鼻咽癌患者EBV感染与血管生成关系研究

武要洪,李宝忠,李国萍,周永春,张 楠,李 佳

(1.昆明医学院第三附属医院头颈科;2.昆明医学院第三附属医院肿瘤研究所,云南昆明,650118)

鼻咽癌是指发生于鼻咽黏膜的恶性肿瘤,男多于女。发病年龄大多为中年人,亦有青少年患病者[1]。病因与种族易感性、遗传因素及病毒感染等有关,鼻咽癌恶性程度较高,早期即可出现颈部淋巴结转移。Epstern-Barr病毒(EBV)是一种嗜人类淋巴细胞的γ-DNA疱疹病毒,与鼻咽癌发生、发展密切相关,通常呈隐性感染[2]。有研究表明,鼻咽癌患者组织中血管内皮生长因子(VEGF)呈高表达,且与微血管密度、淋巴结转移、远处转移等显著相关[3]。本研究通过检测鼻咽癌患者体内EBV及VEGF水平,旨在探讨鼻咽癌患者EBV感染与血管生成的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

病例选自2006年1月～2008年1月在昆明医学院第三附属医院头颈外科住院治疗的54例鼻咽癌患者(实验组),其中男28例,女26例。年龄26～79岁,中位年龄55岁。所有病例均经病理学确诊。另选同期来本院体检的40例健康者作为对照组。

1.2 标本收集

所有患者空腹抽取外周静脉血2 mL,30 min内1 500 r/min离心10 min,分离血清,置于-70℃保存待测。实验前30 min取出平衡至室温。检测血清中EBV及VEGF水平。

1.3 检测方法

1.3.1 定性PCR法检测血清中EBV水平:人血清EBV PCR试剂盒购自深圳晶美生物工程公司,实验过程严格按照试剂盒说明书进行。PCR扩增目的片段,同时设空白对照、阴性对照及阳性对照电泳检测PCR产物。

1.3.2 双抗夹心ELISA法检测血清中VEGF水平:人血清VEGF试剂盒(进口分装)购自深圳晶美生物工程公司,最小可测人血清VEGF为30 pg/mL。实验过程严格按照试剂盒说明书进行。采用BIO-RAD550型酶标仪测定,在450 nm处读取吸光度(D),测定值按标准曲线换算成VEGF含量。

2 结 果

2.1 两组患者血清VEGF水平比较

实验组患者血清VEGF水平为(143.86±19.49)pg/mL显著高于40例对照组血清VEGF水平(51.23±12.66)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.01),见表1。

2.2 鼻咽癌EBV阳性患者与EBV阴性患者血清VEGF水平比较

经检测实验组患者中,有24例外周血EBV检测呈阳性,30例外周血EBV检测呈阴性,检测发现,EBV阳性患者血清VEGF水平明显高于EBV阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 鼻咽癌患者EBV感染状况血清VEGF水平比较( ±s)

表1 鼻咽癌患者EBV感染状况血清VEGF水平比较( ±s)

注:与对照组比较,＊＊P<0.01;与EBV阴性组比较,##P<0.01。

分组 例数 VEGF(pg/mL)对照组 40 51.23±12.66实验组 54 143.86±19.49＊＊EBV阳性组 24 195.44±19.69##EBV阴性组 30 154.58±15.23

3 讨 论

恶性肿瘤生长、侵袭和转移依赖于肿瘤血管生成。肿瘤血管越丰富,恶性程度越高,预后越差。在众多的血管生成因子中,VEGF被认为是功能最强、特异性作用于内皮细胞的生长因子之一[4-6]。多种肿瘤组织高表达VEGF,而且肿瘤细胞亦能合成VEGF。导致鼻咽癌患者血清VEGF(sVEGF)水平升高的原因,可能由于肿瘤细胞分泌的VEGF随血液细胞穿过血管壁进入血液循环;或是VEGF使血管壁通透性增加而弥散至血液中;另有学者认为血小板的活化或破坏是引起sVEGF水平升高的主要原因[7]。

EBV是一种嗜人类淋巴细胞的γ-DNA疱疹病毒,与鼻咽癌发生、发展密切相关,通常呈隐性感染[8]。EBV主要是通过表达潜伏膜蛋白1(LMP1)起作用。LMP1是EBV在鼻咽癌上皮细胞中表达的唯一与细胞转化有关的癌蛋白,至少有70%的鼻咽癌患者可检测到LMP1的表达[9]。近年来的研究表明,LMP1可通过诱导COX-2的表达,使VEGF表达增高,促进肿瘤血管生成。COX-2抑制剂(NS-398)可以抑制VEGF的表达。LMP1还通过诱导 IL-8、EGFR、EGF-2、HIF-1等的表达,上调VEGF的表达,促进肿瘤血管生成[10-11]。

本项研究结果显示:鼻咽癌患者血清VEGF水平显著高于健康人血清VEGF水平(P<0.01),表明肿瘤细胞分泌的VEGF随血液细胞穿过血管壁进入血液循环;或是VEGF使血管壁通透性增加而弥散至血液中。另有学者认为血小板的活化或破坏是引起sVEGF水平升高。

本项研究结果还显示:EBV阳性的鼻咽癌患者血清VEGF水平明显高于EBV阴性的鼻咽癌患者(P<0.05),表明EBV有可能通过LMP1诱导COX-2的表达使VEGF表达增高,促进肿瘤血管生成;或是通过LMP1诱导 IL-8、EGFR、EGF-2、HIF-1等的表达,上调VEGF的表达,促进肿瘤血管生成。

综上所述,鼻咽癌患者血清VEGF水平变化有可能作为一种新的肿瘤标志物对鼻咽癌病情进展进行动态观察,为临床治疗提供客观指标。

[1]顾永贵,卢炳红,叶海滨.138例鼻咽癌放射治疗预后分析[J].实用临床医药杂志,2005,9(5):121.

[2]张 霞,刘 霞,荆永正,等.EB病毒相关胃癌及鼻咽癌组织病毒主要潜伏期基因启动子甲基化状态分析[J].青岛大学医学院学报,2010,46(5):399.

[3]何 常,张维元,薄 莉,等.鼻咽癌内血管内皮生长因子的表达及微血管密度的病理意义[J].贵阳医学院学报,2004,29(3):196.

[4]Yoshida S,Amano H,Hayashi I,et al.COX-2/VEGF-dependent facilitation of tumor-associated angiogenesis and tumor growth in vivo[J].Lab Invest,2003,83(10):1385.

[5]李圣青.肿瘤抗血管生成治疗研究新进展[J].实用临床医药杂志,2008,12(6):9.

[6]宋 倩,谢阳桂.HIF-1α、VEGF在子宫内膜癌中的表达及临床意义的研究进展[J].海南医学院学报,2009,15(3):296.

[7]Guang-Wu H,Sunagawa M,Jie-En L,et al.T he relationship between microvessel density,the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF),and the extension of nasopharyngeal carcinoma[J].Laryngoscope,2000,110:2066.

[8]M urono S,Inoue H,Tanabe T,et al.Induction of cyclooxygenase-2 by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 is involved in vascular endothelial growth factor production in nasopharyngeal carcinoma cells[J].Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(12):6905.

[9]Wakisaka N,Kondo S,Yoshizaki T,et al.Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 induces synthesis of hypoxia-inducible factor 1 alpha[J].Mol Cell Biol,2004,24(12):5223.

[10]You S,Zhang F,Meng F,et al.BV-encoded LMP1 increases nuclearβ-catenin accumulation and its transcriptional activity in nasopharyngeal carcinoma[J].Tumour Biol,2011,[Epub ahead of print].

[11]冯海洋,李德川,徐笑红.胃癌患者血清VEGF水平的临床研究[J].实用癌症杂志,2002,17(2):203.