RP-HPLC法测定银屑颗粒中落新妇苷

李启艳， 朱日然， 徐丽华

(1.山东省药品检验所，山东 济南 250010;2.山东中医药大学附属医院，山东济南 250012)

银屑颗粒由土茯苓、菝葜两味药组成，具有祛风解毒的功效，临床用于治疗银屑病。研究表明，土茯苓和菝葜均含有落新妇苷，为了确保药品的安全有效，我们采用高效液相色谱法对落新妇苷进行定量测定［1-4］。

1 仪器与试药

岛津UV-2550紫外分光光度计，Mettler AE240电子天平，Agilent1200高效液相色谱仪。落新妇苷对照品，烟台大学提供，供定量测定用。银屑颗粒，山东鲁泰环中制药有限公司生产(批号:100401、100402、100403);甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件［5-6］色谱柱 Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相 甲醇-0.1%磷酸(25 ∶75)，体积流量1 mL/min;柱温35℃;检测波长291 nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3 000。采用此色谱条件，供试品及对照品色谱分离度良好，见图1、2。

图1 落新妇苷对照品HPLC色谱图

2.2 方法与结果

2.2.1 线性关系的考察 精密称取落新妇苷对照品9.47 mg，加60%甲醇溶解并稀释至100 mL，摇匀，作为对照品溶液(落新妇苷质量浓度为0.094 7 mg/mL)。

图2 供试品HPLC色谱图

分别精密吸取上述对照品溶液各 2、4、8、12、16、20 μL，注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值。以落新妇苷对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=2 276.444 0X+21.119 5，相关系数r=1.000 0。表明落新妇苷进样量在 0.189 4 ～1.894 0 μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.2 精密度实验 精密吸取上述对照液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，按上述测定方法进行测定，结果落新妇苷峰面积积分值的RSD为0.43%，表明仪器精密度良好。

2.2.3 稳定性试验 取装量差异项下的本品内容物(山东鲁泰环中制药有限公司生产，批号:100401)，研细，取约1.0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

精密吸取上述供试品溶液10 μL，每隔2 h进样一次，测定落新妇苷的峰面积积分值，共考察8 h，以观察样品溶液在检测过程中待测成分的稳定性，结果RSD为0.08%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好，能够满足测定需要。

2.2.4 重复性试验 取装量差异项下的本品内容物(山东鲁泰环中制药有限公司生产，批号:100401)，研细，取约1.0 g，共取5份，按样品测定项下的供试品溶液的制备方法，分别制得供试品溶液。按上述测定方法进行测定，计算落新妇苷的量，结果平均含落新妇苷为14.2 mg/袋，RSD为1.11%，表明本品测定方法的重复性良好。

2.2.5 回收率试验 对照品贮备液的制备 精密称取落新妇苷对照品13.45 mg，置100 mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(落新妇苷质量浓度为0.134 5 mg/mL)。

取已测定的装量差异项下本品内容物(山东鲁泰环中制药有限公司生产，批号:100401，平均装量:5.958 6 g，含落新妇苷为14.2 mg/袋)，研细，取约 0.5 g，精密称定，共取 5份，置圆底烧瓶中，精密加入落新妇苷对照品贮备液(落新妇苷对照品质量浓度为0.134 5 mg/mL)10 mL，再精密加入60%甲醇15 mL，按样品测定项下的供试品溶液的制备方法，制得供试品溶液。照上述测定方法进行测定，计算回收率，结果见表1。结果表明，本方法的回收率良好。

3 样品的测定

取装量差异项下的本品内容物，研细，取约1.0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。进样10 μL。3批样品测定结果见表2。

表1 落新妇苷加样回收率试验结果

表2 样品测定结果

根据上述测定结果，暂定本品每袋含土茯苓、菝葜以落新妇苷(C21H22O11)计，不得少于11.4 mg。

4 讨论［7-10］

4.1 取落新妇苷对照品溶液，在200～400 nm之间进行扫描，结果落新妇苷在201 nm、291 nm处有吸收峰，其中291 nm处吸收最大，故选用291 nm作为检测波长。

4.2 考察了超声提取和回流提取两种方法，并考查了提取时间对含量的影响，结果加热回流提取效果优于超声提取。且回流提取1 h和1.5 h含量结果一致，表明回流提取1 h落新妇苷已基本提取完全，因此确定提取方法为:样品加热回流提取1 h。

4.3 考察了60%甲醇、50%乙醇、甲醇3种溶剂，结果甲醇回流提取量最低，为7.2 mg/袋;60%甲醇与50%乙醇提取量接近，分别为14.1 mg/袋和13.8 mg/袋。但50%乙醇与流动相组成相差较大，色谱峰峰形较差，故确定60%甲醇为提取溶剂。

4.4 原计划对样品中薯蓣皂苷元进行定量测定，但是通过试验和查阅相关资料发现，根据2005年版《中国药典》收载的方法对菝葜药材中薯蓣皂苷元进行定量测定，很难检出薯蓣皂苷元，即使检出也很难达到现行《中国药典》规定的要求(不低于0.04%)，而所检药材均为正品。因此未建立薯蓣皂苷元的定量测定方法。

［1］陈 幸，李 彬，黎万寿，等.HPLC法测定土茯苓中落新妇苷的含量［J］.药物分析杂志，2004，20(4):40-43.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部［S］.北京:化学工业出版社，2005:203.

［3］张白嘉，刘亚欧，刘 榴，等.土茯苓及落新妇苷抗炎镇痛利尿作用研究［J］.中药药理与临床，2004，20(1):11-13.

［4］张广财，张 朔，李可强，等.高效液相色谱波长切换法同时测定肿节风中多指标成分的含量［J］.中国医院药学杂志，2008，28(23):110-112.

［5］周艳林，钟小清，吕高荣，等.RP-HPLC同时测定菝葜中落新妇苷和黄杞苷的含量［J］.中国药学杂志，2008，43(14):123-126.

［6］曾祥腾，何 燕，徐孟文，等.大孔吸附树脂富集纯化土茯苓总黄酮的研究［J］.今日药学，2008，18(3):55-57.

［7］李 彬，陈 幸，黎万寿.土茯苓及其混淆品种的色谱法鉴别［J］.中药材，2004，27(2):128-131.

［8］周 军，曲 佳，寿国香，等.HPLC法测定土茯苓中落新妇苷及黄杞苷［J］.中国药品标准，2009，10(5):85-88.

［9］姚 毅，周 翔，陈 婷.高效液相色谱法测定罗汉茶中落新妇苷的含量［J］.中国现代应用药学杂志，2006，23(9):920-921.

［10］袁久志，窦德强，陈英杰，等.土茯苓酚苷类成分研究［J］.中草药，2004，35(9):967-968.