胶体金免疫层析法检测心肌标志物在诊断急性心肌梗死中的应用

刘 宇，周荣斌

急性心肌梗死 (AMI)是严重危及生命的心血管常见急危重症，临床上通过检测特异性心肌损伤标志物来早期诊断AMI。我科采用血清肌钙蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶 (CKMB)/肌红蛋白三合一诊断试剂盒，对140例AMI患者进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2007年4月—2010年3月北京军区总医院急诊科患者共140例。根据2007年ACC/AHA发布的急性ST段抬高性心肌梗死指南与不稳定心绞痛与非ST段抬高性心肌梗死指南，所有研究对象均证实为AMI;且抽血时间选择在发病4 h后 (因发病时间＜4 h心肌标志物未在时间窗内而导致假阴性，不在本研究范围内);排除慢性肾功能不全、心肌炎、急性脑血管病者。

1.2 研究方法 本试验采用双盲、自身对照方法。140例确诊为AMI患者在发病4 h后抽取静脉血，以北京科卫临床诊断试剂有限公司 (简称科卫公司)研制生产的肌钙蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶/肌红蛋白三合一诊断试剂盒 (胶体金法，批号:200808001)作为试验组，以杭州艾康生物技术有限公司 (简称艾康公司)生产的肌钙蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶/肌红蛋白诊断试剂盒(胶体金法，批号:200809021)作为对照组，分别对血液标本进行测试并比较。

所有待检测血液标本严格按待考核试剂盒和对比试剂盒的使用说明书进行操作。在操作时必须在说明书规定的实验条件下进行比较，即在同一检测室、同一仪器设备、同一检测人员按说明书进行。对比试剂和待考核试剂分别按各自说明书进行平行检测。

1.3 统计学方法 所有数据输入到EXCEL表中，分别统计两种试剂盒的阴性和阳性样本数，列成2×2列联表，计算两种试剂盒的敏感性、特异性、误诊率、漏诊率。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析，采用χ2检验进行统计学分析。

2 结果

本组140例AMI患者中115例为ST段抬高性心肌梗死，25例为非ST段抬高性心肌梗死。试验组和对照组检测的肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白、CK－MB结果间差异无统计学意义 (P＞0.05，见表1)。根据表2结果，试验试剂 (科卫公司)三合一试剂盒与对比试剂 (艾康公司)肌钙蛋白Ⅰ/CK－MB/肌红蛋白三合一诊断试剂盒进行标本比对，试验试剂肌钙蛋白Ⅰ、CK－MB、肌红蛋白敏感度与特异性均大于90%(见表3)。

表1 两种试剂检测心肌标志物结果比较Table 1 Comparison of cardiac markers between the two groups

表2 两组试剂检测肌红蛋白、肌钙蛋白Ⅰ、CK－MB结果Table 2 Results about Myo，TnI and CK－MB between two groups

表3 试验试剂敏感度与特异度 (%)Table 3 Sensitivity and specificity of trial group

3 讨论

心肌肌钙蛋白Ⅰ、CK－MB和肌红蛋白是目前诊断和排除AMI应用最多的血生化标志物，在发生心肌梗死后，这3种标志物的释放时间和t1/2不同，因此可以检测这三项互补的指标来诊断AMI，现已成为诊断AMI的有效工具。

欧洲心脏学会 (European Society of Cardiology，ESC)和美国心脏学会 (American College of Cardiology，ACC)于2000年重新定义了AMI的标准［1］。修改以后的标准是:(1)心肌坏死的生物化学标志物肌钙蛋白，呈现典型的升高和逐渐的下降，或者CK－MB快速升高和下降，伴随有:a心肌缺血的症状;b心电图上出现了病理性Q波;c心电图改变提示缺血(ST段升高或者下降);d冠状动脉介入，如冠状动脉成形术。(2)AMI的病理诊断标准。可见心肌标志物在诊断AMI的核心地位。

国内外已有检测心肌标志物的试剂盒上市，单项检测产品较多，主要采用酶联免疫法 (ELISA)、化学发光法、金标层析法、生物芯片等，仅少数公司产品采用三合一检测法，并获美国食品药品管理局 (FDA)注册。虽然检测的试剂、方法很多，但是临床应用研究中发现，各种方法测定结果之间差异很大［2］。例如心肌肌钙蛋白是目前发现的诊断心肌损伤最特异、最敏感的标志物之一［3］，1995年美国FDA批准用于临床AMI的诊断。不同检测方法间测定值最大可差36倍［4］，原因包括各种检测方法采用的抗体各不相同，肌钙蛋白Ⅰ分子内的不同片段和不同抗原决定簇受氧化－还原反应、磷酸化反应或蛋白水解酶作用等而降解的影响各不相同。各生产厂商的肌钙蛋白Ⅰ校准品各不相同，甚至使用同一份标定肌钙蛋白I值的人血清进行校准也未能完全消除不同测定系统之间测定值的差异。为加快检测速度，许多检测系统设计采用血浆或全血标本，抗凝剂的选用是否得当将直接影响检测结果。

金标层析法以其标本用量少、简便快速、无污染等优点，已被大量试验证实有效、可靠［5－7］。肌钙蛋白Ⅰ/CK－MB/肌红蛋白三合一诊断试剂盒采用胶体金免疫层析原理，通过双抗体夹心法快速一步检测血清、血浆、全血中肌钙蛋白Ⅰ/CKMB/肌红蛋白三项指标，当血样被滴入点样孔后，红细胞在分离系统中被移除。样品中含有的相应的待检物即与特异抗体－染料复合物结合，移至检测区与固定的特异抗体或亲合素显色。没有结合的染料复合体移出检测区域最终被阳性对照区捕获。该方法可用于检测人血清、血浆、全血中的肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白和CK－MB，适用于AMI的辅助诊断。本研究结果显示应用胶体金免疫层析法测定的心肌标志物，与艾康公司同类产品比较，科卫公司的试验试剂检测肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白、CK－MB的相对敏感度分别为98.4%、99.2%及97.6%，特异度分别为94.4%、90.9%及94.1%，两组产品的检测结果无统计学差异，能较好地检测患者血样中的肌钙蛋白Ⅰ/CK－MB/肌红蛋白，且操作快捷、简便，适用于临床特别是急诊科对AMI的辅助诊断。

1 Myocardial infarction redefined:a consensus document of the Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee for the redefinition of myocardial infarction ［J］.J Am Coll Cardiol，2000，36:959－969.

2 Apple FS.Clinical and analytical standardization issues confronting cardiac troponin I［J］.Clin Chem，1999，45:18－20.

3 Apple FS，Murakami MM.The diagnostic utility of cardiac biomarkers in detecting myocardial infarction ［J］.Clin Comerstone，2005，7:25－30.

4 Datta P，Foster K，Dasgupta A.Comparison of immunoreactivity of five human cardiac troponin I assay toward free and complexed forms of the antigen:implications for assay discordance［J］.Clin Chem，1999，45:2266－2269.

5 Cai Jia－ li，Zhou Wei－ ying，Jiang He.Development of a colloidal gold－immunochromatography used for early diagnosis of acute myocardial infarction ［J］.Immunological Journal，2005，21:528－531.

6 朱健.心肌标志物检测对急性心肌梗死的快速诊断价值 ［J］.实用心脑肺血管病杂志，2010，18(8):1117.

7 Piras L，Reho S.Colloidal gold based electrochemical immunoassays for the diagnosis of acute myocardial infarction ［J］.Chemical，2005，111:450－454.