鸡传染性喉气管炎冻干苗（喉必妥）免疫保护试验

刘兴彩，邹立宏，张力青，顾梦辰，王彪，尤永君

（瑞普（保定）生物药业有限公司，河北保定 071000）

鸡传染性喉气管炎（ILT）是由α疱疹病毒引起的一种鸡的急性上呼吸道传染病。该病呈世界性流行，常因其病毒毒力不同导致病症的严重程度各异，重者死亡率可达70%。目前对本病尚无有效的治疗药物，一般采取对症治疗，可使病鸡呼吸困难的症状缓解。在实际生产中，如果首免时间过早，或者免疫剂量过大，免疫后部分鸡容易发生结膜炎、呼吸道症状甚至死亡，同时会影响到体增重；而免疫剂量过小，则会导致免疫无效。为此，我们进行了不同首免日龄、不同免疫剂量的鸡传染性喉气管炎冻干苗（喉必妥）免疫保护试验，以确定最佳的首免日龄和免疫剂量。

一、材料与方法

1.材料。

（1）喉必妥：由瑞普保定生物药业有限公司生产，生产批号为100803，每瓶1 000羽份，每羽份含量≥102.7EID50。

表1 21日龄青脚麻鸡不同免疫剂量免疫副反应鸡只数及分值表

（2）试验动物：21日龄青脚麻鸡30只，35日龄青脚麻鸡80只（由沧州温氏集团提供）。

（3）攻毒毒株：瑞普（保定）诊断研究中心分离的ILT病毒AH1104株。

2.方法。

（1）ILT攻毒株的传代复壮：将ILT病毒AH110415株稀释后接种鸡胚，孵化120 h后收获死胚、活胚的尿囊液和绒毛尿囊膜备用。

（2）21日龄青脚麻鸡接种反应试验及称重：将21日龄青脚麻鸡30只，随机分为3组，每组10只，第1、2组为疫苗免疫组，第3组为空白对照组，将喉必妥冻干苗用PBS分别稀释成每50μl含毒量为0.5羽份、1羽份的疫苗液，分别免疫1、2组试验鸡，免疫途径为点眼，每只鸡接种50μl。免疫后每天观察鸡只的精神状态、饮水和采食变化、呼吸道症状以及鸡的眼睛变化等并做记录，同时在接种后第14天、21天和28天称体重。对接种反应评级并打分进行量化，具体标准分为无流泪症状鸡（0分）、免疫副反应轻微鸡只（1分）、免疫副反应严重鸡只（2分），鸡只出现甩头、咳嗽、有呼吸道反应的均计为严重（2分），出现羞明的计为3分。

（3）35日龄青脚麻鸡接种反应试验及称重：将35日龄的青脚麻鸡，随机分为8组，每组10只，第1～7组为疫苗免疫组，第8组为空白对照组，将喉必妥冻干苗用PBS分别稀释成每50μl含毒量为0.2羽份、0.5羽份、0.8羽份、1羽份、2羽份、5羽份和10羽份的疫苗液，分别免疫1～7组试验鸡；将21日龄的青脚麻鸡随机分为2组（0.5和1羽份免疫剂量），每组10只。免疫途径为点眼，每只鸡接种50μl。免疫后每天观察鸡只的精神状态、饮水和采食变化、呼吸道症状以及鸡的眼睛变化等并做记录，同时在接种后14日龄和21日龄称体重。对接种反应评级并打分进行量化，具体标准同“21日龄青脚麻鸡接种反应试验及称重实验”。

表2 35日龄青脚麻鸡不同免疫剂量免疫副反应鸡只数及分值表

（4）免疫保护力试验：21日龄免疫组和35日龄免疫组分别在ILT疫苗免疫后21天，进行喉内灌 注104.0EID50/0.2 ml的ILTV（AH1104），观察10 d，每日观察鸡的发病及死亡情况，并对死亡鸡剖检，观察病理变化。为了更好的表达免疫保护力效果，对鸡只的临床表现进行量化，标准如下：鸡只表现精神沉郁，采食下降记1分，眼红轻微肿1分，流泪红肿、明显流泪2分，鸡只有呼吸道疾病2分，鸡只死亡3分（除鸡只死亡之日算起外，在后面的观察时间内也计入）。

二、实验结果

1.从表1、表2可以看出，在免疫剂量相同的条件下，21日龄免疫组的免疫副反应明显大于35日龄免疫组，21日龄免疫组出现免疫副反应的鸡只数也明显多于35日龄免疫组，免疫副反应持续时间也延长。21日龄和35日龄免疫组，在喉必妥免疫后3～4 d，除1组（0.2羽份/只）外，各个免疫剂量组开始出现轻微流泪症状，眼结膜发红、充血，采食量减少，部分鸡眼睑肿胀、出现呼吸道症状，经过2～7 d时间即可恢复正常；35日龄免疫组，随着免疫剂量的增大，出现免疫副反应鸡只数逐渐增多、免疫副反应逐渐加重、免疫副反应持续时间逐渐延长。

2.从表3、表4可以看出，在免疫剂量相同的条件下，21日龄免疫组鸡群周体增重明显小于35日龄免疫组；21日龄和35日龄两个免疫日龄组，都随着免疫剂量的增加，对鸡只的周增重影响加重。

3.免疫保护力实验结果，攻毒后观察10天，21日龄免疫的青脚麻鸡，对照组有4只死亡，免疫组均未出现死亡。35日龄免疫的青脚麻鸡，对照组有3只死亡，各个免疫组均未出现死亡。从表5、表6可以看出，21日龄免疫组，免疫剂量为0.5羽份/只鸡时，攻毒时仅有2只鸡出现临床症状，未出现死亡，对照组有8只鸡出现眼炎和呼吸道症状，且症状严重；35日龄免疫组，免疫剂量为0.2羽份/只鸡时，攻毒时仅有1只鸡只表现出临床症状，但均未出现死亡，对照组有5只鸡出现眼炎和呼吸道症状。

三、讨论

传染性喉气管炎弱毒活疫苗对鸡存在一定的危害，主要表现在，使用疫苗后会造成一定的病理损伤，严重者会出现较为明显的临床症状，同时还会使非免疫鸡群发病；疫苗使用后易散毒，导致病毒从免疫鸡(群)向易感鸡 (群 )传播，因此其弱毒活疫苗主要应用于流行地区的鸡群传染性喉气管炎的免疫和预防，非疫区使用时要慎重，并要做好鸡场的隔离和安全防护。

表3 21日龄免疫青脚麻鸡后体增重（g）比较

表4 35日龄免疫青脚麻鸡后鸡群体增重（g）比较

表5 21日龄免疫组攻毒保护试验病死鸡只数及分值

表6 35日龄免疫组攻毒保护试验发病鸡只数及分值

我们本次试验，目的就是了解ILT疫苗合适的免疫日龄和免疫剂量。通过免疫副反应试验发现，在相同免疫剂量条件下，21日龄免疫组免疫后其副反应分值明显比35日龄免疫组分值高，同时，通过对免疫后测体重发现，21日龄免疫组的体增重幅度明显小于35日龄免疫组，由此我们推荐免疫日龄为35日龄。

通过接种反应试验发现，在应用1羽份以下的免疫剂量免疫时，鸡群的免疫副反应相对较小，而且鸡群在5天内即可恢复，同时鸡群的周体增重也相对较大；通过免疫保护力试验（35日龄免疫组）得知，虽然各个免疫剂量的鸡群均未出现死亡，但在0.2羽份免疫剂量组，攻毒时有鸡只出现临床症状，说明未能获得很好地免疫保护，0.2羽份以上的免疫剂量对鸡群产生较好的保护力，但随着免疫剂量的增大，免疫反应逐渐加重；因此对于青脚麻鸡的喉必妥免疫，建议每只鸡应用0.5羽份的剂量。