HPLC法和UV分光光度法测定阿奇霉素片溶出度的方法比较

齐晓飞，赵晓冬

阿奇霉素片溶出度测定最早采用微生物检定法，不仅费时、繁琐，而且工作量较大。用高效液相色谱法测定阿奇霉素片溶出度较为准确、省时，但因色谱柱碱性较大，不易得到广泛使用，笔者参照有关资料，重点考察了紫外分光光度法测定阿奇霉素片溶出度，并将测定的结果与高效液相色谱法进行比较［1］，现报道如下。

1 仪器与试药

ZRS-4智能溶出试验仪，超声波振荡器(上海声波仪器厂)，RZOOD电子天平，岛津UV-240紫外分光光度仪，岛津LC-10AD高效液相色谱仪。阿奇霉素片规格 250 mg，批号:T-1、T-2、T-3;规格:500 mg，批号 T-4、T-5、T-6。阿奇霉素二水合物对照品由中国生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 紫外分光光度法测定阿奇霉素片溶出度方法的建立

2.1.1 显色方法与波长的选择 取本品适量，加磷酸盐缓冲液(pH 6.0)溶解，并稀成约含55 U/mL的溶液，过滤，取续滤液5 mL，精密加入硫酸溶液(75→100)5 mL，混匀，自然冷却，按照紫外分光光度法(中国药典2005年版二部附录XC)，在420～520 nm波长范围进行扫描，其最大吸收波长在(482±2)nm，测定波长确定为(482±2)nm。

2.1.2 吸收度和浓度的线性关系 精密称取阿奇霉素二水合物标准品适量置100量瓶中，加适量甲醇溶解后，加磷酸盐缓冲液(pH 6.0)至刻度，再依次稀释成 18、36、54、72、90 U/mL 浓度的溶液，以溶剂为空白液，按照紫外分光光度法，在(482±2)nm波长处分别测定吸收度值，以浓度与吸收度进行回归计算，得回归方程:A=0.007 5C-0.017，r=0.999 1。结果表明，阿奇霉素在17.94～89.69 U/mL浓度范围内线性关系良好。

2.1.3 辅料对吸收度的影响 按处方配制，精密称取辅料适量，加磷酸盐缓冲液(pH 6.0)摇匀，滤过，取续滤液，依照显色法进行显色，并在420～520 nm波长处测定吸收度，结果表明，辅料无吸收，对测定结果无影响。

2.1.4 回收率试验 精密称取阿奇霉素原料适量，再依据处方比例加入辅料，加磷酸盐缓冲液(pH 6.0)溶解，摇匀，滤过，取续滤液，依照显色法进行显色，在(482±2)nm波长处测定吸收度，并计算其回收率。结果见表1。

表1 回收率试验(n=6)

2.1.5 溶出曲线的制备 取1片阿奇霉素片放入900 mL 溶剂中，在规定时间(5、10、20、30、45、60 min)经100 r/min搅拌后，取10 mL滤过，随即补加预热至37℃的溶剂10 mL，取续滤液5 mL，加硫酸溶液5 mL混匀，在(482±2)nm波长处测定吸收度，计算出各时间的累计溶出量和RSD值，结果见表2。

表2 溶出曲线

2.1.6 溶出度方法的建立 取本品1片于900 mL溶剂中，以磷酸盐缓冲液(pH 6.0)为溶剂，按照溶出度测定法第二法(中国药典2005年版二部附录XC)测定。100 r/min搅拌。45 min取样过滤，取续滤液10 mL，用溶剂稀释成55 U/mL，精密量取5 mL加硫酸溶液5 mL(75～100)，混匀，放30 min自然冷却。按照紫外分光光度法，在(482±2)nm波长处立即测定吸收度。另取供试品10片研细，混匀，称取适量(相当于1片的重量)用甲醇溶解，用磷酸盐缓冲液(pH 6.0)稀释成55 U/mL作为对照品溶液，同法测定计算出每片的溶出量。结果见表3。

2.2 高效液相色谱法测定阿奇霉素片溶出度取本品，照溶出度测定法［2］(中国药典2005年版二部附录XC第二法)测定，以磷酸盐缓冲液(pH 6.5)900 mL为溶剂，转速为75 r/min，45 min后取溶液10 mL滤过，取续滤液5 mL，加碱液0.2 mL摇匀，作为供试品溶液(规格250 mg);或取续滤液0.4 mL摇匀，作为供试品溶液(规格500 mg)。按高效液相色谱法外标法测定，色谱柱:ODS-50，流动相:0.04MK2HPO4(pH 11.0)缓冲液-乙腈(400∶600)，流速:1.0 mL/min，检测波长:215 nm，柱温:40℃，进样量:20 μL。另取阿奇霉素二水合物标准品适量(约相当于阿奇霉素28 mg)置100 mL量瓶中，加溶剂并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置10 mL量瓶中，加碱液0.2 mL混匀，作为对照品溶液。同法操作，计算出每片的溶液出量。结果见表4。

2.3 高效液相色谱法及紫外分光光度法测定阿奇霉素片溶出度的方法比较 分别用高效液相色谱法及紫外分光光度法测定阿奇霉素片规格250 mg及500 mg各3批样品的溶出度，结果见表4及表5。结果表明，两种方法测定的溶出度基本一致。

表4 高效液相色谱法测定阿奇霉素片溶出度

表5 紫外分光光度法测定阿奇霉素片溶出度结果

3 讨论

3.1 高效液相色谱法及紫外分光光度法测得的阿奇霉素片溶出量的百分含量基本一致，并且误差较小，方法简便，但高效液相色谱法流动相中缓冲液的pH值较高，对柱子的选择性要求高，国内不易达到广泛使用。而紫外分光光度法条件限制不高，测定的结果与高效液相色谱法的结果基本一致，并且其他各项实验条件均符合实验要求。

3.2 紫外分光光度法中加硫酸液显色，反应时间的长短及硫酸质量优劣等对颜色的深浅有一定的影响，操作时应严格掌握。

［1］ 高燕霞，张菁，张哲峰，等.阿奇霉素的两种含量测定方法比较［J］.中国抗菌药物杂志，2000，25(5):388.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典.二部.2005.