酸性染料比色法测定千里光总生物碱含量

张丽虹，杨玉萍，陈小花，肖婷婷，肖培云

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

酸性染料比色法测定千里光总生物碱含量

张丽虹，杨玉萍，陈小花，肖婷婷，肖培云*

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

目的：研究测定千里光中总生物碱含量的方法。方法：以氧化苦参碱为对照品，采用酸性染料比色法，在422 nm波长处测定千里光中总生物碱含量。结果：氧化苦参碱在6.75~135μg与吸光度呈良好的线性关系（r=0.999 2），平均回收率100.0%（RSD=1.54%）。结论：该方法简便、准确，可用于千里光中总生物碱的测定。

酸性染料比色法；千里光；总生物碱

千里光（Senecio scandens Buch.-Ham.）为菊科千里光属植物的干燥地上部分〔1〕。本品以千里光之名始载于《本草拾遗》，味苦、辛，性寒，具有清热解毒、明目退翳、杀虫止痒之功效。主治流感、上呼吸道感染、肺炎、急性扁桃腺炎、腮腺炎、急性肠炎、菌痢、黄疸型肝炎、胆囊炎、急性尿路感染、目赤肿痛翳障、痈肿疖毒、丹毒、湿疹、干湿癣疮、滴虫性阴道炎、烧烫伤〔2〕。文献报道千里光属的大部分植物均含有吡咯里西啶生物碱、萜类、黄酮、有机酸等化学成分〔3〕。生物碱生理作用主要有抗肿瘤、有益神经系统、抗菌、抗疟。千里光中生物碱类的含量测定未见报道。本实验采用酸性染料比色法，以氧化苦参碱为对照品测定千里光中总生物碱的含量〔4〕。

1 仪器与试药

1.1仪器TU-1901双光束紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；梅特勒电子天平AE240（梅特勒仪器有限公司）；DZKW-4电子恒温水浴锅（上海科析实验仪器厂）；超声波清洗器（上海科导超声仪器公司）；RE-3000旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；FYB5型万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限责任公司）；LD4-2型离心机（北京医用离心机厂）；pHS-25C型数字酸度计（梅特勒仪器有限公司）试剂均为分析纯。

1.2药品与试剂氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：110780-200004），溴甲酚绿和其它试剂均为分析纯。千里光药材于2010年8月至12月采自云南省大理市苍山东坡（经大理学院药学院生药学教研室段宝忠老师鉴定）。

2 方法与结果

2.1 pH=5.0柠檬酸-磷酸缓冲溶液的配制0.1 mol/L磷酸二氢钠和0.1 mol/L柠檬酸按1∶1混合，酸度计校正为pH=5.0。

2.2 0.6%溴甲酚绿溶液的配制称取0.6 g溴甲酚绿，加入柠檬酸-磷酸缓冲液（pH=5.0）溶解，并定容至100 mL，得溴甲酚绿缓冲液。

2.3对照品溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品13.5 mg，加70%乙醇溶解并定容至100 mL，作为对照品储备溶液（0.135 mg/mL）。

2.4供试品溶液的制备按文献〔5~6〕提取工艺，精密称定千里光药材5 g，加10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，过滤，合并提取液，回收乙醇，得浸膏。加3倍量2%盐酸至浸膏中，超声溶解，加适量石油醚分2次进行脱脂，脱脂后的酸水液加氨水调pH=10，用氯仿萃取2次，合并氯仿液，加蒸馏水洗涤氯仿液，回收氯仿得千里光总碱。精密称定，精密加入70%乙醇10 mL超声溶解千里光总碱，冷却，补重，作为千里光样品储备溶液。

2.5测定波长的选择精密移取氧化苦参碱对照品溶液1.0 mL，置具塞试管中，加入氯仿10.0 mL。另取10.0 mL氯仿，置另一具塞试管中，制备空白液。分别加入pH5.0的0.6%溴甲酚绿缓冲液1.0 mL，密塞，剧烈振摇3 min，移入分液漏斗中，静置10 min，分取氯仿层。精密吸取氯仿液5 mL，无水乙醇定容至10 mL，摇匀。在400~800 nm波长范围内扫描，结果最大吸收波长为422 nm。

2.6溴甲酚绿缓冲液用量的选择精密量取对照品溶液4份，每份1 mL，加入氯仿10.0 mL，再分别精密加入溴甲酚绿缓冲液1.0、1.5、2.0、2.5 mL，空白溶液同法操作，按“2.5”项方法显色，于422 nm下测定溶液吸光度。结果表明溴甲酚绿缓冲液用量为1.0 mL时有较明显的吸光值，空白吸收较小，故选择溴甲酚绿缓冲液用量为1.0 mL。

2.7标准曲线的绘制分别精密吸取氧化苦参碱对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL按“2.5”项操作，取氯仿层于422 nm波长处测定吸光度值，以对照品量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程：Y=70.009x+0.168 4，r= 0.999 2。结果表明，氧化苦参碱在6.75~135μg范围内吸光度值与对照品用量呈良好的线性关系。

2.8精密度考察同一样品液于422 nm波长处连续测定6次，得吸光度的RSD=0.076%（n=6）。

2.9重复性考察精密称取千里光药材6份，每份5 g，按“2.4”项方法制备样品储备液，精密取上述溶液1.0 mL，按“2.5”项下方法显色，于422 nm处测定吸光度，计算含量。结果样品平均含量为0.054 5 mg/g，RSD=1.56%（n=5）。结果表明重复性较好。

2.10稳定性试验取供试品和对照品溶液，按“2.5”项显色，并在0、5、10、15、20、25、30、35 min分别测定吸光度，结果表明在35 min内基本稳定，样品RSD=2.14%（n=8），对照品RSD=0.15%（n=8）。

2.11加样回收率实验精密称取适量千里光药材，共9份，按表1分别精密加入氧化苦参碱对照品溶液（0.135 mg/mL），每个梯度平行操作3份，按“2.4”项方法制备样品储备液，精密取上述溶液1.0 mL，“2.5”项操作，在422 nm波长处测定吸光度，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.12样品含量测定取大理境内不同月份采集的不同部位千里光药材，按“2.4”项方法制备样品储备液，精密取上述溶液适量，“2.5”项操作，测定总生物碱的含量，结果见表2。

表2 不同月份不同部位千里光总生物碱含量测定（mg/g）

3 讨论

本实验对千里光不同月份不同部位的总生物碱含量分别进行了测定，从结果中可以看出，不同采收期、不同部位千里光总生物碱的含量有显著变化，叶里的含量明显较其它部位高，11月份采收的千里光叶总生物碱含量最高，其次是12月份。这是由于千里光在11月份生长发育到成熟阶段，为开花茂盛期，植物体内总生物碱含量较高，所以从实验结果可以看出11月份为最佳采收期。

千里光地上部分总生物碱含量明显大于地下部分，含量依次为叶>花>茎>根。

采用酸性染料比色法测定中药中总生物碱的含量〔7-8〕，是根据一定pH值条件下，生物碱盐的阳离子和酸性染料的阴离子定量结合生成有色的络合物（即离子对），此离子对可以定量的被某种有机溶剂萃取的原理，通过测定萃取液的吸光度，来测定中药中总生物碱含量的方法。此方法简便、快速、可靠、易行，适合千里光总生物碱含量测定，以控制其质量。

〔1〕国家药典委员会.中华人民共和国药典〔S〕.2010版一部.北京：中国医药科技出版社，2010：32.

〔2〕国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草〔M〕.上海：上海科技出版社，1999：1390.

〔3〕胡军.千里光属植物化学成分的研究进展〔J〕.中成药，2007，29（4）：567-570.

〔4〕高江国，李岩.千里光总生物碱的富集工艺及Adonifoline的分离纯化〔J〕.上海中医药杂志，2009，43（2）：72-74.

〔5〕高淑云，焦灿.麻叶千里光中生物碱的提取及测定分析〔J〕.食品科学，2009，30（18）：261-266.

〔6〕王玉芹.峨眉千里光生物碱乙醇提取工艺研究〔J〕.中成药，2004，26（10）：2-3.

〔7〕蒋爱芳，杨义芳，黄文武.酸性染料比色法测定总生物碱的研究进展〔J〕.中草药，2006，37（S）：359-362.

〔8〕万进，方建国.酸性染料比色法测定荷叶总生物碱含量〔J〕.医药导报，2010，29（5）：671-673.

*通信作者：肖培云，副教授.

（责任编辑 毛本勇）

Determination of Total Alkaloids Content in Senecio Scandens Buch.-Ham.by Acid Dye Colorimetry

ZHANG Lihong,YANG Yuping,CHEN Xiaohua,XIAO Tingting,XIAO Peiyun*
（School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To determine the total alkaloids content in Senecio scandens Buch.-Ham.Methods:Using the oxymatrine as standard,acid dye colorimetry was used to determine the total alkaloids content in S.scandens at the wavelength of 422 nm.Results: The concentration of oxymatrine showed good linearity in the range of 6.75-135μg（r=0.999 2）,the average recovery was 100.0%（RSD=1.54%）.Conclusion:The method is simple,reliable and can be used for determination of the total alkaloids in S.scandens.

acid dye colorimetry;Senecio scandens Buch.-Ham.;total alkaloids

R286；R917

A

1672-2345（2011）12-0030-02

大理学院大学生科研基金（DXSKYX201012）

2011-04-28

2011-09-17

张丽虹，大理学院药学与化学学院本科生.