胆红素对临床检验结果的干扰及消除研究

袁云仙

（广东省茂名石化医院，广东 茂名 525000）

随着医学事业的不断发展和进步，国内外学者专家已针对胆红素（bilirubin，BR）的干扰机制及干扰的消除作了大量的研究[1]。一般认为，由于血清对于光的吸收或者散射能够使反应的本底进行提升，因此在设置动力学检测试验时一般不考虑设空白，但是对于终点检测法却设标本空白。胆红素作为内源性干扰物，一方面要对自身的本底吸光度进行干扰，另一方面又可以参与整个反应或是存在着自身所发生的副反应。本研究是以胆红素为主要研究对象，对胆红素本底吸光度的干扰情况进行探讨，并提出在实际过程中要积极地进行干扰的消除。

1 资料与方法

1.1 资料

对茂名石化医院门诊近1个月来的无药物治疗史者的非抗凝血标本进行随机地采集，为30份（没有选择性，仅仅是通过随机选择的方式进行血样标本的采集，而且选择样本之后，运用分离的方法对血清进行分离，没有检测出溶血、脂肪血，因为这两类物质也是对临床生化检验结果有干扰性的。这就确保了单一变量变化的研究）。胆红素标准液以及分析检测试剂盒均为进口，为AR。PCR仪、紫外-可见光分光光度计。

1.2 方法

首先对上述30份血液样本进行震荡处理并获取人工溶血模型；然后在PCR分析仪上对干扰物的动力学进行检测分析；运用紫外-可见光分光光度法进行光谱扫描；运用EP7-P方案对胆红素进行干扰评价；最后进行数据的处理。

2 结 果

2.1 吸光特性

通过上述方法的阐述，可以发现胆红素在血清溶血中呈现出特异的吸收光谱，其主吸峰为470nm。在温度为36.5℃的条件下，胆红素的吸收光谱在10min前后的差值曲线变化为：在主吸收峰470nm的吸光度处有一定的下降，下降的幅度约为3.5%，现将其置于360nm的波长条件下，其吸光度又呈现出上升的趋势。这就说明了胆红素在不同的波长区域下，其吸光度值的大小是不同的，而且其差值曲线也是随着波长的变化而变化着的。表1为我们所得的血清中血红蛋白对常用的组合波长动力学分析吸光度的影响结果。

2.2 干扰分析

胆红素对动力学检测项目的干扰如表2所示。

综合表1和表2可以看出，尽管使用了双波长进行检测，胆红素的吸光度值本底还是其时相漂移都不为零，所以双波长分析不能消除胆红素对临床分光光度法所产生的干扰[2]。由于动力学检测采用吸光度变化率，本底吸光度被自动扣除，故胆红素和血红蛋白对动力学检测的干扰主要是它们在溶液中的不稳定性所发生变化（表1），而对终点法的干扰主要来自其光吸收所产生的本底（表2）。

表1 血清中血红蛋白对常用组合波长动力学分析吸光度的影响

表2 胆红素对动力学检测项目的干扰

3 讨 论

3.1 胆红素吸收谱线漂移的机制分析

胆红素吸收曲线的漂移表现在主吸收峰值的降低和470nm附近吸光度的增加。有研究表明，胆红素吸收曲线的漂移是由于氧化、变构（温度及pH）、变性（多聚体的形成和四聚体的降解）等一系列效应所致。由温度所致的变构效应是可逆的，然而氧化和变性是不可逆的[3]。在温度为36.5℃的条件下，胆红素的吸收光谱在10min前后的差值曲线变化为：在主吸收峰470nm的吸光度处有一定的下降，下降的幅度约为3.5%，现将其置于360nm的波长条件下，其吸光度又呈现出上升的趋势。这就说明了胆红素在不同的波长区域下，其吸光度值的大小是不同的，而且其差值曲线也是随着波长的变化而变化着的。

3.2 干扰的消除

关于胆红素干扰的消除，主要是通过如下几个方面进行干扰的消除的：①胆红素一个重要的特性就是可以参与或者干扰某些检测体系的主反应，其作用的机制也很明确，因此可以将其待定项目的干扰方向报告给临床。这些干扰的项目主要包括：AST、TG、UA、LD以及GLU等。②对血凝分析时干扰的消除：在血凝分析时，当遇到高浓度的胆红素样品时，其本底浊度必然会存在。这个过程中就牺牲了有效信号的动态范围为代价的，不仅降低了检验结果精密度，而且本底浊度过高掩盖了标本吸光度的变化时无法测出结果。这时，可以双磁路磁珠法进行干扰的消除，从而保证了临床检验结果不受胆红素的干扰，所测值准确性大大提高。

[1]程正江.血红蛋白和胆红素干扰临床化学分析的机理初探[J].国外医学,2004,25(6):111-112.

[2]郭洪晨.胆红素对临床检验结果的干扰及消除[J].检验医学与临床,2009,6(18):98-100.

[3]甄广怀.不同副波长消除胆红素对血清无机磷测定的干扰[J].检验医学与临床,2006,3(5):321-333.