两种检测乙肝血清学标志物方法的临床对比

秦望森 (河南省人民医院检验科,河南 郑州 450000)

乙型肝炎病毒(HBV)血清学标记物(HBV-M)检查仍作为目前临床诊断、治疗和判断HBV感染者病程及传染性的重要指标之一。HBV-M的检测方法有很多种,临床常用的免疫检测方法主要有放射免疫法(RIA)、ELISA。随着科技的发展,一些新的检测技术不断被开发。时间分辨荧光免疫分析法(TRF IA)的研究在国内外广为重视,其在临床检验中的应用日益广泛,特别在免疫分析方面更显示优越性〔1〕。本文探讨 ELISA与TRFIA检测HBV-M的差异并对比分析其临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2007年 2月至2009年 12月本院住院或门诊疑为乙肝的患者,共 216例,其中男 148例,女 68例,年龄 18～58〔平均(30.1±12.1)〕岁。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器 上海新波生物技术有限公司 HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb和 HBcAb定量检测试剂盒;上海荣盛有限公司 ELISA试剂盒。Anytest 2000型时间分辨荧光免疫分析仪,ELx-800酶标仪。

1.2.2 检测方法 空腹抽取 5 ml静脉血,当日分离血清,分别进行定性和定量检测。TRFIA法测定前用试剂盒内配套乙型肝炎线性参比品制定标准曲线,并由Anytest 2003中文软件得出其各标准曲线皆符合工作要求;ELISA法设立阴阳性对照。然后,应用 TRFIA和 ELISA法分别对 216例样本进行HBV五项血清学标志物定量与定性检测,其操作和结果判读均严格按照说明书和作业指导书的规定进行。

1.3 结果判定 ELISA法:HBsAg、HBsAb、HBeAg均为样本OD值/阴性对照,平均 OD值≥2.1判断为阳性,否则为阴性。HBeAb为冠状病毒(COV)=(阴性对照平均OD值 +阳性对照平均 OD值)/2,样本 OD值≥COV为阳性,＜COV为阴性。HBcAb为 1∶30稀释血清,COV=阳性对照平均 OD值 ×0.5,标本≥COV为阴性,＜COV为阳性。TRFIA定量 HBsAg正常值0～0.5 ng/ml,HBeAg正常值 0～0.03 NCU/ml,HBeAb正常值0～1.5 NCU/ml,HBcAb正常值 0～0.1 NCU/ml,超过正常值视为阳性。

1.4 统计学分析 应用 SPSS13.0统计软件进行 χ2检验。

2 结 果

TRFIA法的HBeAb检测结果与ELISA法比较差异有统计学意义(P＜0.05),而其他单个 HBV-M检测项目比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表 1、表 2。

表1 TRFIA法和 ELISA法检测组合模式结果的比较(n)

表2 TRFIA法和 ELISA法检测组合模式结果的比较(n)

3 讨 论

乙肝是一种全球广泛流行的传染病,以 HBV感染数和HBsAg携带率估算,全世界HBsAg携带者有3.5亿人,其中亚、非、拉地区有 2.8亿,而中国根据流行病学调查,人群发生率较高,表面抗原携带率约为 15%〔2〕,占全世界 HBsAg携带者的1/3,占亚、非地区的 1/2。因此,筛查正常人群,对健康人群进行计划免疫,需要一种快速、准确、灵敏、简便的检测方法,过筛无偿献血人员、从业人员及婚检,并且临床上用于病程进展的评估及疗效评价等。传统的 ELISA方法对乙肝“两对半”血清标志物定性测定,只能判断其阴阳性,无法得知其真正的浓度,而HBV-M定量检测能较为准确地反映其血清中的含量,可以间接反映体内HBV复制活跃程度,对临床药物疗效评价具有重要意义。“两对半”定量检测结果的有效性在检测的过程中直接进行了标准量化质控,分高中低及三个定值质控品,“两对半”定性检测的室内质控;ELISA只能间接进行质控;分阴阳性质控品;免疫胶体金检测则不能进行严格的室内质控,从而保证检测结果的有效性和溯源性。

TRFIA技术是一种新型免疫标记技术〔3〕,其灵敏度高达10～18,线性范围宽(10～18 mol/L),高稳定性(＜±1%)。TRFIA是一种特殊的荧光分析方法,以镧系元素为标记物,又称“解离-镧系荧光免疫分析”。在传统的异硫氰酸荧光素标记的荧光免疫分析中,其激发光波长和荧光光谱的 Stokes移位较小,仅 28 nm,由于激发光谱和发射光谱常有部分重叠,在测量时不可避免产生干扰。而用镧系元素标记抗原抗体的荧光免疫分析则利用了波长和时间两种分辨技术,因稀土离子本身激发光谱宽(300～500 nm)、荧光发射光谱窄(甚至不足 10nm),通过时间延迟,去除非特异荧光干扰,在固定时间检测特异荧光,解决了自然背景干扰问题,明显提高检测灵敏度,并通过激发光与发射光之间较大的Stokes移位,很容易对激发光和发射光进行波长分辨,明显排除了非特异荧光的干扰,提高了光谱的分辨率,使特异性明显增强。ELISA法是目前检验科常用的免疫学检测方法之一,虽操作简单,无须特殊设备,但测定中影响因素较多,常可见到一些假阳性或假阴性结果。

对临床来说,HBsAg、HBsAb和 HBeAb的定量更为重要。随着仪器和试剂的国产化,检验费用的降低,TRFIA因其突出的高敏感性、特异性,无放射污染等特点,是取代放免的方法之一〔4〕,在乙肝“两对半”定量检测中有广泛的应用前景。本文发现 TRFIA法的 HBeAb检测结果与ELISA法比较差异有统计学意义,而其他单个HBV-M检测项目比较差异均无统计学意义。另外,TRFIA法和 ELISA法两种检测方法在 HBsAg、HBe-Ab、HBcAb三种血清学标志物中,HBsAg、HBcAb两种血清学标志物组合模式阳性率比较差异有统计学意义。TRFIA检测HBV-M比 ELISA法敏感,可作为 HBV-M定量的一种常规方法,能为临床检测诊断与疗效监测、预后判断和科学试验以及乙型肝炎疫苗免疫力的评价和高危人群预防提供及时准确的实验信息。

1 郭淑英,潘利华,曲晓春,等 .固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂(I)中间体 1-4,4'-二溴-6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶的合成〔J〕.中国卫生检验杂志,2006;16(3):264-6.

2 陈慧英,张锦锋,岑小鹏,等 .ELISA检测乙型肝炎 HBsAg室内质控血清的试剂和使用〔J〕.上海医学检验杂志,2000;15(4):203-5.

3 黄宪章,石 文,庄俊华,等 .TRFIA与 ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物结果的比较〔J〕.现代检验医学杂志,2008;23(1):59-60.

4 雷秀霞,陈小辉,徐邦牢,等 .TRFIA、MEIA、ELISA法三种方法检测HBV-M结果分析〔J〕.中国医师杂志,2004;6(9):1252-3.