p53、c-erbB-2、nm23在胃癌组织和转移淋巴结中的表达

刘春忻 (齐齐哈尔医学院附属第二医院，黑龙江 齐齐哈尔 161006)

已有研究表明，在肿瘤的发生、浸润和转移的连续过程中涉及到多种癌基因。目前研究人员非常重视胃癌浸润和转移的相关蛋白和基因的调控研究〔1〕。研究显示，胃癌的发生是多基因、多因素变异所致。本文检测胃癌的肿瘤组织和转移淋巴结中p53、c-erbB-2、nm23蛋白的表达，探讨三者在胃癌转移和浸润中发挥的作用，以及是否具有协同作用。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 临床对象 选择2002年1月至2009年6月在我院住院诊断并手术切除的胃癌45例，其中男34例，女11例，年龄35～89〔平均(60.3±24.5)〕岁;早期15例，中期13例，晚期17例，所有患者均为浸润性胃癌，按世界卫生组织制定的标准进行组织分型，根据肿瘤细胞分化程度分为低分化组(黏液腺癌6例，印戒细胞癌5例、低分化腺癌10例)和高分化组(乳头状腺癌8例，管状腺癌16例);均伴有淋巴结转移。35例非胃癌患者，慢性胃炎伴重度不典型增生26例，胃息肉9例。所有患者包括胃癌组织、转移的淋巴结以及非癌症胃黏膜标本均常规经4%甲醛固定、包埋，5μm厚切片待用。

1.1.2 试剂和仪器 鼠抗人p53单克隆抗体、鼠抗人c-erbB-2单克隆抗体(Santa Cruz产品);鼠抗人nm23单克隆抗体，批号:20101202(武汉博士德科技有限公司产品)。二氨基联苯胺(DAB)酶底物显色试剂盒，批号:20101201(武汉博士德科技有限公司产品)。恒温水浴箱(上海方瑞仪器厂)，实验用医用微波炉(上海华舟压敏胶制品有限公司)等。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 采用免疫组化 (SABC)法，乙二胺四乙酸(EDTA)修复液抗原修复组织切片，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗。然后在标本上滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min。滴加Ⅰ抗 (p53、c-erbB-2、nm23)，4℃过夜。PBS冲洗。滴加生物素化二抗 (羊抗兔ⅠgG)。PBS冲洗。滴加试剂SABC，PBS冲洗，DAB显色，蒸馏水洗。苏木素复染、盐酸酒精分化。梯度酒精脱水、二甲苯透明、滴树胶封片，光学显微镜检查〔2〕。

1.2.2 结果判定 p53蛋白阳性表达产物定位于细胞核中，核内可见明显的棕黄色颗粒。c-erbB-2表达产物定位于细胞质或细胞膜，表现为有明显的棕黄色颗粒;nm23表达产物以细胞质棕黄色着色为阳性细胞颗粒。

1.2.3 图像分析方法 采取p53、c-erbB-2、nm23光学显微镜图像，通过Ⅰmage-Pro Plus7.0分析软件图像分析，每张切片均采用5个图像测定血管组织阳性表达产物的积分光密度值(ⅠOD)，取平均值代表 p53、c-erbB-2、nm23 表达强度，ⅠOD 值越大表示阳性产物表达越强〔3〕。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行分析，计量资料均以±s表示，各组数据进行方差齐性检验。

2 结果

2.1 p53、c-erbB-2、nm23在癌症组织和非癌症组织胃黏膜的表达变化 p53、c-erbB-2、nm23均在胃癌组织内表达，且ⅠOD高表达，与非癌症胃黏膜比较有显著差异(P＜0.05)。见表1，图1。

图1 胃癌组织病理结果

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌症组织和非癌症组织胃黏膜的表达变化(IOD，±s)

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌症组织和非癌症组织胃黏膜的表达变化(IOD，±s)

与非癌症组比较:1)P＜0.05

组别 n p53 c-erbB-2 nm23非癌症组35 12.12±3.43 9.34±1.64 21.63±5.65癌症组 45 55.32±14.471) 25.74±3.751) 59.37±12.481)

2.2 癌组织与转移淋巴结组织p53、c-erbB-2、nm23的表达变化 患者转移淋巴结中p53、c-erbB-2蛋白ⅠOD呈高表达，与原位癌组织ⅠOD比较有显著差异，有统计学意义(P＜0.05)。转移淋巴结中nm23ⅠOD呈低表达，与原位癌组织ⅠOD比较有显著差异，有统计学意义(P＜0.05)。见表2，图2。

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌症组织和转移淋巴结的表达(IOD，±s，n=45)

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌症组织和转移淋巴结的表达(IOD，±s，n=45)

与癌症组织比较:1)P＜0.05

组别p53 c-erbB-2 nm23癌症组织55.32±14.47 25.74±3.75 59.37±112.48转移淋巴结 95.47±23.741) 63.37±14.75 32.64±10.431)

图2 p53、c-erbB-2、nm23在胃癌组织与转移淋巴组织的表达(×460)

3 讨论

恶性肿瘤最基本的生物学特性通常是肿瘤细胞具备转移和侵袭的能力，转移和侵袭是恶性肿瘤威胁患者生命的主要原因。因此，探索肿瘤转移和侵袭的发生机制及其活动规律，对恶性肿瘤的预后具有明显的指导意义。肿瘤转移(tumor metastasis)是指肿瘤细胞从其原发部位侵入体腔、血管或淋巴管，甚至靶器官或靶组织。肿瘤侵袭(tumor invasion)是指肿瘤细胞从原发部位沿组织间隙向外周组织侵袭的过程，其确定标准是肿瘤细胞是否突破基底膜。肿瘤转移和侵袭是既不同又有联系的两个阶段。

胃癌的分子生物学表明，在胃癌的发生、发展过程中，一些癌基因、抑癌基因会发生缺失和突变。p53基因位于17号染色体上，蛋白产物分子量为53 kD。野生型p53具有调节细胞凋亡及增殖的双重作用，能维持细胞的正常生长，但不易检测，在细胞内保存期非常短。p53基因突变、缺失导致表达异常称为突变型p53，保存时间相对较长〔4〕。多种肿瘤中p53均见过多表达，说明p53基因出现突变。本研究发现胃癌组织中p53蛋白表达的ⅠOD与非癌症胃黏膜比较有显著差异，提示胃癌患者的p53蛋白是高表达的。

c-erbB-2基因(又称HER2/neu)一般定位于人17号染色体，糖蛋白产物为185 kD，即c-erbB-2蛋白(ERBB2)，c-erbB-2属于受体酪氨酸激酶(RTK)Ⅰ家族，在正常条件下，c-erbB-2通过与其他RTKⅠ受体形成异二聚体激活，参与细胞调控，涉及到细胞凋亡、增殖、迁移。肿瘤组织中，c-erbB-2过表达，促进RTK调控网络失控，增加了肿瘤转化活性〔5〕。本研究显示胃癌组织中c-erbB-2蛋白表达的ⅠOD与非癌症胃黏膜比较有显著差异，提示胃癌组织中c-erbB-2蛋白高表达。

人类nm23基因有两个亚型，即nm23-H1和nm23-H2，定位于17号染色体。nm23基因是目前分离鉴定的一种肿瘤转移抑制基因，可定位于细胞质和质膜。在多种生物学过程均有此酶参与，包括细胞内和细胞间信号传递等。研究显示nm23蛋白在胃癌中与肿瘤的浸润有关，血管内癌栓的肿瘤组织有较强的免疫反应也支持这一观点〔6〕。本研究显示胃癌组织中nm23蛋白表达的ⅠOD与非癌症胃黏膜比较有显著差异，提示胃癌组织中nm23蛋白水平高表达。

研究发现，患者转移淋巴结中p53、c-erbB-2蛋白呈高表达，与原位癌组织比较有显著差异。可见c-erbB-2和p53在胃癌转移过程中表达增加。转移的淋巴结表达增强可能由于p53的突变失去了抑癌效果，损伤的DNA得不到修复，有利于其表达。通常p53突变及表达发生于早期胃癌，而c-erbB-2则发生于晚期胃癌。c-erbB-2蛋白在转移的淋巴结也呈高表达，提示c-erbB-2与胃癌转移关系更为密切，对胃癌的预后和鉴别诊断的评估有一定价值。nm23基因的突变和缺失与多种肿瘤的转移有关〔7〕。本研究显示转移淋巴结中nm23呈低表达，与原位癌组织比较有显著差异，反映出nm23基因在胃癌转移方面起重要作用。可能在转移的淋巴结中nm23中的核苷二磷酸激酶能够与G蛋白作用，通过细胞信号转导，调节细胞增殖和分化。如果nm23出现缺失，通过细胞去分化，可发生淋巴结转移。可见肿瘤的淋巴结转移起到一定的抑制作用。

总之，p53、c-erbB-2、nm23在胃癌组织和转移淋巴结中的检测对胃癌鉴别诊断和预后具有一定临床意义。通过几种基因检测与CT和超声内镜相结合，有希望提高胃癌临床分期的准确性，为合理选择治疗方案提供依据。

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4 黄 伟，刘惠敏.胃癌P53，P-糖蛋白的表达意义与肿瘤预后关系〔J〕.实用诊断与治疗杂志，2005;19(4):240-1.

5 陈永胜，关 丽，姚宪章，等.胃癌p53，c-erbB-2，p21，nm23基因表达的分布特点及其临床意义〔J〕.中国实验诊断学，2005;9(5):718-21.

6 卓丽娟，高美钦.C-erbB-2在胃癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系〔J〕.山西医科大学学报，2007;38(11):1021-3.

7 赵 茜，区穗芳，谢秀琴.p53及nm23在胃癌中的表达及其与淋巴结转移的关系〔J〕.中国热带医学，2007;7(5):689-90.