料配方为:胆固醇1.5%、猪油10%、基础饲料88.5%。普通平价饲料和高脂饲料均由河北医科大学实验动物中心提供。

1.4 治疗方法

1.4.1 针刺组:造模成功后，在不作麻醉的情况下，将实验小鼠固定于自制束鼠器上，参照《现代中兽医大全》并模拟人体经穴定位取穴，取小鼠双侧“丰隆”、“三阴交”和“曲池”穴。常规消毒，选用28 G 15 mm针灸针，针刺后接通LH202H韩氏电针仪，采用疏密波，频率为疏波2 Hz，密波15 Hz，输出强度0～2 mV，以小鼠肢体微颤、能耐受为度，10 min/次，1次/d;同时按0.2 ml/10 g计算，灌胃与药物组同体积蒸馏水1次/d，连续10 d。

1.4.2 药物组:参照文献［5］，按照 6.6 mg·kg－1·d－1计算得出药量，在造模成功后给实验小鼠灌服辛伐他汀，1次/d;并用与针刺组同样方法将实验小鼠在自制束鼠器上固定10 min，1 次/d，连续10 d。

1.4.3 模型组、正常组:用与针刺组同样的方法，在造模成功后将实验小鼠在自制束鼠器上固定10 min，1次/d;同时按0.2 ml/10 g计算，灌胃与药物组同体积蒸馏水1次/d，连续10 d。

1.5 取材及指标检测 造模第15天取正常组、模型组小鼠各20只，禁食不禁水12 h，断头采血，加入预冷的、加有1%肝素(每毫升全血20 μl)和抑肽酶(每毫升全血500 U)的塑料试管中，4℃、3000 r/min，离心 5 min，提取上清液测定血清 TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量。末次针刺、给药后，禁食不禁水12 h，断头采血，加入预冷的、加有1%肝素(每毫升全血20 μl)和抑肽酶(每毫升全血500 U)的塑料试管中，4℃、3000 r/min，离心5 min，提取上清液测定血清ET、NO含量。

血清TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量测定:酶学终点法测血清TG、TC的含量;磷钨酸-镁沉淀法测血清HDL-C含量;聚乙烯硫酸沉淀法测血清LDL-C含量。所有测定步骤和计算公式均严格按照试剂盒说明书操作。

血清ET、NO含量的测定:采用放射免疫分析方法测定血清ET含量，采用硝酸还原酶法测定血清NO含量，所有测定步骤和计算公式均严格按照试剂盒说明书操作。

1.6 统计学分析应用SPSS 11.5统计软件，计量资料以表示，组间比较用单因素方差分析，后用单因素q检验做组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 造模第15天正常组和模型组小鼠血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C含量比较 造模第15天模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量均高于正常组(P＜0.05)，血清HDL-C含量低于正常组(P＜0.01)，提示高脂血症小鼠模型造模成功。见表1。

表1 造模第15天正常组和模型组小鼠血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C含量比较n=20，mmol/L，

表1 造模第15天正常组和模型组小鼠血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C含量比较n=20，mmol/L，

注:与正常组比较，*P＜0.05，#P＜0.01

TC TG HDL-C LDL-C正常组组别3.08±0.74 0.70±0.21 0.94±0.30 1.83±0.36模型组 5.72±0.85# 1.31±0.32# 0.60±0.26* 2.68±0.55#

2.2 针刺丰隆、曲池、三阴交穴对高脂血症小鼠血清ET、NO含量的影响 模型组小鼠血清ET含量高于正常组，NO含量低于正常组，差异有统计学意义(P＜0.01);针刺组和药物组血清ET的含量均低于模型组，NO含量均高于模型组，差异有统计学意义(P＜0.01);针刺组ET含量低于药物组，NO含量高于药物组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 4组小鼠血清ET、NO含量比较n=20，

表2 4组小鼠血清ET、NO含量比较n=20，

注:与正常组比较，*P＜0.01;与模型组比较，#P＜0.05，△P＜0.01;与药物组比较，☆P＜0.05

组别 ET(Pg/ml) NO(μmol/L)正常组 46±9 87±6模型组 67±12* 64±9*针刺组 44±5△☆ 85±10△☆药物组 56±12# 76±9△

3 讨论

HLP是一种脂质代谢异常性疾病，主要表现为血清中TC、TG、LDL-C的升高以及HDL-C降低，并对人体的血管内皮系统产生严重影响。

内皮可合成和分泌多种血管活性物质，ET即是内皮细胞产生的强烈而持久收缩血管的一种多肽，和NO是与血管舒张和收缩功能密切相关的两种细胞因子，在动脉粥样硬化(AS)的发病过程中起着重要的作用［6］。ET可以通过激动相应受体兴奋血管平滑肌［7］，引起血管收缩，促进血管平滑肌细胞增殖和单核细胞对内皮细胞的黏附、损伤。NO是调节血管平滑肌张力和血流的主要因子［8］，NO除调解血管的张力外，还具有抗氧化，抑制血小板和白细胞在内膜的粘附、聚集和激活，阻止附壁血栓形成等作用，NO水平下降，是AS等血管疾病的病理学基础，正常时ET与NO处于一种动态平衡状态。

HLP时，由于低密度脂蛋白含量增加，容易被氧化生成氧化低密度脂蛋白(oxLDL)。oxLDL是一种超氧阴离子自由基(O－2)，具有强烈的引发脂质过氧化的作用，oxLDL又可抑制内皮细胞NO的释放，诱导内皮细胞表达和释放ET，从而使平滑肌细胞进一步迁移与增殖，血管收缩增强［9］。因此，血清ET和NO含量，可以反应血管平滑肌收缩与舒张状态、血管张力及血流畅通程度，对于研究针刺穴位治疗高脂血症的作用机理，具有重要意义。

本文从中医角度认为高脂血症的发病以脾虚不运为本，痰浊之邪为标，属于本虚标实之证。由于脾虚不运，调节机能减退，排浊邪能力下降(如血清中HDL-C、NO含量下降)，则痰浊之邪蓄积(如血清中的TC、TG、LDL-C的含量升高，血管内皮细胞合成和释放ET增加)。脾虚痰浊常互为因果，形成虚实错杂的恶性循环是高脂血症进一步发展和加重的关键。针对上述认识，结合临床经验，拟以丰隆、曲池、三阴交三穴合用，共凑健脾化痰、通腑泄浊之效，以标本兼治。其中丰隆穴具有健脾化痰、利气宽胸、和胃降逆、调理气血之作用，尤其化痰之用最为显著，是祛痰要穴，现代研究表明针刺丰隆具有调节血脂的特异性，可显著降低血清中胆固醇［10］含量;三阴交穴具有健脾利湿、补益肝肾、活血化瘀作用，现代研究表明针刺三阴交穴可以增强胆固醇的分解和排泄，减少其合成和吸收，改变其在血清和组织中的分布，从而降低血液中胆固醇的含量［11］;曲池穴可通腑泄浊，清热利湿，调和气血，有报道表明穴位注射曲池有降低患者血脂的功效［12］。

研究结果显示，采用高脂饮食复制的HLP模型小鼠血清中ET含量较正常组明显升高，与血脂水平呈正相关;NO含量明显降低，与血脂水平呈负相关，表明模型组小鼠体内自由基大量产生、抗氧化损伤能力下降。且在高脂血症发生、发展过程中ET合成与分泌增加，NO的合成与释放减少，从而导致血管痉挛收缩，血管张力变大，血液循环障碍，血小板聚集、附壁血栓形成等病理变化。针刺丰隆、曲池、三阴交穴可降低模型小鼠血清ET含量，提高NO含量，与模型组比较有显著性意义，说明该方法可改善自由基代谢，从而减轻高脂血症引发的氧化损伤，且具有调节血管平滑肌收缩与舒张状态，抑制血小板聚集，防止单核细胞等对内皮细胞的黏附、损伤，抑制附壁血栓形成，以维持血管张力及血液运行的畅通，从而达到保护血管内皮细胞免受损伤的作用。

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5 陈奇主编.中药药理研究方法学.第1版.北京:人民卫生出版社，2006.521.

6 张英，张 波，王柏欣，等.雌激素对去卵巢大鼠血清NO，NOS及ET-1水平的影响.标记免疫分析与临床，2003，10:156-157.

7 张庆，邵华强，谷艳，等.芪丹合剂对高脂血症大鼠血清ET和CGRP的影响.实用医药杂志，2005，22:911.

8 毛孙忠，范小芳，吴小脉，等.麦绿素对实验性高脂血症大鼠血脂及MDA、SOD、ET-1、NO 的影响.食品科学，2007，28:306-308.

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10 张唐法，万文俊，张红星，等.电针丰隆穴治疗高脂血症的多中心观察.中国临床康复，2006，10:18.

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