离子色谱法测定牛奶中硫氰酸根离子

帕提曼·卡吾力 古丽曼·木哈买提拜 贾新建

硫氰酸钠（NaSCN）是白色斜方晶系结晶或粉末，毒害品。它的毒性主要由其在体内释放的氰根离子在体内能很快与细胞素氧化酶中的三价铁离子结合，抑制该酶活性，使组织不能利用氧而产生中毒。原料乳或者奶粉中掺入硫氰酸钠后可有效的抑菌、保鲜，延长产品的保质期，故不法奶户用这点将硫氰酸钠掺入原料乳或者奶粉中，损害了消费者的健康。随着卫生部在食品安全方面的工作力度逐渐加大，2008年12月12日卫生部发布的《食品中可能违法添加的非使用物质和易滥用的食品添加剂名单（第一批）》中明确规定乳及乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。国家为打击违法添加非使用物质和滥用食品添加剂专项整治中，也制定有检测方法，本方法在使用过程中，结果准确，重复性好，检测限低，适用于牛奶中硫氰酸根的快速测定，保障了对硫氰酸根的离子在牛奶中的残留监控。

1 材料与方法

1.1 仪器

离子色谱仪：配备淋洗液发生器和电导检测器；

离心机：冷冻离心机。

1.2 试剂与材料

试验用水均为超纯水，乙氰（色谱纯），固相萃取小柱：ONGUAR RP 柱（2.5 ml），或相当者（如 C18），使用前依次用5 ml甲醇和10 ml水活化。硫氰酸标准品：北京化工厂生产。

硫氰酸标准储备液：将硫氰酸标准品于80℃烘箱内烘干2 h。准确称取干燥后的硫氰化钾1.6732 g于1000 ml容量瓶中，定容，混匀。即得1000 mg/kg硫氰根标准储备液。

硫氰酸标准中间液：硫氰酸标准储备液1 ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液含硫氰酸10mg/l。

硫氰酸标准使用液：移取 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml硫氰酸标准中间液、用水定容于10 ml容量瓶中，浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/l。

样品处理与测定：取牛乳样品4 ml，加入5 ml乙氰沉淀蛋白，取清液 1 ml，加水稀释至 10 ml，0.22 μm尼龙膜过滤后，过ONGUAR RP柱，即可进样。

1.3 离子色谱参考条件

色谱柱：强亲水性阴离子交换柱。IONPACAS16，4.0 mm×250 mm 分析柱；IONPAC AG16，4.0 mm×50 mm保护柱；或其他相当者。

流动相：KOH溶液，梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在线发生器在线产生。KOH梯度程序如下：

表1 流动相梯度

流速：1.0 ml/min；抑制器：ASRS-300型抑制器，4 mm；抑制器抑制模式：外接水模式，抑制电流175 mA；柱温：30 ℃；进样体积：100 μl。

1.4 标准曲线的绘制

按2.4建立的仪器条件，取浓度范围在0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/ml的硫氰酸根标准溶液各加 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，用水定容于10 ml容量瓶中，上机测定，峰面积是：0.0478、0.1021、0.2672、0.5673、1.1523，所得标准曲线，方程分别为Y=0.6199-0.0092X，相关系数r=0.9999。

1.5 回收率试验

在2.4项建立仪器条件下对添加了0.25、0.5、1.25 mg/kg硫氰酸的牛奶进行了回收率的测定试验和批内相对标准偏差，重复测定3次，计算批间相对偏差，结果见表2。

表2 牛奶中硫氰酸不同添加浓度的回收率测定结果

图1 硫氰酸根标准曲线

图2 硫氰酸根标准品图谱

图3 标准添加样1图谱

图4 标准添加样2图谱

图5 牛奶样品平行样1图谱

图6 牛奶样品平行样2图谱

1.6 样品分析与结果（见表3）

表3 样品测定结果

2 结果计算

X=(C-C0)×9×10/4

式中：X——液态牛奶中硫氰酸的含量(μg/ml)；

C——由标准曲线得到试样溶液中硫氰酸的浓度(μg/ml)；

9——液态奶的体积与乙腈体积之和(ml)；

4——液态奶的体积(ml)；

10——稀释倍数；

3 精密度

在重复性条件下，获得的硫氰酸根的独立测试结果能够满足标准要求。

4 讨论

4.1 在测定样品前，如果实验室温度较低，应等待柱温升至30℃后再开泵。

4.2 配制好的样品和流动相使用前0.45 μm或0.2 μm的水系滤膜过滤，可以获得相对稳定的回收率。

4.3 方法中“只加水”淋洗液技术，能够自动产生需要的淋洗液浓度，替代了传统人工配制的方式，克服了因手动配制带来的浓度不准确，操作繁复缺点。