Caveolin-1在前列腺癌中的表达及临床意义

卢桂尧 杨永强 范小明

前列腺癌(prostatic carcinoma，PCa)是一种严重威胁男性健康的恶性肿瘤，目前在美国前列腺癌的发病率已经超过肺癌成为第一位危害男性健康的肿瘤[1]，近年来我国人前列腺癌发病率有明显上升趋势，但是目前前列腺癌病因及发病机制尚未完全明确。Caveolin-1(小窝蛋白)是caveolae膜结构的标记性蛋白，它与细胞信号传导、物质转运、细胞增殖等密切相关，与肿瘤发生、发展的关系也非常密切[2]。Caveolin-1在大多数肿瘤形成中可能发挥抑癌基因样作用[3];而在极少数肿瘤中能促进癌细胞增殖和转移。本实验通过免疫组化来研究caveolin-1在前列腺癌中的表达情况，以探讨caveolin-1与前列腺癌临床预后意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院1999～2003年前列腺癌石蜡标本50例(均取自肿瘤原发灶)，经病理学确诊。年龄45～78岁，中位年龄59岁;于手术中取得后经4%多聚甲醛固定，并制成石蜡标本。

1.2 试剂 兔抗人Caveolin-1蛋白多克隆抗体为Santa cruz产品，稀释度为1:50;EnVision免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术公司。

1.3 方法 采用免疫组化EnVision法。石蜡标本4 μm连续切片，其中一片用做常规HE染色，其余用做免疫组化。切片脱蜡至水，3%H2O25～10 min灭活内源性酶，蒸馏水洗3遍。微波修复抗原，滴加抗原修复液室温10 min，蒸馏水洗3遍。滴加正常山羊血清封闭液室温10 min，甩去血清后滴加1:50 caveolin-1多抗，4℃过夜，0.5 mol/L PBS洗5 min×3次。滴加辣根过氧化物酶(HRP)抗兔二抗，37℃，50 min，0.5 mol/L PBS洗5 min×3次。经DAB显色，苏木素轻度复染，脱水、透明、封片。阴性对照用PBS代替一抗。

1.4 结果判定 采用Olympus光学显微镜观察caveolin-1的表达强度，标准为0分:0% ～5%肿瘤细胞染色，1分:6% ～25%肿瘤细胞染色，2分:21% ～50%肿瘤细胞染色，3分:50%以上肿瘤细胞染色。0分被认为为阴性，而1，2，3分则为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS16.0软件分析数据。Kaplan-Meier法进行生存分析并绘制生存曲线，log-rank检验比较各组生存率，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Caveolin-1在前列腺癌组织中的表达 免疫组化结果显示Caveolin-1在前列腺癌组织中的表达明显高于正常前列腺黏膜(图1)。在50例前列腺癌组织中，阴性为15例，阳性为35例。Caveolin-1在前列腺癌组织中的阳性表达率为70%。

图1 免疫组化显示Caveolin-1在前列腺癌组织中的表达，定位于包膜胞浆。(箭头所示为肿瘤间质)

2.2 Caveolin-1与前列腺癌患者预后的关系 对50例前列腺癌患者进行生存预后分析，Kaplan-Meier分析显示Caveolin-1阳性的前列腺癌患者的预后差，而阴性的前列腺癌患者预后好。Log-rank比较两组生存率差异有统计学意义(图2)(P=0.028)。

图2 Kaplan-Meier评估Caveolin-1在前列腺癌组织中的表达与预后

3 讨论

Caveolae是1953年由Palade发现的，当时命名为质膜囊泡(Plasmalemmal vesicles)。在Caveolae的组装过程中Caveolin及胆固醇起关键作用，如果敲除Caveolin的基因，即不能形成Caveolae，所以 Caveolin作为 Caveolae的标记蛋白[4]。Caveolin-1是20世纪90年代中期开始的克隆，其基因定位于7q31.1[5]，而此位点在多种肿瘤中(如肝癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫肌瘤、胃腺癌等)出现缺失或断裂，提示Caveolin-1与肿瘤的发生发展密切相关。研究提示Caveolin-1过表达与肿瘤分级和淋巴结转移有关，在一些抗药性癌细胞株中，如抗紫杉醇肺癌细胞系、Caveolin-1抗雄激素大鼠前列腺癌细胞株，Caveolin-1亦表达上调。这些研究说明，Caveolin-1可能与一些肿瘤的发生、发展、浸润、转移及肿瘤细胞的耐药性有一定的关系。近年的研究显示，在膀胱上皮癌中，Caveolin-1表达明显升高，且有促进癌细胞的增殖及淋巴结的转移的作用[6，7]。这提示 Caveolin-1在不同的肿瘤中发挥着不同的作用。

本研究结果显示，Caveolin-1在前列腺癌组织中呈高表达，而在正常组织中不表达或弱表达，肿瘤组织中表达强度显著高于正常组织，且肿瘤患者的Caveolin-1的表达水平与患者预后相关。说明Caveolin-1可能为前列腺癌诊断及预后提供新的依据。

综上所述，本研究发现Caveolin-1在大部分前列腺癌组织中高表达(阳性率为70%)，提示其可能参与了前列腺癌的发生或发展。这不仅为研究前列腺癌的发病机制提供了线索，而且对前列腺癌的诊断和治疗也具有一定的重要意义。该基因在前列腺及前列腺癌织中的具体作用及究竟如何发挥功能有待后续研究。

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