磷霉素与9种抗菌药物分别联用对不动杆菌的体外抗菌活性研究

杨莹莹，王镇山，薛 欣，聂大平，李玉中

(1.大连医科大学 附属第二医院 呼吸科，辽宁 大连 116027；2.凤城市中心医院 内科，辽宁 丹东 118100；3.大连医科大学 附属第二医院 检验科，辽宁 大连 116027)

近年来，随着广谱抗菌药物的广泛使用或滥用，出现了多重耐药甚至是泛耐药菌株，多重耐药性不动杆菌感染的治疗问题迫在眉睫。磷霉素化学结构特异，除了具有广谱抗菌作用外，还具备良好的酶稳定性、无交叉耐药性。国外有学者报道，磷霉素与其它抗菌药物在体外联合应用具有协同抗菌效应[1,2]。本文研究磷霉素与9种抗菌药物体外联合药敏，为临床联合用药提供实验室依据。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 菌株：收集自2008年2月～2009年10月大连医科大学附属第二医院临床患者的痰标本，经API 鉴定系统鉴定为不动杆菌47株。标准参考菌株为ATCC25922，由中国药品生物制品检定所提供。

1.1.2 培养基：MH(A)培养基及胰蛋白胨大豆肉汤均为北京奥博星生物技术有限责任公司产品，批号分别为20061125和20070202。

1.1.3 抗菌药物：磷霉素(fosfomycin,FOM)为东北制药总厂产品，每支2.0 g，批号为0907119；阿米卡星(amikacin,AMK)为上海禾丰制药有限公司产品，每支0.2 g，批号为090702；头孢他啶(ceftazidime,CAZ)为韩美药品株式会社产品，批号为10G081209；头孢哌酮/舒巴坦(cefoperazone/sulbactam)为辉瑞制药有限公司产品，批号为95839074；头孢吡肟(cefepime,FEP)为深圳信立泰药股份有限公司产品，批号为20090508；亚胺培南/西司他丁(imipenem and cilastatin)为杭州默沙东制药产品，批号为09277；左氧氟沙星(levofloxacin,LVLX,效价99.7%)、环丙沙星(ciprofloxacin,CPLX,效价84.2%)、美罗培南(meropenem,MEM,效价87.76%)、头孢呋辛(cefuroxime,CXM,效价92%)为中国药品生物制品检定所产品。

1.2 方 法

1.2.1 测定单独应用时的最低抑菌浓度(MIC)：琼脂二倍稀释法测定磷霉素与其它9种抗菌药物的MIC。

1.2.2 测定联合应用时的MIC：按1∶1的浓度比例，琼脂二倍稀释法测定磷霉素与9种抗菌药物分别联用的MIC。

1.2.3 计算部分抑菌浓度(FIC)指数：FIC指数=A药联合时的MIC/A药单用时的MIC+B药联合时的MIC/B药单用时的MIC。

1.2.4 判定标准：FIC指数≤0.5为协同作用；0.52为拮抗作用。

2 结 果

2.1 磷霉素和其它9种抗菌药物单独应用对47株不动杆菌的体外抗菌活性

如表1所示，根据CLSI制定的耐药标准[3]，磷霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢呋辛、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、阿米卡星对不动杆菌的MIC50、MIC90均显示耐药，美罗培南、亚胺培南/西司他丁对不动杆菌的MIC50均显示中介。

表1 磷霉素与其它9种抗菌药物单独应用对47株不动杆菌的体外抗菌活性

2.2 磷霉素与其它9种抗菌药物分别联用对47株不动杆菌的体外抗菌活性

如表2所示，磷霉素与这9种抗菌药物分别按1∶1联用对47株不动杆菌的MIC50值均有所下降，其中除左氧氟沙星及头孢哌酮/舒巴坦MIC50值下降至原值1/2外，其余均降至原值的1/4或1/4以下。

表2 磷霉素与其它9种抗菌药物分别联合应用对47株不动杆菌的体外抗菌活性

药物联合比例为1∶1

2.3 磷霉素与其它9种抗菌药物分别联用的体外相互作用所占比例

如表3所示，磷霉素与9种抗菌药物分别按1∶1联用后协同/相加作用的比例大于无关作用的比例，未见拮抗作用，尤其是磷霉素与阿米卡星联用后，使后者由耐药变成敏感。

表3 磷霉素与9种抗菌药物分别联用的体外相互作用所占比例

3 讨 论

近年来随着广谱抗菌药物的广泛使用或滥用，细菌耐药率呈逐渐上升趋势，常呈现多重耐药性甚至泛耐药性[4]。有报道磷霉素与其它抗菌药物联合应用可增加后者的抗菌活性。

本研究结果显示，磷霉素与其它9种抗菌药物虽然对不动杆菌的MIC值较高，仅美罗培南、亚胺培南/西司他丁显示中介，其余均显示耐药；但磷霉素与这9种抗菌药物分别联合应用后，各自的MIC值均有所降低，以协同或相加作用为主，增强了后者的抗菌活性。尤其是磷霉素与阿米卡星联用后，使后者由耐药变成敏感，可能与近年来阿米卡星使用较少有关。

磷霉素属于细菌繁殖期快速杀菌剂，抗菌谱广，对革兰阳性球菌及革兰阴性杆菌均有杀灭作用；其化学结构简单而独特，不易被细菌转化为菌体内有用的物质，与其它抗菌药物无交叉耐药性；分子小，渗透性强，细菌改变膜通透性对其作用影响不大；磷霉素作用于细菌细胞壁合成的第一步，因其化学结构与细菌细胞壁粘肽合成初期的烯醇式丙酮酸转移酶(EP转移酶)的底物磷酸烯醇丙酮酸(PEP)相似，竞争性抑制使该转移酶失活，阻抑了粘肽合成的第一步，从而抑制细菌细胞壁的早期合成，破坏其完整性，有利于其它抗菌药物进入细菌体内，通过不同的作用机制而杀灭细菌；能够破坏细菌生物被膜或抑制其形成[5,6]。本研究为磷霉素与其它抗菌药物联合应用提供了理论依据。

参考文献:

[1] Grif K，Dierich MP，Pfaller K，et al.In vitro activity of fosfomycin in combination with various antistaphyloccal substances[J].J Antimicrob Chemother,2001,48(2):209-217.

[2] Kastoris AC，Rafailidis PI,Vouloumanou EK，et al.Synergy of fosfomycin with other antibiotics for Gram-positive and Gram-negative bacteria[J].Eur J Clin Pharmacol,2010,66(4):359-368.

[3] Clinical and Laboratory Standards Instiute (CLSI)/NCCLS[S].Performence stcmdards for antimicrobial susceptibility testing stamdards:nighteenth informational supplement,2009.M100-S19.

[4] 梁庆华.鲍曼不动杆菌的临床分布特征及耐药趋势分析[J].实验与检验医学,2009,27(2):185-186.

[5] 黄祥,王建民,李勇.磷霉素的药动学药效学特性与临床应用[J].中国医院药学杂志,2005,25(2):156-158.

[6] 连家建,唐青云.磷霉素钠与其他抗菌药联用的协同作用及其临床应用[J].国外医药(抗生素分册)，2003,24(1):44-46.