酸性染料比色法测定千里光总生物碱含量

2011-05-08 03:34张丽虹杨玉萍陈小花肖婷婷肖培云
大理大学学报 2011年12期
关键词:千里光比色法苦参碱

张丽虹,杨玉萍,陈小花,肖婷婷,肖培云

(大理学院药学与化学学院,云南大理 671000)

酸性染料比色法测定千里光总生物碱含量

张丽虹,杨玉萍,陈小花,肖婷婷,肖培云*

(大理学院药学与化学学院,云南大理 671000)

目的:研究测定千里光中总生物碱含量的方法。方法:以氧化苦参碱为对照品,采用酸性染料比色法,在422 nm波长处测定千里光中总生物碱含量。结果:氧化苦参碱在6.75~135μg与吸光度呈良好的线性关系(r=0.999 2),平均回收率100.0%(RSD=1.54%)。结论:该方法简便、准确,可用于千里光中总生物碱的测定。

酸性染料比色法;千里光;总生物碱

千里光(Senecio scandens Buch.-Ham.)为菊科千里光属植物的干燥地上部分〔1〕。本品以千里光之名始载于《本草拾遗》,味苦、辛,性寒,具有清热解毒、明目退翳、杀虫止痒之功效。主治流感、上呼吸道感染、肺炎、急性扁桃腺炎、腮腺炎、急性肠炎、菌痢、黄疸型肝炎、胆囊炎、急性尿路感染、目赤肿痛翳障、痈肿疖毒、丹毒、湿疹、干湿癣疮、滴虫性阴道炎、烧烫伤〔2〕。文献报道千里光属的大部分植物均含有吡咯里西啶生物碱、萜类、黄酮、有机酸等化学成分〔3〕。生物碱生理作用主要有抗肿瘤、有益神经系统、抗菌、抗疟。千里光中生物碱类的含量测定未见报道。本实验采用酸性染料比色法,以氧化苦参碱为对照品测定千里光中总生物碱的含量〔4〕。

1 仪器与试药

1.1仪器TU-1901双光束紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);梅特勒电子天平AE240(梅特勒仪器有限公司);DZKW-4电子恒温水浴锅(上海科析实验仪器厂);超声波清洗器(上海科导超声仪器公司);RE-3000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);FYB5型万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限责任公司);LD4-2型离心机(北京医用离心机厂);pHS-25C型数字酸度计(梅特勒仪器有限公司)试剂均为分析纯。

1.2药品与试剂氧化苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所,含量测定用,批号:110780-200004),溴甲酚绿和其它试剂均为分析纯。千里光药材于2010年8月至12月采自云南省大理市苍山东坡(经大理学院药学院生药学教研室段宝忠老师鉴定)。

2 方法与结果

2.1 pH=5.0柠檬酸-磷酸缓冲溶液的配制0.1 mol/L磷酸二氢钠和0.1 mol/L柠檬酸按1∶1混合,酸度计校正为pH=5.0。

2.2 0.6%溴甲酚绿溶液的配制称取0.6 g溴甲酚绿,加入柠檬酸-磷酸缓冲液(pH=5.0)溶解,并定容至100 mL,得溴甲酚绿缓冲液。

2.3对照品溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品13.5 mg,加70%乙醇溶解并定容至100 mL,作为对照品储备溶液(0.135 mg/mL)。

2.4供试品溶液的制备按文献〔5~6〕提取工艺,精密称定千里光药材5 g,加10倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,过滤,合并提取液,回收乙醇,得浸膏。加3倍量2%盐酸至浸膏中,超声溶解,加适量石油醚分2次进行脱脂,脱脂后的酸水液加氨水调pH=10,用氯仿萃取2次,合并氯仿液,加蒸馏水洗涤氯仿液,回收氯仿得千里光总碱。精密称定,精密加入70%乙醇10 mL超声溶解千里光总碱,冷却,补重,作为千里光样品储备溶液。

2.5测定波长的选择精密移取氧化苦参碱对照品溶液1.0 mL,置具塞试管中,加入氯仿10.0 mL。另取10.0 mL氯仿,置另一具塞试管中,制备空白液。分别加入pH5.0的0.6%溴甲酚绿缓冲液1.0 mL,密塞,剧烈振摇3 min,移入分液漏斗中,静置10 min,分取氯仿层。精密吸取氯仿液5 mL,无水乙醇定容至10 mL,摇匀。在400~800 nm波长范围内扫描,结果最大吸收波长为422 nm。

2.6溴甲酚绿缓冲液用量的选择精密量取对照品溶液4份,每份1 mL,加入氯仿10.0 mL,再分别精密加入溴甲酚绿缓冲液1.0、1.5、2.0、2.5 mL,空白溶液同法操作,按“2.5”项方法显色,于422 nm下测定溶液吸光度。结果表明溴甲酚绿缓冲液用量为1.0 mL时有较明显的吸光值,空白吸收较小,故选择溴甲酚绿缓冲液用量为1.0 mL。

2.7标准曲线的绘制分别精密吸取氧化苦参碱对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL按“2.5”项操作,取氯仿层于422 nm波长处测定吸光度值,以对照品量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,得到线性方程:Y=70.009x+0.168 4,r= 0.999 2。结果表明,氧化苦参碱在6.75~135μg范围内吸光度值与对照品用量呈良好的线性关系。

2.8精密度考察同一样品液于422 nm波长处连续测定6次,得吸光度的RSD=0.076%(n=6)。

2.9重复性考察精密称取千里光药材6份,每份5 g,按“2.4”项方法制备样品储备液,精密取上述溶液1.0 mL,按“2.5”项下方法显色,于422 nm处测定吸光度,计算含量。结果样品平均含量为0.054 5 mg/g,RSD=1.56%(n=5)。结果表明重复性较好。

2.10稳定性试验取供试品和对照品溶液,按“2.5”项显色,并在0、5、10、15、20、25、30、35 min分别测定吸光度,结果表明在35 min内基本稳定,样品RSD=2.14%(n=8),对照品RSD=0.15%(n=8)。

2.11加样回收率实验精密称取适量千里光药材,共9份,按表1分别精密加入氧化苦参碱对照品溶液(0.135 mg/mL),每个梯度平行操作3份,按“2.4”项方法制备样品储备液,精密取上述溶液1.0 mL,“2.5”项操作,在422 nm波长处测定吸光度,计算回收率,结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.12样品含量测定取大理境内不同月份采集的不同部位千里光药材,按“2.4”项方法制备样品储备液,精密取上述溶液适量,“2.5”项操作,测定总生物碱的含量,结果见表2。

表2 不同月份不同部位千里光总生物碱含量测定(mg/g)

3 讨论

本实验对千里光不同月份不同部位的总生物碱含量分别进行了测定,从结果中可以看出,不同采收期、不同部位千里光总生物碱的含量有显著变化,叶里的含量明显较其它部位高,11月份采收的千里光叶总生物碱含量最高,其次是12月份。这是由于千里光在11月份生长发育到成熟阶段,为开花茂盛期,植物体内总生物碱含量较高,所以从实验结果可以看出11月份为最佳采收期。

千里光地上部分总生物碱含量明显大于地下部分,含量依次为叶>花>茎>根。

采用酸性染料比色法测定中药中总生物碱的含量〔7-8〕,是根据一定pH值条件下,生物碱盐的阳离子和酸性染料的阴离子定量结合生成有色的络合物(即离子对),此离子对可以定量的被某种有机溶剂萃取的原理,通过测定萃取液的吸光度,来测定中药中总生物碱含量的方法。此方法简便、快速、可靠、易行,适合千里光总生物碱含量测定,以控制其质量。

〔1〕国家药典委员会.中华人民共和国药典〔S〕.2010版一部.北京:中国医药科技出版社,2010:32.

〔2〕国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草〔M〕.上海:上海科技出版社,1999:1390.

〔3〕胡军.千里光属植物化学成分的研究进展〔J〕.中成药,2007,29(4):567-570.

〔4〕高江国,李岩.千里光总生物碱的富集工艺及Adonifoline的分离纯化〔J〕.上海中医药杂志,2009,43(2):72-74.

〔5〕高淑云,焦灿.麻叶千里光中生物碱的提取及测定分析〔J〕.食品科学,2009,30(18):261-266.

〔6〕王玉芹.峨眉千里光生物碱乙醇提取工艺研究〔J〕.中成药,2004,26(10):2-3.

〔7〕蒋爱芳,杨义芳,黄文武.酸性染料比色法测定总生物碱的研究进展〔J〕.中草药,2006,37(S):359-362.

〔8〕万进,方建国.酸性染料比色法测定荷叶总生物碱含量〔J〕.医药导报,2010,29(5):671-673.

*通信作者:肖培云,副教授.

(责任编辑 毛本勇)

Determination of Total Alkaloids Content in Senecio Scandens Buch.-Ham.by Acid Dye Colorimetry

ZHANG Lihong,YANG Yuping,CHEN Xiaohua,XIAO Tingting,XIAO Peiyun*
(School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China)

Objective:To determine the total alkaloids content in Senecio scandens Buch.-Ham.Methods:Using the oxymatrine as standard,acid dye colorimetry was used to determine the total alkaloids content in S.scandens at the wavelength of 422 nm.Results: The concentration of oxymatrine showed good linearity in the range of 6.75-135μg(r=0.999 2),the average recovery was 100.0%(RSD=1.54%).Conclusion:The method is simple,reliable and can be used for determination of the total alkaloids in S.scandens.

acid dye colorimetry;Senecio scandens Buch.-Ham.;total alkaloids

R286;R917

A

1672-2345(2011)12-0030-02

大理学院大学生科研基金(DXSKYX201012)

2011-04-28

2011-09-17

张丽虹,大理学院药学与化学学院本科生.

猜你喜欢
千里光比色法苦参碱
药用绿化植物千里光种子萌发特性研究
返魂草资源调查及分子鉴别研究
治疥疮
苦参碱对乳腺癌Bcap-37细胞增殖和凋亡的影响
氧化苦参碱对SGC7901与ECV304的体外活性比较研究
基于双重脱氧核酶的超灵敏比色法检测铜离子
氧化苦参碱对人肝癌HepG2细胞增殖及能量代谢的影响
治疗皮肤肿疮毒的良药——千里光
维药苦豆子中苦参碱的提取
比色法测定矿物中锑含量的方法创新与研究