大剂量BOP(N-亚硝基双(2-氧丙基)胺)诱导了金黄地鼠肝内胆管癌而非胰腺癌*

吴泽珊，蒲 宇，沈成义，向 宇，蹇顺海，谢贤镛，文 彬，张小明，杨正伟

(川北医学院，1.形态定量研究室;2.医学影像研究所;3.病理生理研究室;4.附属医院病理科，四川 南充 637000)

胰腺癌发病机制尚不明确，制备胰腺癌动物模型对于研究胰腺癌发生与发展机制非常重要。目前，国内常用裸鼠建立种植性胰腺癌模型［1］;国外常用 BOP(N-nitrosobis(2-oxopropyl)amine，N-亚硝基双(2-氧丙基)胺)诱导金黄地鼠胰腺癌，其特征与人类胰腺癌很相似［2］。BOP的常用剂量为10mg/kg体重，用药后 30 周左右成模［2，3］。Ouyang等(2005)［4］用大剂量BOP来诱导金黄地鼠胰腺癌，用药后18周成模。我们参考后一方法造模，结果没有诱导出胰腺癌，而诱导了肝内胆管癌。本文将我们的造模情况作一简要报告。

1 材料与方法

1.1 动物及用药:雌性叙利亚金黄地鼠(由四川省实验动物专委会养殖场提供)68只，用药前年龄约(8－9)周，体重91克－109克。把动物随机分为实验组48只，对照组20只。给实验组动物皮下注射用生理盐水配制的BOP(C6H10N2O3，美国International Laboratory公司产品)，对照组动物注射等量生理盐水。完全根据文献［4］所述剂量和方法，实验组每个动物每周注射1次BOP，共5次，首次剂量为70 mg/kg体重，后4次均为20mg/kg。

首次用药8周(54天)后处死有明显腹水的实验组动物(10只)，从对照组随机选择6只处死;用药12周(82天)后处死余下存活的实验组动物(7只)，并再从对照组随机抽选6只动物处死，其余对照组动物用于其他实验。

1.2 组织病理学:处死动物后立即取出肝脏和胰腺等内脏器官，浸润固定于Bouin液内2天，然后在70%乙醇内保存，(2－5)天后给器官称重并切组织块。通过肝脏中心区域随机切取1组织薄片，然后从该薄片间隔切取2个组织块;沿垂直于胰腺长轴的方向，把胰腺切成3－4个组织块。组织块经常规石蜡(德国Leica公司)包埋，每个肝脏和胰腺各包埋2个蜡块;从每个蜡块切1张7μm厚的切片(所用肝脏和胰腺切片的平均面积分别约为54、39 mm2)，常规作HE(苏木素+伊红)染色。

1.3 体视学:用×20物镜观察肝脏切片，在电脑显示器上观察切片图像(最后放大倍数×535)，用电动载物台(川北医学院与四川大学、北京驰马特图像技术有限公司联合研制)等距随机抽选测试视野(从每张切片上平均抽选了36个视野)，并用体视学测格软件(川北医学院与北京驰马特图像技术有限公司联合研制)在切片图像上生成6个测点(“+”，点间距为125 ×175μm)，计数位于胆管管壁及管腔内的测点数以及位于整个切片内的测点数，由此估计肝内胆管的体积分数［5］。

2 结果

整个实验期间，对照组动物没有死亡。实验组动物第8周取材前死亡20只，第12周取材前死亡共31只。动物死于互相撕咬、虚弱及腹水等(具体死亡原因未做详细病理解剖分析)。

实验组动物体重显著减轻，实验组第12周取材动物肝脏重量显著增加(表1)。实验组第8周取材的所有10只动物腹腔内有(8－27)ml腹水，第12周取材的6/7只动物有(2－45)ml腹水;腹水呈淡黄或深黄色，清亮。

表1 主要结果(x－±SD)

对照组所有动物的胰腺和肝脏未见明显的异常组织病理学变化，肝内可见胆管主要为稀少的小叶间胆管(图1和表1)。

实验组所有动物胰腺的组织病理学基本正常(似有一定程度的间质水肿和炎细胞浸润)，未见任何癌变组织。除第12周组有1只动物“基本正常”(肝内胆管略微扩张)外，2组所有动物肝内胆管异常增生，增生胆管占肝脏体积的14%–62%(表1)。胆管增生呈弥漫性，并向肝小叶结构内侵犯。增生的胆管上皮为单层立方、柱状(图2)，部分区域呈乳头状和不同程度的不典型增生(图3)。除第12周组2只动物外，2组所有动物肝内部分异常增生的胆管出现灶性癌变［6］，表现为上皮细胞形态多样，层次增加，细胞核极性消失，染色质多而不均匀，可见病理性核分裂及“背靠背”或共壁征象(图4)，甚至胆管结构消失，细胞呈小巢状分布(图5)。增生胆管间残存的肝细胞中有不少细胞肿大(图1－图5)，少量细胞有淤胆征象(图2)。

3 讨论

胰腺癌常用金黄地鼠造模，并常用小剂量BOP(例如10mg/kg)多次注射的方法，成模时间大约在首次用药后30周左右［2，3］。我们也用了该法造模(以10mg/kg的剂量每周注射与本文一样的BOP一次，共注射7次)，首次用药后38周的确观察到胰腺癌形成(正在研究中，尚未报告)。文献［4］用大剂量BOP来诱导金黄地鼠胰腺癌，首次用药后18周大多数动物都有胰腺癌形成［4］。本文采用该文献所用方法造模，以期缩短造模时间，结果却没有造成胰腺癌，而造成严重肝损害，首次用药后12周大多数动物都已死亡。笔者觉得这很难解释，因为文献［4］用的也是雌性叙利亚金黄地鼠(用药前年龄5周，体重70克)。也许，大剂量BOP更易损害肝脏，动物存活困难，不适于建造胰腺癌模型。

肝内胆管癌尚缺乏理想的动物模型。有趣的是，本研究所用大剂量BOP“碰巧”诱导出了肝内胆管癌。人们常用亚硝胺类化合物［7］、呋喃［8］等致癌剂诱导大鼠，尤其是金黄地鼠(其胆道解剖［9］和胆汁［10］成分与人相似)肝内胆管癌。事实上，有研究报告过小剂量BOP诱导胆管癌(成模率约20%)［11］;为增加造模成功率，人们常在 BOP 用药的基础上结合外科手术(胆囊小肠吻合)造模［7］。本研究显示BOP用药后绝大多数动物都出现肝内胆管不典型增生及灶性肝内胆管癌。因此，本研究结果无疑为进一步探讨用BOP创建肝内胆管癌模型提供了重要参考依据。

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