藏药铁屑炮制前后和复方制剂对动物贫血的作用研究

杨红霞， 杜玉枝， 魏立新* ， 李 岑

(1.中国科学院西北高原生物研究所藏药现代化研究中心，青海西宁 810008;2.青海省藏药药理学与安全性评价研究重点实验室，青海西宁 810008;3.中国科学院研究生院，北京 100039)

藏药铁屑炮制前后和复方制剂对动物贫血的作用研究

杨红霞1，2，3， 杜玉枝1，2， 魏立新1，2*， 李 岑1，2，3

(1.中国科学院西北高原生物研究所藏药现代化研究中心，青海西宁 810008;2.青海省藏药药理学与安全性评价研究重点实验室，青海西宁 810008;3.中国科学院研究生院，北京 100039)

目的 观察铁屑生品、炮制品和复方制剂七味铁屑丸对环磷酰胺致小鼠贫血模型的治疗作用。方法 采用环磷酰胺100 mg/kg的剂量，以0.2 mL/10 g腹腔注射5 d建立贫血小鼠模型，分别以生品、炮制品和七味铁屑丸不同浓度灌胃给药，观察小鼠的恢复情况，并检测各项血液指标。结果 与模型组小鼠比较，生品组小鼠体质量持续下降，并有死亡现象;炮制品和七味铁屑丸组，小鼠体重呈上升趋势，血液生化指标有一定恢复趋势，七味铁屑丸组比炮制品组恢复情况好;与模型组比较，炮制品剂量为0.11 g/kg和0.15 g/kg时，血小板的检测结果有显著差异(P＜0.05)，七味铁屑丸的剂量为0.50 g/kg和0.70 g/kg时，红细胞和血小板有极显著差异(P＜0.01)。结论 与生铁屑相比，铁屑炮制品能明显增强机体对铁的吸收，从而促进贫血模型的恢复;而七味铁屑丸的作用比铁屑炮制品单独使用时的作用明显。

铁屑炮制品;贫血模型;红细胞;白细胞;血红蛋白;血小板;小鼠

藏药铁屑炮制是根据古籍所记载的铁屑炮制工艺［1-4］或是优化筛选后的工艺［5］，采用诃子作为辅料进行炮制而得的Fe2+量较高的炮制品，主要用于复方制剂如七十味珍珠丸、七味铁屑丸等。在藏药中治疗血液系统疾病“血虚风盛症”七味铁屑丸［6］的主要成分铁屑，就是经过诃子炮制后入药的。

环磷酰胺所致贫血模型和临床化疗病人出现贫血症状一致，也有白细胞减少、免疫功能低下等表现［7］。本试验通过研究根据优化工艺［5］而制得的藏药铁屑炮制品治疗环磷酰胺所致小鼠贫血模型前后各项血液学指标，探讨藏药铁屑生品、炮制品和制铁屑的复方制剂七味铁屑丸对环磷酰胺所致贫血小鼠的治疗作用。

1 材料

1.1 实验药物 3 mL的肝素钠抗凝管(江苏康健医疗用品有限公司);羧甲基纤维素钠(AR，天津恒兴化学试剂制造有限公司);环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号:H32020857);铁屑炮制品(根据《中华本草·藏药卷》中记载的诃子制铁屑工艺炮制所得);FeSO4(AR，天津市恒兴化学试剂制造有限公司);七味铁屑丸(国药准字Z54020026，西藏自治区藏药厂生产，批号:07343A)。

1.2 实验仪器 血液细胞分析仪(BC—2300，MINDRAY HEMATOLOGY ANALYZER，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)。

1.3 实验动物 SPF级KM小鼠，18～22 g，雌雄各半;购自甘肃中医学院实验动物中心，动物合格证号:SCXK(甘)2004-0006。实验动物均于(23±2)℃的恒温环境中饲养，喂食标准实验动物饲料(购自北京科奥协力饲料有限公司)和自来水。

2 方法

2.1 药物的配制 模型刺激用药环磷酰胺:用生理盐水配制浓度为10.00 mg/mL;铁屑炮制品、生品和复方制剂全部用0.50% 的羧甲级纤维素钠溶解为实验中设定的不同浓度。

2.2 动物贫血模型的建立 KM小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半，随机分组，每组12只，分空白对照组和模型组，空白组腹腔注射生理盐水0.10 mL/10 g，模型组腹腔注射等体积的环磷酰胺，给药量为100 mg/kg，连续注射5 d，禁食不禁水过夜后取部分空白和模型组动物，尾尖取血检测指标，判断贫血模型的建立［8-10］。

2.3 贫血症状的实验研究

2.3.1 铁屑生品和炮制品不同给药剂量的实验用0.50%的羧甲基纤维素钠溶液配制给药溶液，生铁屑给药组的质量浓度分别为0.30、0.55 mg/mL，相当于七味铁屑丸临床用量中铁屑量的7.50、12.50倍;铁屑炮制品给药组的质量浓度分别是0.10、0.30、0.55、0.75 mg/mL，相当于七味铁屑丸临床用量中铁屑量的 2.50、7.50、12.50 和 17.50倍;阳性对照FeSO4组的给药浓度为0.75 mg/mL，相当于七味铁屑丸临床用量中铁屑量的17.50倍;空白组和模型组给0.50%的羧甲基纤维素钠溶液;以上各组均以0.20 mL/10 g的剂量每天灌胃一次，连续给药8 d，禁食不禁水，第二天尾尖取血检测指标并解剖观察腹腔。

周恩来总理在中国前途迷茫之时就有为中华之崛起而读书的伟大目标，在其奋斗中苦难重重，艰难险阻更是数不胜数，可是周总理却能为了目标迎难而上，披荆斩棘；海伦·凯勒的故事更是感人，一个正常人要想在文学领域中取得成就也是难上加难，更别说是一个聋哑人了，可偏偏就这么一个聋哑人凭借着自己顽强的毅力，写下了传世之作《假如给我三天光明》的书籍，令后人不断挑灯捧读。这激励着学生要敢于扼住命运的咽喉，与生活的艰难做斗争。阅读了这些书籍，学生会自觉健全自身的品格和人格，在语文学习中不仅兴趣浓厚而且会严于律己，自觉学好语文这门课程。

2.3.2 炮制品和七味铁屑丸的实验 用0.50%的羧甲基纤维素钠溶液配制给药溶液，铁屑炮制品给药组的质量浓度分别是 0.55、0.75 mg/mL，相当于七味铁屑丸临床用量中铁屑量12.50和17.50倍;阳性对照FeSO4组的给药质量浓度为0.75 mg/mL，相当于七味铁屑丸临床用量中铁屑量的17.50倍;为保证所给药物中铁屑量相等，七味铁屑丸给药组分别采用藏药临床用量的12.50倍和17.50倍，质量浓度分别为2.50和3.50 mg/mL。空白组和模型组给予0.50%的羧甲基纤维素钠溶液，每天灌胃一次，连续给药8 d，禁食不禁水过夜后尾尖取血检测指标并解剖观察腹腔。

2.4 统计处理 所得数据均经SPSS11.5统计软件方差分析及t检验处理，以均数±标准差(±s)表示。

3 结果

3.1 贫血模型建立的血液检测结果 环磷酰胺对小鼠血液中生化指标的影响见表1，模型组与空白组的小鼠血液生化指标比较，均有极显著性差异(P＜0.01)。环磷酰胺刺激小鼠致贫血的模型成立。

表1 贫血模型建立的检测数据 (±s，n≥10)Tab.1 Test data for anemia model(±s，n ≥ 10)

表1 贫血模型建立的检测数据 (±s，n≥10)Tab.1 Test data for anemia model(±s，n ≥ 10)

模型组和空白对照组相比较，*P ＜ 0.05，＊＊P ＜ 0.01。

组 别 白细胞/(×109/L) 红细胞/(×1012/L) 血红蛋白/(g/L) 血小板/(×109/L)空白组 9.84 ±1.24 10.00 ±0.69 154.90 ±5.97 363.25 ±169.47模型组 1.42 ±0.96＊＊ 8.08 ±0.48＊＊ 128.70 ±5.33＊＊ 179.43±19.24＊＊

在模型建立期间，建模的实验动物没有出现死 亡，动物活动量减少，毛色暗淡，嘴唇部位和爪子都发白。同时，环磷酰胺使小鼠的体质量显著降低，结 果见表2。

表2 模型建立过程中小鼠体质量变化比较 (±s，n≥10)Tab.2 Comparison of weight changes of mice during modeling(±s，n ≥ 10)

表2 模型建立过程中小鼠体质量变化比较 (±s，n≥10)Tab.2 Comparison of weight changes of mice during modeling(±s，n ≥ 10)

模型组和空白对照组相比较，*P ＜ 0.05，＊＊P ＜ 0.01。

组 别 给药量/(g/kg) 给药前体质量A/g 给药后体质量B/g 差值B-A/g空白组－4.46 0.10 20.68 ±0.65 25.27 ±1.19 4.59模型组 等体积生理盐水 21.36±0.69 17.82±1.75*

3.2 铁屑生品和炮制品不同给药剂量的实验结果

见表3、4。表3的数据显示，模型组与空白组比较，红细胞和血红蛋白有显著性差异(P＜0.01)，白细胞和血小板差异明显(P＜0.05)，小鼠贫血模型的自身恢复情况不明显;铁屑生品给药组的小鼠的恢复情况不明显，实验过程中出现极个别的死亡现象。

炮制品给药组的小鼠血液中红细胞、血红蛋白、血小板的检测值随剂量的增加逐渐升高;制品17.50倍组小鼠的四项指标和模型组之间均有显著性差异(P＜0.05);给药组之间，制品2.50倍组和制品12.50倍组、17.50倍组的小鼠血小板检测值之间有显著差异(P＜0.05);FeSO4给药组小鼠的血红蛋白和血小板的恢复较好，和模型组之间均有显著性差异(P＜ 0.05)。

腹腔观察发现，生铁屑给药组的小鼠肠道不同部位出现铁屑积聚现象，排泄出现障碍。铁屑制品组的小鼠肠道也微有药物的积聚现象，没有影响小鼠的正常排泄。

表3 铁屑生品和炮制品不同给药组的检测结果 (±s，n≥10)Tab.3 Test results of iron powder and processed products treatment groups(±s，n ≥ 10)

表3 铁屑生品和炮制品不同给药组的检测结果 (±s，n≥10)Tab.3 Test results of iron powder and processed products treatment groups(±s，n ≥ 10)

模型和空白对照组相比较，*P ＜ 0.05，＊＊P ＜ 0. 01;给药组和模型组相比较，△P ＜ 0.05，△△P ＜ 0. 01;制品2.50倍组和制品17.50倍组相比较，▽P ＜ 0.05，▽▽P ＜ 0.01。

组 别 白细胞/(×109/L) 红细胞/(×1012/L) 血红蛋白/(g/L) 血小板/(×109/L)空白组 9.60 ±0.42 9.65 ±0.73 164.50 ±9.80 328.00 ±31.37模型组 6.28±2.43* 6.08±0.84＊＊ 96.29±16.13＊＊ 219.50±66.74*生品7.50 倍组 6.11 ±1.35 5.98 ±1.06 97.01 ±15.31 233.67 ±50.47生品12.50 倍组 5.78 ±1.65 5.88 ±2.00 101.24 ±17.42 247.67 ±42.17制品2.50 倍组 6.97 ±2.09 6.03 ±1.45 100.33 ±22.21 207.75 ±113.90制品7.50倍组 6.33±0.11 6.39±1.45△ 109.20±19.41△ 225.75±45.55制品12.50倍组 6.15±3.25 6.70±0.83△ 105.00±18.45△ 258.40±78.05△▽制品17.50倍组 7.07±1.01△ 6.32±0.53△ 106.33±5.63△ 291.33±101.85△▽▽FeSO417.50 倍组 5.99 ±1.40 5.81 ±1.02 127.38 ±7.90△ 249.05 ±55.41△

表4 铁屑生品和炮制品不同给药组小鼠体质量变化比较 (±s，n≥10)Tab.4 Comparison of weight changes of iron powder and processed products treatment groups mice(±s，n ≥ 10)

表4 铁屑生品和炮制品不同给药组小鼠体质量变化比较 (±s，n≥10)Tab.4 Comparison of weight changes of iron powder and processed products treatment groups mice(±s，n ≥ 10)

给药组和模型组相比较，*P ＜ 0.05，＊＊P ＜ 0.01。

组 别 给药量/(g/kg) 给药前体质量A/g 给药后体质量B/g 差值B-A/g空白组 等体积CMC 25.27 ±2.19 32.98 ±1.87 7.71模型组 等体积 CMC 17.82 ±2.75 20.70 ±1.83 2.88生品7.50倍组 0.06 17.09±1.99 16.65±0.65* －0.44生品12.50倍组 0.11 17.52±1.50 15.91±1.14* －1.61制品 2.50 倍组 0.02 17.28 ±1.76 19.45 ±1.25 2.17制品 7.50 倍组 0.06 17.56 ±2.02 20.73 ±0.94 3.17制品 12.50 倍组 0.11 17.98 ±2.51 22.65 ±0.79 4.65制品 17.50 倍组 0.15 17.01 ±1.87 22.01 ±0.92 5.00 FeSO417.50 倍组0.15 17.54 ±0.79 21.94 ±1.01 4.40

3.3 炮制品和七味铁屑丸的实验结果 见表5、6。

表5的数据显示，模型组与空白组4个指标均有显著性差异(P＜0.01)，5个给药组的指标检测值均低于空白对照组，高于模型组，炮制品2组与复方1组的红细胞、白细胞和血小板的检测值之间有显著性差异(P＜0.05);模型组和复方2组血小板检测值之间有极显著性差异(P＜0.01)，和复方1组的白细胞、血红蛋白检测值之间有显著差异(P＜0.05)，红细胞检测值之间有极显著差异(P＜0.01)。FeSO4组和模型组的各项血液指标检测值没有显著差异性。

表5 铁屑制品和复方制剂不同给药组的检测结果 (±s，n≥10)Tab.5 Test results of processed products and Qiwei Tiexie Pill treatment groups(±s，n ≥ 10)

表5 铁屑制品和复方制剂不同给药组的检测结果 (±s，n≥10)Tab.5 Test results of processed products and Qiwei Tiexie Pill treatment groups(±s，n ≥ 10)

模型组和空白对照组相比较，*P＜0.05，＊＊P ＜0. 01;给药组和模型组相比较，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;制品17.50倍组和复方12.50倍组相比较，▽P ＜ 0.05，▽▽P ＜ 0.01。

组 别 白细胞/(×109/L) 红细胞/(×1012/L) 血红蛋白/(g/L) 血小板/(×109/L)空白组 9.10 ±0.94 11.13 ±0.52 177.00 ±10.60 316.50 ±54.30模型组 6.42±1.78＊＊ 5.63±0.50＊＊ 116.67 ±6.36＊＊ 229.25±301.99＊＊制品12.50倍组 4.82±1.00 6.37±0.81△ 122.30 ±15.86 251.71±109.10制品17.50 倍组 5.63 ±0.96 5.61 ±1.01 126.00 ±16.42 283.60 ±75.47△△FeSO417.50 倍组 6.07 ±1.27 5.34 ±0.82 120.40 ±16.53 266.75 ±95.90复方12.50倍组 4.51±1.01△▽ 6.72±0.55△△▽ 127.38 ±7.84△ 231.60±47.32▽复方17.50 倍组 4.76 ±1.41 6.12 ±1.32 119.13 ±19.31 306.75 ±71.89△△

表6 铁屑制品和复方制剂不同给药组的小鼠体质量变化 (±s，n≥10)Tab.6 Comparison of weight changes of processed products and Qiwei Tiexie Pill treatment groups mice(±s，n ≥ 10)

表6 铁屑制品和复方制剂不同给药组的小鼠体质量变化 (±s，n≥10)Tab.6 Comparison of weight changes of processed products and Qiwei Tiexie Pill treatment groups mice(±s，n ≥ 10)

给药组和模型组相比较，*P ＜ 0.05，＊＊P ＜ 0.01。

组 别 给药量/(g/kg) 给药前体质量A/g 给药后体质量B/g 差值B-A/g空白组 等体积CMC 25.27 ±2.19 32.98 ±1.87 7.71模型组 等体积 CMC 17.82 ±2.75 20.70 ±1.83 2.88制品 12.50 倍组 0.11 17.92 ±1.93 22.65 ±0.79 4.73制品 17.50 倍组 0.15 17.37 ±2.10 22.31 ±0.92 4.94 FeSO417.50 倍组 0.15 17.62 ±1.65 22.27 ±1.00 4.65复方 12.50 倍组 0.50 17.73 ±1.78 24.10 ±1.08* 6.37复方17.50 倍组 0.70 17.97 ±2.06 26.60 ±1.10＊＊8.63

小鼠的腹腔观察发现，生铁屑给药组的小鼠肠道内微有药物积聚，FeSO4组的小鼠肠道内有黄色液体充斥，而复方给药组的小鼠肠道内正常，没有药物积聚。

表6的体质量结果显示，给药各组小鼠的体质量均有恢复，复方给药组中，体质量与模型组有显著性差异。复方17.50倍组中小鼠体质量相对增加量最大。

4 讨论

在本实验中用生铁屑、铁屑炮制品、阳性药七味铁屑丸和FeSO4分别对贫血模型动物进行了实验。

4.1 通过生铁屑和铁屑炮制品给药实验结果可知，铁屑经过炮制后，可以明显的增强治疗贫血的作用。这可能和铁屑炮制品中Fe2+量较高［11-12］有关系。

4.2 铁屑制品给药组中，随着给药剂量的增加，血红蛋白和血小板的检测指标呈现逐渐增加的趋势，体质量相对增加值也呈现逐渐增加的趋势，而白细胞和红细胞检测值没有呈现出一定的规律性。

4.3 小鼠腹腔解剖观察发现:七味铁屑丸给药组的小鼠肠道正常，没有药物积聚现象，而铁屑炮制品给药组和铁屑生品给药组的小鼠肠道内都微有药物的积聚。七味铁屑丸给药组小鼠肠道正常，可能和复方制剂中的其他成分有关，如红花、藏木香、甘青青兰和五灵脂膏等的活血通经、健脾消食和行气疏肝等功效。铁屑炮制品在小鼠肠道内的聚集，可能和炮制铁屑所用辅料诃子的涩肠止泻作用有关。铁屑生品给药组的小鼠肠道内有药物的积聚，可能是因为铁屑颗粒不能很好消化的原因。

铁屑炮制品单独使用可以在一定程度上缓解小鼠机体的贫血症状，因为增加了机体中外源性的Fe2+量;但实验结果显示，单独使用铁屑炮制品，不仅铁屑的给药量不好控制，而且铁屑在炮制过程中，使用了具有收敛作用的诃子粉，使得药物在排泄过程中出现阻滞现象。而七味铁屑丸是复方制剂，在一定程度上缓解这种现象。铁屑炮制品与生品入药比较，虽然具有优势，但仍然应该配合其他药物，以复方入药，才能更好的为机体吸收。

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Effect of raw and processed iron powder and Qiwei Tiexie Pill on anemic mice

YANG Hong-xia1，2，3， DU Yu-zhi1，2， WEI Li-xin1，2*， LI Cen1，2，3

(1.Northwest Plateau Institute of Biology，Chinese Academy of Sciences，Xi’ning 810008，China;2.Qinghai Provincial Key Laboratory of Tibetan Medicine Pharmacology and Safety Evaluation，Xi’ning 810008，China;3.Graduate University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China)

AIMTo observe the treatment for anemic mice with iron powder，product processed withChebulae Fructusand Qiwei Tiexie Pill.METHODS0.2 mL/10 g of intraperitoneally injection of cyclophosphamidemice into mice in the dose of 100 mg/kg for five days established model for anemia，then treated respectively with iron powder，product processed withChebulae Fructusand Qiwei Tiexie Pill of different concentrations.To observe the recovery and test the blood parameters.RESULTSCompared with the control group，mice in iron powder group continued to decline in body weight with a small number of death.Mice in iron powder processed withChebulae Fructusand Qiwei Tiexie Pill group showed a slight recovery trend in body weight and blood biochemical parameters and the latter group had a more good recovery;The platelet count had significant difference(P＜0.05)in the processed iron powder in the doses of 0.11 g/kg and 0.15 g/kg，the red blood cells and platelets counts had significant difference(P＜0.01)in Qiwei Tiexie Pill group in the doses of 0.50 g/kg and 0.70 g/kg.CONCLUSIONThe processed iron powder can significantly enhance the absorption of iron in mice，thereby promote the recovery of anemia.Qiwei Tixie Pill has better curative effects than the processed iron powder does alone.

processed products of iron;anemia model;RBC;white blood cell;hemoglobin;blood platelet;mouse

R283.1

A

1001-1528(2011)08-1371-05

2010-12-23

“十一五”国家科技支撑计划“藏药诃子制铁屑和制乌头工艺研究”(2007BAI48B02)

杨红霞(1985—)，女，博士生，研究方向:药用植物化学。E-mail:yanghongxia412@163.com

*通信作者:魏立新(1967—)，男，博士，研究员，研究方向:藏药化学成分及药理作用。Tel:(0971)6143668，E-mail:lxwei@nwipb.cas.cn