延龄草脂肪酸类成分分析

吴 芳， 李 涛， 郭耀武

(陕西省食品药品检验所，陕西西安 710061)

延龄草脂肪酸类成分分析

吴 芳， 李 涛， 郭耀武

(陕西省食品药品检验所，陕西西安 710061)

目的 研究延龄草脂肪酸类成分及主要成分的测定。方法 采用GC-MS对延龄草脂肪酸类成分进行鉴定，主要成分甲酯化后，采用GC法定量测定。结果 延龄草脂肪酸类成分主要有3种;甲酯化后，主要成分亚油酸进样量在0.585 8～4.184 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均加样回收率为87.6%(RSD 为1.75%)。结论 方法均简便合理，可以用于延龄草药材脂肪酸类成分的鉴定和测定。

延龄草;脂肪酸;GC-MS

延龄草(Trillium tschonoskiiMaxim)为多年生草本植物，属于国家保护的稀有植物品种，我国分布于西藏、云南、四川、陕西、甘肃、湖北、安徽、浙江及福建部分地区。延龄草属植物为传统名贵中药，其性味甘平，有降压、镇痛、溶血等功效［1-4］。目前主要在民间使用，近年来因森林采伐过度，生境恶化，又因不合理的开发利用，延龄草分布范围日趋缩小，种群数量逐渐减少，故对其化学成分、药理药效进行深入研究，即可使其充分发挥药用价值，又能合理保护生态环境。

目前国内外对延龄草的化学成分的研究逐渐深入，从延龄草属植物中分离得到的次生代谢产物以皂苷为主，包括甾体皂苷、黄酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷等类型的化合物［5］。药理活性主要有抗炎作用、抗衰老作用、消除氧自由基DPPH作用和抑制环氧化酶COX-2作用等［6-13］。目前对延龄草脂肪酸类成分的研究尚未见报道，本实验通过GC-MS联用技术对其脂肪酸类成分进行定性的分析鉴定，并采用GC法对主要成分进行测定。

1 定性分析

1.1 材料

1.1.1 试剂与药材 延龄草药材采自陕西省安康市千家坪，由陕西省食品药品检验所郭耀武主任药师鉴定为延龄草Trillium tschonoskiiMaxim的根及根茎。所用溶剂均为分析纯。

1.1.2 仪器 GCMS-QP2010气质联用仪(日本岛津公司);电子分析天平(美国saturlous)。

1.2 方法

1.2.1 延龄草脂肪酸类成分提取 延龄草药材适量，粉碎，过四号筛。称取1.0 g，置索氏提取器中，加入适量乙醚，浸泡过夜，水浴回流4 h，乙醚液低温浓缩，定容至10 mL，作为供试品溶液。

1.2.2 GC-MS 分析

气相色谱条件 色谱柱为HP-5 MS毛细管色谱柱(柱长 30 m，内径0.25 mm，涂布厚度0.25 μm，Agilent Technologies);程序升温(初始温度80℃，保持1 min，以6℃/min升温至250℃，保持 15 min。);分流比 10 ∶ 1;载气(He)1.1 mL/min;进样口温度220℃。

质谱条件 离子源为EI源，温度230℃;电子轰击能量70 eV;质量分析器为四级杆，Scan模式，质量扫描范围为30～400 amu。

1.3 结果 总粒子流图见图1，脂肪酸类成分及相对质量分数见表1。

图1 延龄草脂肪酸类成分总粒子流图

表1 延龄草脂肪酸类成分及相对质量分数

2 亚油酸测定

2.1 仪器 Agilent 6890N气相色谱仪，FID检测器;Sartorius AG ME 235S电子分析天平。

2.2 亚油酸对照品 购自中国药品生物制品检定所，批号为111622- 200602;十七酸购自Alfa Aesar公司;乙醚、正己烷等试剂均为分析纯。

2.3 色谱条件 色谱柱 Rtx-Wax(30 m ×250 μm ×0.25 μm);检测器为FID;柱温:起始温度170℃，保持1 min，以5℃/min升至240℃，保持1 min;柱体积流量0.7 mL/min，分流比为5∶1。

2.4 线性关系考察 精密称取亚油酸对照品0.156 9 g，置于25 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。吸取上述溶液 5.0、2.5、2.0、1.3、1.0、0.7、0.3 mL，分别置圆底烧瓶中，加0.5%氢氧化钠溶液8 mL，加十七酸甲醇溶液(6.22 mg/mL)1.0 mL，于60℃水浴回流30 min，放冷，加15%三氟化硼乙醚甲醇溶液5 mL，于60℃水浴回流10 min，放冷，精密加入15 mL正己烷，充分振摇后，静置，取上层液。分别精密吸取2.0 μL，按上述色谱条件进行测定，以浓度质量(mg/mL)为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:Y=1.991 3X+0.297 5，r=0.999 9，结果表明，亚油酸甲酯进样量在0.585 8～4.184 μg范围内线性关系良好。

2.5 供试品溶液制备方法 延龄草药材适量，粉碎，过四号筛。称取1.0 g，置索氏提取器中，加入适量乙醚，浸泡过夜，水浴回流4 h，乙醚液低温挥干，加入甲醇2 mL，0.5%氢氧化钠溶液8 mL，十七酸甲醇溶液(6.22 mg/mL)1.0 mL，于60℃水浴回流30 min，放冷，加15%三氟化硼乙醚甲醇溶液5 mL，于60℃水浴回流10 min，放冷，精密加入15 mL正己烷，充分振摇后，静置，取上层液。

2.6 专属性试验 取相应的空白试剂同法制备阴性对照溶液。将对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液分别注入气相色谱仪，色谱图见图2。

2.7 精密度试验 对供试品溶液重复进样6次，分别进样2.0 μL，测定峰面积，结果亚油酸甲酯峰面积与十七酸甲酯峰面积之比的RSD为0.092%，结果表明，精密度良好。

图2 延龄草脂肪酸甲酯化后色谱图

2.8 重复性试验 按照供试品溶液处理方法，制备6份供试品溶液，测定峰面积，将峰面积之比代入标准曲线，计算得到6份样品的平均质量分数为32.95 mg/g，RSD为1.31%。

2.9 加样回收率试验 精密称取6份延龄草粉末0.5 g，精密加入亚油酸对照品溶液(质量浓度为6.276 mg/mL)各3.0 mL，按前述制备供试品溶液，并测定峰面积。计算得到亚油酸回收率平均值为87.63%，RSD为1.75%。

3 讨论

3.1 提取溶剂选用了乙醚、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、三氯甲烷和乙醇分别振摇30 min，静置过夜后滤过，取续滤液，发现提取的成分和含量均无明显差异，而乙醚索氏提取物量明显高于浸渍提取，故以乙醚索氏提取液作为供试溶液。

3.2 结果表明，延龄草主要脂肪酸类成分为亚油酸和棕榈油酸，相对质量分数之和达到81%，亚油酸量达到52.36%，甲酯化后测得质量分数为32.95 mg/g。亚油酸为不饱和脂肪酸。研究表明不饱和脂肪酸对人体有降低血脂、胆固醇和血压，抗血栓、抗动脉硬化，预防心血管疾病，增强记忆力，防癌等多种作用［14-16］。但是亚油酸和棕榈油酸与延龄草的功效是否有关系，还有待于进一步研究。

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R284.1

B

1001-1528(2011)08-1446-03

2010-07-27

陕西省科学技术研究发展计划项目(2006K16-G7)

吴 芳(1979—)，女，主管药师，主要从事中药质量标准和化学成分研究。Tel:(029)85239848