HPLC法测定葛蒡合剂中葛根素的含量

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(1.吉林大学第三医院，吉林 长春 130021；2.吉林省人民医院，吉林 长春 130021)

葛蒡合剂是由葛根、牛蒡子、荆芥、薄荷等5味中药组成的复方制剂[1]。具有辛凉透表的功效，用于风热感冒，头痛发热，咳嗽咽痛及麻疹初期或出疹不透等症。本文选择葛根中葛根素含量作为指标成分，建立了葛蒡合剂中葛根素的HPLC测定法，为该药的质量控制提供了定量评价方法，以便更好地控制产品的质量，保证安全及疗效。

1 仪器与试药

岛津LC-20A高效液相色谱仪；紫外检测器，CLASS-VP工作站，色谱柱:Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)。芍药苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号0736-9913,供含量测定用。葛蒡合剂为通化鸿茂有限公司提供样品，批号：20090105、20090106、20090107，甲醇为优级纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用Agilent C18，4.6 mm×150 mm，5 μm色谱柱，以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250 nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于3 000。

2.2 测定波长的选择 取葛根素对照品的甲醇溶液，经UV-2201紫外分光光度计200 nm～320 nm范围内扫描，葛根素在250 nm波长处有最大吸收，故选择250 nm为本实验的测定波长。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量，加甲醇溶解,并配制成每1 mL含0.07 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备 精密量取本品1.5 mL，置50 mL量瓶中，加60%甲醇适量,超声处理(功率250 W,频率33 kHz)20 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

2.5 阴性对照液制备及干扰试验 按处方取去除葛根药材的其它药材，按样品工艺同法制备，制得阴性对照样品，再按供试品溶液的制备方法操作，制成阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各10 μL，按上述色谱条件进样分析，绘制色谱图，测定结果表明：供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上，具有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱中无干扰。

2.6 线性关系 精密称取葛根素对照品溶液4、8、12、16、20 μL，分别注入液相色谱仪，按前述色谱条件测定，以进样量(μg)为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线,求出回归方程为Y=220 696 1.313X+402 97.677，相关系数r=0.999 7,线性范围为进样量在0.28 μg～1.40 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验 取同一供试品溶液，依法连续进样5次，每次10 μL,在上述色谱条件下，测定色谱峰面积，测定结果峰面积平均值为160 928 4.125，RSD=0.54%，表明精密度良好。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液10 μL，按上述条件进行分析,测定时间为0、2、4、6、8 h，测定色谱峰面积，结果表明供试品溶液的8 h内稳定，RSD=0.76%。

2.9 重复性试验 取同一批次样品5份,按2.4项下的方法制备供试品溶液。按前述色谱条件进行分析，测定结果表明样品中葛根素含量(mg/10 mL)分别为25.401 5、25.103 6、25.601 7、25.006 8、24.986 1，平均25.219 9 mg/10 mL，RSD为1.07%。结果表明重复性好。

2.10 加样回收率试验 精密量取已知葛根素含量的样品(批号：20090105,每10 mL葛根素含量为25.219 9 mg)1.0 mL，5份，分别精密加入葛根素对照品适量，按供试品溶液制备方法操作，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

表1结果表明方法的回收率较好。

2.11 样品的含量测定 按上述方法，制备供试品溶液，测定3批葛蒡合剂中葛根素的含量，结果见表2。

表2 3批样品中葛根素含量测定结果

3 结论

在实验过程中,曾选用甲醇-水-冰醋酸(25∶64∶1)、甲醇-0.5%醋酸(25∶75)等多种流动相，因其色谱峰分离效果不好，而未被应用。经实验证明,确定甲醇-水(25∶75)为流动相，其色谱峰得到较好分离，而被采用[2-3]。

本文采用高效液相色谱法，测定了葛蒡合剂中葛根素的含量，其方法简便、准确，灵敏，回收率较好，可为该制剂的质量控制提供一个有效内在质量控制指标。

[1]国家药典委员会.卫生部药品标准:第5册[S].北京:人民卫生出版社,2000:173.

[2]杨翠微,张俊玮.HPLC测定参苏丸中葛根素的含量[J].湖南中医药导报,2000,6(10):36.

[3]黄亚非,张永明,何翱,等.采用高效液相色谱法测定心脉通口服液中葛根素含量[J].中国中药杂志,2001,26(11):760.