超高压法提取山楂中熊果酸的最佳工艺研究

骆晓沛 张守勤 董雯 丽

摘 要：以熊果酸的提取率为指标，采用单因素与正交实验相结合的方法对超高压提取工艺进行了优化，得到最佳提取参数为：料液比1：60 ，乙醇体积分数60%、浸泡时间4小时、压力200mPa。在该条件下，熊果酸的提取率：6.08%。该工艺简单合理，为工业生产提供了理论参考。

关键词：山楂；熊果酸；超高压提取工艺

中图分类号：R284.2 文献标识码：A

引言

山楂为蔷薇科植物山楂( Crataegus pinnatifida Bge. )的成熟果实，重要的药用价值，我国古代医学家早已重视山楂的软坚消积作用[1]，目前，已有50多种中药配方以山楂作原料，如常见的开胃健脾药有“山楂丸”、“焦三仙”等。据报道山楂中的三萜酸是山楂降脂和抗肿瘤有效部位，其主要有效成分为熊果酸、齐墩果酸等三萜酸[2]。

熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖，抗癌、抗病毒等作用[3]，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。本课题充分利用我国山楂资源，以熊果酸的提取率为检测指标，考察了料液比(A) 、溶剂浓度(B) 、浸泡时间(C) 和压力(D) 四个影响因素，研究山楂中熊果酸的超高压提取参数，开辟出能适合工业生产的提取条件。

1 材料与方法

1.1 材料

DL700超高压等静压机(上海大隆机器厂)；紫外可见分光光度计27520型(上海精密科学仪器有限公司)；MA110电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)； RE－52旋转蒸发器(上海安亭电子仪器厂)。

山楂果片，购于吉林大药房；熊果酸对照品，购于上海友思生物技术公司。其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 山楂熊果酸的超高压提取

将山楂果片干燥后粉碎成40目粉末， 精密称取山楂果粉末1g，准确加入一定量的溶剂， 混匀，塑封，浸泡，按预先设计的参数超高压处理[4]，过滤，定容。用分光光度法测量吸光度(A)值。

1.2.2 紫外分光光度法测定熊果酸含量[5]

标准溶液的配制：精密称取干燥至恒重的熊果酸对照品25mg，置25ml容量瓶中，加无水乙醇，轻摇使充分溶解，定容，摇匀，得1.0mg/ml芦丁标准液。

标准曲线的绘制：精密吸取熊果酸对照品无水乙醇液(浓度1.0mg/ml) 0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml水溶挥干，分别加5%香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.0ml，60℃水溶15分钟，冰浴冷却，加冰醋酸5.0ml 摇匀，在548nm 处测定吸收值。以熊果酸的浓度为横坐标，吸收度测定值为纵坐标，做图得到标准曲线。

1.2.3样品的测定：吸取样品液0.2 ml至试管中，步骤同上，在548nm波长处测定吸光度（A）值，根据公式计算出山楂果中熊果酸的提取率Y(%)：

Y＝C×V/0.2 /m×100%

式中：C为按照标准曲线得出的熊果酸浓度；V为过滤后定容体积；m为山楂果样品质量。

2 结果与讨论

根据考察，料液比、溶剂浓度（即乙醇浓度）、提取压力和浸泡时间对熊果酸提取率影响较大，而提取时间即保压时间则影响不明显，因此在单因素试验的基础之上，选择四因素三水平进行正交试验，分别为：压力100mPa、200mPa、300mPa；乙醇浓度50％、60％、70％；料液比1：20、1：40、1：60；浸泡时间1小时、2小时、4小时。以熊果酸的提取率作为评价指标，试验结果见表1。

从表1可以看出:在正交试验所选条件范围内， 4个因素对黄酮提取效果影响的顺序为: B (乙醇浓度) > C (浸泡时间) > A (料液比) > D (提取压力) 。最佳工艺条件为:溶剂为60%浓度乙醇，压力为200mPa， 料液比为1：60， 浸泡时间4小时，提取时间为3min。最高提取率为6.08%。优选得到的工艺稳定、方法可行。

3 结论

山楂，是第一批列入卫生部食药兼用的水果，已被公认为加工保健食品的最佳原料之一。熊果酸具有广泛的生物学活性，安全低毒，日本等国家已经将其作为天然抗氧化剂应用于食品中。超高压技术在我国的应用主要有：高压杀菌、特色产品的加工、水产品的加工、中草药的提取[6]。常温超高压提取技术具有提取时间短、效率高、节能环保等优势。研究利用超高压技术提取山楂中熊果酸的工艺，可以为超高压技术的应用提供可靠的依据。

参考文献

[1]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(上册)[M].北京:人民卫生出社，1990.115-117.

[2]山楂中总三萜酸提取工艺的优选，王逸萍; 陈爱萍; 徐智勇;中华中医药学刊，2007，（25）4：774-775

[3]熊斌，雷志勇， 陈虹。熊果酸药理学的研究进展。国外医学药学分册2004，31（3）：133-136。

[4]陈瑞战，张守勤，王长征.常温超高压提取人参总皂苷[J].化工学报.2005（5）：5-56.

[5]王文祥，顾振纶。比色法测定山楂总三萜酸的含量。中国野生植物资源，2006，20（5 ）：47-48。

[6]励建荣，王泓。超高压技术在食品工业中的应用及前景。现代食品科技，2006，22（1）：171-173.

作者简介：

骆晓沛（1968-），女，黑龙江齐齐哈尔人，副教授，硕士研究生。