α-硫辛酸、前列腺素E对糖尿病膀胱病变大鼠线粒体氧自由基损伤的保护作用

陈爱武

沈阳市于洪区人民医院泌尿外科，辽宁沈阳 110141

神经源性膀胱（diabetic neurogenic bladder，DNB）是常见的糖尿病外神经病变，其发病率高达25%，是糖尿病神经病变在泌尿系统的主要表现，患者常出现尿潴留、尿失禁、排尿不尽、泌尿系感染、肾积水、膀胱造瘘。近年来国内外学者采用抗氧化剂治疗DNB，但关于联合抗氧化作用的协同作用尚未见报道，本文通过链脲佐菌素（STZ）诱导DC大鼠模型，观察α-硫辛酸、前列腺素E对膀胱肌线粒体氧自由基损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 中国医科大学实验动物中心提供清洁级SD大鼠共60只，雄性，210～240 g。随机取50只（空白对照组给予生理盐水）大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ），剂量为65 mg/kg。注射后2周监测血糖，均确认为糖尿病。

1.1.2 分组 空白对照：注射生理盐水；阳性对照组：链脲佐菌素；链脲佐菌素+α-硫辛酸组；链脲佐菌素+维生素E（15 mg/kg）；链脲佐菌素+维生素 E（60 mg/kg）；糖尿病+α-硫辛酸组+维生素 E，试验第8周取大鼠提取线粒体测量相应指标。各组大鼠均为10只。α-硫辛酸（德国史达德公司）50mg/kg，2次/d腹腔注射。

1.1.3 线粒体提取 将禁食大鼠断头，取出肝脏剪成碎块，反复冲洗后将肝组织碎块制成匀浆，650 g离心5 min，留上清平衡后10 000 g离心25 min取中层制成混悬液测量指标。

1.2 指标测定

1.2.1 大鼠肝脏线粒体丙二醛（MDA）含量测定 以考马司亮蓝法定蛋白，设定缓冲体系为以0.1 mol/L HIS溶液溶于氯化钾0.25 mol/L中 （pH=7.5），加入各组糖尿病大鼠线粒体，水浴45 min后加入25%TCA 1.0 ml终止反应，冷却后加NBA和乙醇混合液4.0 ml，用力振摇45 s，离心取上面正丁醇层，525 nm波长比色，用硫代巴比妥酸法测定MDA。

1.2.2 大鼠肝脏线粒体琥珀酸脱氢酶的测定 硫酸甲酯吩嗪（PMS）反应法测量线粒体琥珀酸脱氢酶活性，SDH活性计算：（标准-测定）/标准=μmol/（min·mg）。

1.3 统计学处理

采用SPSS 14.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用 t检验。

2 结果

用药后线粒体MDA和琥珀酸脱氢酶活性的变化见表1。

表1 各组大鼠线粒体MDA和琥珀酸脱氢酶活性变化Tab.1 Mitochondria of rats in each group MDA and SDH changes

3 讨论

糖尿病膀胱是糖尿病常见并发症之一，多发生于血糖控制比较差的患者。因发病隐蔽，出现尿频、尿不尽时症状已经比较严重，采用营养神经治疗多无法控制症状。研究表明糖尿病膀胱功能障碍的主要原因之一是缺血/再灌注损伤[1-2]。研究表明[3]糖尿病膀胱张力的变化产生缺血再灌注会使氧自由基的生成数量明显增加，脂质分子中的不饱和脂肪酸在氧自由基氧化生成过氧化脂质丙二醛（MDA）等小分子代表性产物，导致线粒体膜的损伤，阻断其链式反应可能会控制糖尿病膀胱功能障碍[4]。

α-硫辛酸是一种双硫化合物，它的抗氧化能力是葡萄糖的5～10倍，兼具脂溶性与水溶性的特性。可以在全身通行无阻，到达任何一个细胞部位。美国加州大学柏克莱分校的派克博士（Dr.Lester Packer）发现硫辛酸不像别的抗氧化剂在体内只有一项特定的任务，它具“自由体”的身份，能在其他抗氧化剂短缺时为之“代行职责”，体内缺乏维生素E或C，硫辛酸将暂时接手它们的工作。它具有400倍的维生素C和E的抗氧化作用，而且硫辛酸还能大大增强维生素C和E的作用。德国早在20世纪80年代即开始应用α-硫辛酸治疗糖尿病外周神经病变，取得了较好的临床疗效[5]；近年国内外学者研究提示α-硫辛酸治疗糖尿病外周神经病变可能是通过抗氧化作用[6-7]。

维生素E是脂溶的抗氧化剂，降低线粒体细胞结构的多价不饱和脂肪酸免受自由基的损害，研究表明线粒体高浓度维生素E，减少过氧化反应产生的丙二醛，并且明显提高收缩反应[8]。金滨等[9]研究表明，维生素E对膀胱功能的保护作用是通过抗氧化和维持钙稳态的双重机制实现的。

本研究采用小剂量维生素E对糖尿病大鼠膀胱功能进行保护，大鼠线粒体MDA和SDH与对照组比较，差异均无统计学意义；大剂量维生素E对糖尿病大鼠膀胱功能进行保护，大鼠线粒体MDA和SDH与对照组比较，差异有统计学意义。因此推测，维生素E在剂量较大时通过维持钙稳态对膀胱功能起保护作用，在剂量比较小时通过抗氧化对膀胱功能起保护作用。小剂量维生素E对线粒体MDA和SDH的影响无保护作用，这与Levin等[4]的研究结果一致。本文采用小剂量维生素E组+α-硫辛酸联合应用保护线粒体，疗效优于单独应用α-硫辛酸组，考虑为硫辛酸增强维生素E的抗氧化作用。

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