Ezrin蛋白在结肠癌组织中的表达及意义

欧英富，林黎娟，蔡英兰，金 政，王 研，林贞花*

(1辽东学院医学院，辽宁丹东118002;2延边大学医学院)

结肠癌发病率较高，但目前对于其发生、发展相关基因的研究非常有限。研究表明，Ezrin蛋白与多种人类肿瘤的发生、发展有密切关系［1］，但国内有关其在结肠癌组织中表达的的相关报道较少。2011年4月，我们利用高通量组织芯片技术检测了Ezrin蛋白在结肠癌及癌旁良性组织中的表达情况，旨在进一步探讨结肠癌的发生、发展机制。

1 材料与方法

1.1 材料 随机选取辽宁省丹东市中心医院胸外科2007年4月～2010年10月期间行手术切除的结肠癌标本共69份，患者男42例，女27例;年龄32～75岁，平均49.5岁。术后均经病理检查确诊，其中高分化35例、中等分化23例、低分化11例;肿瘤直径≤5cm者41例，＞5cm者28例;伴淋巴结转移39例，侵及浆膜32例。所有患者术前均未经化疗，无远处脏器转移;69例患者癌旁良性组织及23例患者的转移淋巴结组织被同时纳入研究。

1.2 Ezrin蛋白与Ki-67蛋白表达检测 取上述标本的组织芯片，脱蜡、水化，柠檬酸盐抗原修复液修复，PBS漂洗，置入30 ml/L H2O210min，正常血清37℃孵育15min，加入一抗(抗Ezrin和Ki-67单克隆抗体，1∶50稀释;空白对照以PBS代替一抗)4℃冰箱孵育过夜，加入二抗(生物素标记抗IgG抗体及辣根过氧化物酶标记抗IgG抗体)37℃孵育60min，DAB显色，苏木精复染细胞核，中性树胶封片。结果判断:Ezrin阳性着色在细胞质或细胞膜，Ki-67阳性着色在细胞核。按染色强度和阳性表达细胞数比例，参考Mathew等［2］的分级标准，无着色细胞为(-)，着色细胞数＜50%或染色较浅为(+)，着色细胞数＞50%且染色较深为(++)，(+)和(++)均视为阳性表达。

1.3 统计学方法 应用SPSS11.0统计学软件进行统计学处理。不同类型组织中Ezrin蛋白表达的关系、结肠癌组织中Ezrin蛋白表达与临床病理参数之间的关系用Chi-square检验或Fisher's精确检验，结肠癌组织中Ezrin蛋白与Ki-67蛋白表达的关系用Spearman相关性分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Ezrin蛋白及Ki-67蛋白表达 Ezrin蛋白及Ki-67蛋白在不同组织中的表达见表1。

表1 Ezrin蛋白在结肠癌与癌旁良性组织、淋巴结组织中的表达

2.2 Ezrin蛋白表达与结肠癌临床病理学特征的关系 见表2。

表2 Ezrin蛋白表达与结肠癌临床病理学特征的关系

2.3 Ezrin蛋白表达与Ki-67表达的关系 Ezrin蛋白和Ki-67蛋白在结肠癌组织中的表达呈显著正相关，P ＜0.05(r=0.317)。

3 讨论

Ezrin属于ERM家族成员，编码基因为Villin2，定位于染色体6q25.2-q26，该家族包括4种结构相近的蛋白，分别是 Ezrin、Redixin、Moesin、Merlin。目前研究表明，ERM蛋白是连接细胞皮质层肌动蛋白细胞骨架与质膜上整合膜蛋白的桥梁分子。通过介导细胞质膜与肌动蛋白细胞骨架的连接，ERM蛋白在细胞生长、运动、迁移、有丝分裂以及信号转导等方面发挥重要作用，在多种恶性肿瘤中被认为是预测不良结局的分子标志物［3，4］。文献报道，Ezrin蛋白表达是结直肠癌患者独立的预后影响因子，且与CD44表达呈正相关［5］;CD44分子过表达可引起Ezrin蛋白功能激活，从而导致骨肉瘤细胞系转移能力增强［6］;在脱水细胞和肿瘤细胞中，PIP2磷酸化的Ezrin增多，可通过促进RhoA活化等途径促进细胞迁移［7，8］;Ezrin蛋白可阻断整合素传导通路，导致循环和新微环境内肿瘤细胞生存时间延长(抑制其表达可缩短骨肉瘤细胞生存期)［9］。以往研究表明，Ki-67是与DNA拓扑酶Ⅱ相似的核蛋白，在细胞周期G1、S和G2期均有表达，是一个可靠的测量增生活性的标记物，对非小细胞肺癌预后判定具有潜在价值［10］。

本研究显示，Ezrin蛋白在结肠癌组织及转移淋巴结组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织，且其在结肠癌组织中的表达与组织分化程度及有无淋巴结转移、浆膜侵犯有关;Ezrin蛋白与Ki-67蛋白表达呈显著正相关。说明Ezrin蛋白与结肠癌的发生、发展及临床预后密切相关;Ezrin蛋白表达异常可能与细胞增殖程度有关，其可能与Ki-67蛋白协同参与了结肠癌的发生、发展。

总之，Ezrin蛋白在结肠癌发生、发展中起重要作用;此为结肠癌的分子靶向治疗提供了依据。

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