肺癌患者血清血管内皮生长因子水平与预后及血小板的相关性研究

黄 谦,姜正华,朱慕云,桑慧颖,卞京文,李昌喜

(江苏省苏北人民医院呼吸内科,江苏扬州,225001)

肺癌是恶性肿瘤死亡的最常见原因,大多数 患者预后不良。实体瘤的发生发展关键依赖提供养分的功能血管,如果缺乏,肿瘤就无法实现生长和转移。肺癌和其他实体瘤一样,其生长和转移离不开新生血管生成。血管内皮生长因子是1989年由Ferrara等发现并命名的一种糖蛋白,为血管生成的主要调控因子,通过与内皮细胞表面上的特异性受体结合而发挥其生物学活性。近年来的许多研究证实,血管内皮生长因子(VEGF)与肺癌新生血管和淋巴管的生长以及生物学行为密切相关[1]。本研究旨在探讨肺癌患者血清VEGF水平与肺癌患者预后及血小板的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2005年5月～2006年4月在本院呼吸内科收治的诊断为原发性肺癌的患者(均经组织学或细胞学确诊,并排除严重心、肝、肾、血栓性疾病、糖尿病、风湿性关节炎、慢性阻塞性肺疾病、感染性疾病、贫血、长期服用激素及1月内仍手术史、创伤史)及健康体检者。肺癌组共60例,其中男46 例,女 14 例;年龄34～ 82岁,平均 65.3 岁 ;所有患者同时进行胸部CT、头颅CT、放射性骨扫描、腹部B超等检查,其中腺癌25例,鳞癌30例,小细胞癌5例;P-TNM分期(国际 UICC1997分期标准),Ⅰ+Ⅱ期13例,Ⅲ期32例,Ⅳ期15例。所有患者进行随访并记录其生存期。健康体检者共20例,其中男性15例,女性 5例,年龄22～80岁,平均年龄52.1岁。所有样本采血前2周内未应用任何止血或抗凝药物治疗。

1.2 血清标本的收集与保存

肺癌患者(化疗及手术前)及健康体检者均为清晨空腹采用非抗凝管抽取外周静脉血3 mL,室温放置30～60 min后,5 000 r/min离心15 min后,分离血清分装后-20℃低温冷冻备用。同时采全血进行常规血小板计数。

1.3 检测方法

人VEGFELISA试剂盒购于美国。检测方法按试剂盒说明书进行,用酶标仪测定结果,VEGF检测波长为450 nm。

2 结 果

2.1 肺癌患者和健康体检者血清VEGF水平的比较

肺癌组60例,血清VEGF水平为(296.95±75.84)pg/mL,明显高于对照组的(164.01±75.59)pg/mL统计学上有显著性差异(P<0.001)。

2.2 肺癌患者血清VEGF水平与病理、临床分期的关系(表1)

肺癌组中,不同病理类型及不同TNM分期的患者血清VEGF水平之间无明显差异。

表1 肺癌患者血清VEGF水平与病理、临床分期的关系

2.3 肺癌患者血清VEGF水平与患者生存期的相关性(图1)

肺癌组60例患者均获随访,随访率100%。生存期为确诊日至患者死亡或末次随访的时间(2008年2月1日)。通过随访肺癌患者生存期(253.68±165.57)d,(35～753)d,中位生存期为211d,与肺癌患者血清VEGF水平呈负相关(r=-0.38,P<0.01)。

图1 血清VEGF与生存期的相关性

2.4 肺癌组中血清VEGF水平与PLT的相关性(图2)

肺癌组中 VEGF水平为(296.95±61.01)pg/mL,PLT水平为(244.45±71.29)×109/L(与对照组PLT无统计学差异),经相关分析,两者存在正相关(r=0.26,P<0.05)。

3 讨 论

图2 血清VEGF与PLT的相关性

VEGF是由定位于6号染色体(6P21)编码的一种45 KDa球蛋白,VEGF除内皮细胞产生外,还可由其他几种细胞例如巨噬细胞、基底细胞、视网膜表皮细胞、恶性肿瘤细胞产生。现有研究表明:VEGF是作用最强、特异性最高的血管生成调控因子,它可与血管内皮细胞特异性地结合,能增强血管通透性,刺激血管内皮细胞的增殖,并促进血管内物质的渗出,抑制内皮细胞凋亡,激活蛋白酶致使细胞外基质降解,有利于新生血管生长及延伸,为内皮细胞的迁移和肿瘤细胞的转移提供形态学基础[2-4]。VEGF可通过以下机制调节肿瘤的血管形成和发展:①通过缺氧增加VEGF的转录,继而刺激肿瘤组织分泌生长因子;②激活生长因子受体;③增加MMPs的产生,从而使血管通透性增加;④促使内皮细胞增殖、迁移,并诱导血管生成;⑤形成新的毛细血管网[5-6]。

Mattern等在1996年首次报道VEGF在非小细胞肺癌中的表达,现有研究证实在非小细胞肺癌患者中有高水平的VEGF的表达[7-8],另外在小细胞肺癌患者中高水平的VEGF也有报道[9]。本研究结果显示,肺癌患者血清VEGF水平显著高于对照组,也证实了肺癌患者中VEGF呈高表达,说明肺癌细胞确实能分泌大量的VEGF,促进肿瘤血管的生成,为肿瘤细胞的生长、侵袭及转移提供条件,这与以上报道是一致的

本研究结果显示,肺癌组患者血清VEGF水平与患者的TNM分期之间无明显关系。相关研究[10-11]报道肺癌患者VEGF水平与肺癌 TNM分期密切相关,表明VEGF与肿瘤的浸润转移有关。而在其他的一些研究中表明二者之间无关系[12-13]。另外,我们的研究结果还显示肺癌患者血清VEGF水平与肺癌的病理类型无关,这说明肺癌的不同病理类型具有同样或相似的分泌VEGF的特性,这与国内外的报道是一致的[14-15]。

肺癌的病理及临床TNM分期与肺癌的预后密切相关,但是它们并不能完全准确地预测患者的预后,需要一些新的指标。在一些关于非小细胞肺癌研究中表明VEGF过高表达与肿瘤的进展和较短的生存期有关[16-18]。作者在研究中观察到肺癌患者血清VEGF水平与其生存期之间有显著的负相关,这些均说明血清VEGF水平能够反映肺癌的恶性程度,可作为手术前或化疗前判断患者预后的重要指标。

肺癌患者血清VEGF含量增加的机制尚不清楚,相关研究表明和外周血白细胞数、中性白细胞数、单核细胞数及血小板数密切相关[19-20]。有研究[21-22]表明VEGF也可以从外周血细胞中被释放出,尤其是血小板。国外的一些研究[23-24]也显示肿瘤患者血清VEGF水平与血小板及淋巴细胞计数相关,提示血小板是VEGF的重要储存和运输者。Choi等[25]研究表明非小细胞肺癌患者淋巴细胞和血小板中包含高水平的VEGF,所以在肺癌患者中血清高水平的VEGF与外周血细胞释放有关。在作者的研究中,肺癌患者血清VEGF水平与血小板之间有显著的正相关,这与孔德勇等[26]研究是一致的,表明在肿瘤血管形成过程中,VEGF与血小板之间可能存在相互作用,在肺癌患者中血小板可能是VEGF的一个重要运输者,血小板可能在肿瘤血管的形成过程中通过释放血管生成因子(例如VEGF)扮演一个重要的角色。我们认为肺癌患者血清VEGF增高机制可能为①肺癌组织中VEGF水平增高,癌细胞分泌的VEGF被单核细胞和血小板储存,并随穿过血管壁的细胞进入血循环释放有关;②VEGF可导致血管通透性增加,从而加快VEGF的扩散,导致外周血中VEGF含量增加;③肿瘤细胞本身可分泌相关因子,通过血小板聚集,促进血小板分泌VEGF[27-28]。以上给我们带来思考,临床上适当的抗血小板治疗是否能抑制肺癌患者血清VEGF的水平,从而控制肺癌血管的生成,改善患者的预后?临床上某些抗肿瘤药物(如吉西他滨)是否具有间接的抑制肺癌血管生成,控制肺癌转移的作用?这些问题有待于进一步的研究。

综上所述,肺癌患者血清VEGF异常增高,且与肺癌患者的生存期成负相关,血清VEGF可作为评估肺癌患者预后的一个重要指标。另外,肺癌患者血清VEGF水平与PLT水平呈正相关,提示血小板在肿瘤血管形成的过程中起重要的作用。

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