紫檀芪对应激负荷具有高脂血症模型小鼠血脂及免疫功能的影响

胡向阳， 舒晓春*， 马 义

(1.中山大学附属第五医院，广东珠海 519000;2.暨南大学生命科学院，广东广州 510632)

紫檀芪对应激负荷具有高脂血症模型小鼠血脂及免疫功能的影响

胡向阳1， 舒晓春1*， 马 义2

(1.中山大学附属第五医院，广东珠海 519000;2.暨南大学生命科学院，广东广州 510632)

目的 观察紫檀芪对应激负荷具有高脂血症模型小鼠血脂及免疫功能的影响。方法 建立应激负荷+高脂血症小鼠模型，将28只雄性昆明小鼠随机分为4组:正常对照组、模型对照组、非诺贝特组、紫檀芪组，检测各组小鼠血脂水平及脾脏T淋巴细胞亚群的变化。结果 与模型对照组比较，紫檀芪组小鼠血清TC、TG、LDL-C量降低;脾脏CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高。与非诺贝特组比较，紫檀芪组小鼠血清TG、LDL-C量降低，脾脏CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高。结论 紫檀芪对应激负荷+高脂血症模型小鼠血脂及免疫功能具有一定的干预作用。

紫檀芪;应激;高脂血症;T淋巴细胞亚群

应激负荷时机体产生系列的防御反应，涉及到神经、内分泌及免疫等生理功能，研究发现，持续的应激负荷会使小鼠肠系膜脂肪酶活性降低，导致机体血脂代谢紊乱［1］。紫檀芪(Pterostilbene)是白藜芦醇衍生物，在蓝莓、黑莓等浆果中含量丰富，具有预防氧化应激反应、抗真菌、抗细胞增殖等作用［2-3］。非诺贝特是氯贝丁酸衍生物类血脂调节药，通过抑制极低密度脂蛋白和三酰甘油的生成并同时使其分解代谢增多，降低血低密度脂蛋白、胆固醇和三酰甘油，还具有抗氧化和抗应激作用。本实验选用非诺贝特作为对照药物，对紫檀芪在应激负荷具有高脂血模型小鼠血脂及免疫功能影响进行初步的研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康昆明小鼠，雄性，体质量(20±3)g，由南方医科大学实验动物中心提供，合格证号:粤检证字2009B570，室温，适应性饲养1周后用于本实验。

1.2 试剂与仪器 紫檀芪，日本富士株式会社，98%，HPLC，批号:147536- 200932;非诺贝特胶囊(商品名:力平之，法国利博福尼制药公司，规格:200 mg，编号:B1420103061，);非诺贝特胶囊、紫檀芪临用前以生理盐水溶解，质量浓度为1 mg/mL。胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(南京建成生物试剂公司);抗小鼠CD3、CD4、CD8等单克隆抗体试剂盒(浙江东瓯生物工程有限公司)。全自动生化分析仪(日本日立-7060型);FACSCalibur流式细胞仪(BD-TY1218)。

1.3 动物分组 健康雄性昆明小鼠28只，数字随机分组法分为4组，即正常对照组、模型对照组、非诺贝特组、紫檀芪组。

1.4 动物模型制备 除正常对照组外，参照Bozoky［4］等方法建立小鼠高脂血模型，小鼠腹腔注射10%泰洛沙泊溶液3 mL/kg，禁食12 h后进行试验。非诺贝特组、紫檀芪组均以10 mg/kg剂量灌胃，正常对照组、模型对照组则以等体积生理盐水灌胃。参照文献方法［5］，除正常对照组外，其余各组小鼠在给药后2 h，放进小鼠束缚装置，束缚应激负荷12 h，束缚应激期间小鼠禁食禁水，连续4周。动物处死前禁食12 h，腹腔静脉取血，分离血清，取出脾脏。

1.5 血脂检测 将新鲜血液制成血清后，使用全自动生化分析仪，检测 TC、TG、LDL-C、HDL-C 的水平。

1.6 脾脏T淋巴细胞亚群的检测 将脾脏置于玻璃匀浆器中，添加PBS溶液研磨，4℃ 1 000 r/min离心10 min，弃上清液，加入红细胞裂解液，混匀，静置5 min后加PBS溶液终止裂解反应，离心5 min，弃上清液，PBS溶液调整脾脏淋巴细胞数为5×106个/mL，取流式细胞分析专用管，每管加入细胞悬液100 μL。每个样本制备3管，分别加入CD3、CD4、CD8抗体，室温避光孵育30 min后，各管加入500 μL PBS溶液，振荡混匀后上流式细胞仪分析。

1.7 统计学处理 使用SPSS14.0统计软件对数据进行重复测量资料的方差分析，定量指标以(±s)表示，方差分析，组间两两比较采用q检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠血脂情况的变化 与正常对照组比较，各组小鼠血清TC、TG、LDL-C量均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05);模型对照组HDL-C量降低(P＜0.05)。与模型对照组比较，非诺贝特组、紫檀芪组小鼠血清 TC、TG、LDL-C量均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05)，两组HDL-C量均升高(P＜0.05)。与非诺贝特组比较，紫檀芪组小鼠血清 TG、LDL-C量降低(P＜0.05)，TC、HDL-C量无显著差异(P＞0.05)。见表1。

表1 各组小鼠血脂情况比较(n=7，±s)

注:与正常对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;与模型对照组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;与非诺贝特组比较，▲P ＜0.05。

组别 TG/(mmol/L) TC/(mmol/L) HDL-C/(mmol/L) LDL-C/(mmol/L)正常对照组0.62 ±0.13 1.54 ±0.17 1.28 ±0.30 0.49 ±0.12模型对照组 3.46±1.07＊＊ 5.18±0.43＊＊ 0.83±0.11* 2.75±0.33＊＊非诺贝特组 1.69±0.30＊△△ 2.48±0.17＊△△ 1.03±0.24△ 0.76±0.23＊△△紫檀芪组 1.12 ±0.28＊△△▲ 2.25±0.14＊△△ 1.27±0.16△ 1.05±0.22＊＊△△▲

2.2 各组小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化 与正常对照组比较，模型对照组小鼠脾脏 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均显著降低(P＜0.01);非诺贝特组 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05);紫檀芪组 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05);紫檀芪组CD3+变化没有差异(P＞0.05)。与模型对照组比较，非诺贝特组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+无显著差异(P＞0.05);紫檀芪组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有显著升高(P＜0.01)。与非诺贝特组比较，紫檀芪组 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05)。见表2。

表2 各组小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化比较(n=7，±s)

表2 各组小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化比较(n=7，±s)

注:与正常对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;与模型对照组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;与非诺贝特组比较，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01。

组别 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+/%正常对照组31.46 ±2.15 17.21 ±3.28 9.27 ±1.39 1.64 ±0.11模型对照组 20.53±3.06＊＊ 9.37±1.14＊＊ 5.22±1.51＊＊ 0.73±0.12＊＊非诺贝特组 22.37±1.26* 8.15±1.33＊＊ 6.32±0.43* 0.80±0.05＊＊紫檀芪组 36.14±3.11△△▲ 27.18±2.12＊＊△△▲▲ 13.61±1.52＊△△▲▲ 2.37±0.11＊△△▲▲

3 讨论

应激是机体对内外环境刺激的反应，应激对机体的影响研究越来越受到重视。血脂代谢包括外源性代谢途径和内源性代谢途径，脂肪细胞本身就是一个内分泌器官，能分泌脂肪细胞因子、激素或其他调节物［6］。李广群等［7］研究发现，应激负荷通过下丘脑-垂体-肾上腺轴和植物神经系统的交感神经，对血脂代谢进行神经内分泌调节，进而影响动脉粥样硬化的发生、发展。应激可引起机体一系列非特异性神经-内分泌反应，长期的应激负荷能破坏免疫器官的正常结构，在脾脏和胸腺中可见典型凋亡细胞［8］。T淋巴细胞是机体免疫细胞，T淋巴细胞各亚群水平间的相对稳定是机体发挥正常免疫功能的重要基础，CD3+T细胞反映总T淋巴细胞水平，CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+T/CD8+T比值在一定程度上表示辅助性T细胞和抑制性T细胞及其比值，CD4+T/CD8+T比值减少是机体免疫缺陷的重要指征［9］。

本实验在应激负荷+高脂血症小鼠模型基础上，选用非诺贝特胶囊作为对照药物，研究紫檀芪对束缚应激条件下高脂血模型小鼠血脂及免疫功能的作用。实验结果发现:与模型对照组比较，紫檀芪组小鼠血清TC、TG、LDL-C含量均有不同程度的降低;脾脏 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有显著升高。与非诺贝特组比较，紫檀芪组小鼠血清高血脂水平降低，脾脏T淋巴细胞免疫指标有不同程度的升高。本实验结果提示在应激负荷及高血脂条件下，血脂代谢与脾脏T淋巴细胞免疫之间可能存在着一定的相互影响或作用，但其应激负荷-血脂代谢之间的调控或作用机制尚不明确，紫檀芪对其调控或作用机制的作用途径也需要进一步研究。

［1］Kurihara H，Yao XS，Nagai H.Anti-stress effect of BRAND’s essence of chicken(BEC)on plasma glucose levels in mice loaded with restraint stress［J］.J Health Sci，2006，52(3):252-258.

［2］王晓琴，王振华，刘 梅，等.氧化还原调控在紫檀芪诱导HeLa细胞内质网凋亡途径中的作用［J］.中国药理学通报，2010，26(9):1184-1186.

［3］Virgili F，Marino M.Regulation of celluar signals from nutritional molecules:a specific role for phytochemicals，beyond antioxidant activity［J］.Free Radic Biol Med，2008，45(9):1205-1216.

［4］Bozoky Z，Balogh L，Mathe D，etal.Evaluation of rat and rabbit sera lipoproteins in experimentally induced hyperlipidemia by analytical ultracentrifugation［J］.Eur Biophys J，2006，3(35):205-213.

［5］何蓉蓉，栗原博，宝 丽，等.王老吉凉茶对氧化应激负荷小鼠脂代谢的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2008，14(10):31-33.

［6］陆再英，钟南山.内科学［M］.7版，北京:人民卫生出版社，2010:808.

［7］李广群.行为个性及情感因素对冠心病患者血脂代谢的影响［J］.中国冶金工业医学杂志，2006，22(5):533.

［8］赵福东.应激时内分泌变化对免疫功能影响的研究进展［J］.国外医学:内分泌学分册，2005，25(4):241-242.

［9］白云峰，袁 芳，连玉龙，等.慢性应激大鼠T淋巴细胞免疫功能的改变［J］.新疆医科大学学报，2010，33(4):369-371.

R285.5

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1001-1528(2011)08-1400-03

2011-02-28

广东省中医药管理局科研基金(A2010104)

胡向阳(1975—)，博士，主治医师，主要从事脑血管及神经系统疾病研究。Tel:(0756)2528851，E-mail:aikongzhi@163.com

*通信作者:舒晓春(1965—)，副主任医师，主要从事内分泌及代谢疾病研究。Tel:(0756)2528622，E-mail:zhshuxc@163.com