亓国锋
白术黄芪汤用于泻痢恢复期的治疗[1]。溃疡性结肠炎属中医泻痢等范畴,病程迁延时间较长[2]。本实验使用三硝基苯磺酸致小鼠溃疡性结肠炎模型,观察白术黄芪汤单药提取成分组方对溃疡性结肠炎小鼠的疗效,现将结果汇报如下。
1.1 动物 NIH雄性小鼠,SPF级,购自上海BK公司,月龄4~5周,体重大约25~30g。各组小鼠进行单笼饲养。
1.2 试剂及药物 菊科植物白术(Atractylodes, rocephala Koidz.)的根茎、豆科植物蒙古黄芪(Astragalus mongholicus Bge.)的根。白术黄芪汤按原方比例白术(体积比):药材与蒸馏水比例为1:8,黄芪:甘草=10:7:3,按此比例浸泡4h,煮沸后,用纱布过滤药液;第2次和第3次分别按照1:6和1:4的比例煮沸,纱布过滤,合并3次滤液。本实验按此比例将中药各成分加蒸馏水混匀研磨配成所需浓度。所用原材料中三硝基苯磺酸(TNBS),十六烷基三甲基溴化胺和邻联二茴香胺由Sigma公司提供。戊巴比妥钠和无水乙醇为国产分析纯。
1.3 仪器 紫外可见光分光光度计、D型水浴锅、电子分析天平、电热恒温真空干燥箱。
2.1 动物造模、分组及给药 40只雄性小鼠,禁食24h后,使用1%戊巴比妥钠(45mg/kg)进行腹腔注射麻醉。随机分为4组,为正常对照组、模型对照组、白术黄芪汤组、有效成分组。动物肛门注入TNBS药液(剂量为100mg/kg),倒立30秒使药液达全结肠,将动物放回原笼待其自然苏醒。其中,正常对照组首先注入等量的50%乙醇,造模24h后开始灌胃给药。正常对照组和模型对照组灌蒸馏水;白术黄芪汤组灌水煎剂(10g/kg),有效成分组灌提取物(0.4g/kg),每天一次,连续7天。
2.2 MPO活性检测:各组小鼠分别取100mg结肠组织并切碎,置入2mL十六烷基三甲基溴化胺(HTAB)缓冲液中,冰浴中匀浆3次,每次30 S,超声振荡10S,冻溶3次,4000 r/min离心15min,取上清液0.1mL,加入50mmol/L的PBS2.9mL中于460 nm处测吸光率A值,于3min后再次测定吸光率A值。该样品的MPO单位即两次A值差值除以3。
各组MPO活性比较。模型组小鼠MPO活性较正常组明显升高,白术黄芪汤组和有效成分组与模型组比较MPO活性明显降低(P<0.01),有效成分组效果略优。
注:**:与正常组相比,模型组MOP活性明显升高,P<0.01,有统计学意义。##:与模型组相比,MOP活性明显降低,P<0.01,有统计学意义。
溃疡性结肠炎以急性发作的患者为多见,病初邪实,湿热蕴结肠腑;病程较长,反复发作,形成虚实夹杂证,虚为脾虚血亏,实为湿热留恋,肠络瘀阻[3]。《景岳全书·泄泻》曰:“泄泻之本,无不由于脾胃……脾胃受伤,则水反为湿,谷反为滞,而泻痢作矣”。在中医学上,脾虚湿胜在发病及病变过程中有着至关重要的地位,因此,在溃疡性结肠炎特别是恢复期的治疗中,益气健脾利湿等治法自然是重中之重的治疗方法[4]。在泻痢治疗中,下列疗法充分体现了“泄泻之本,无不由脾胃”的中医理论:治疗湿热毒邪郁蒸肠道而致的下痢,泻痢去除后服白术黄芪汤健脾利湿,益气补中[5]。
本实验中,TNBS所致的小鼠溃疡性结肠炎模型组小鼠MPO活性较正常组明显升高。与模型组相比,白术黄芪汤组和有效成分组MPO活性明显降低(P<0.01),而有效成分组效果略优。从药材提取有效组分是中药现代研究的常用方法,但其中需要探讨的问题仍然很多,这是需要我们以后进一步学习的方向。
[1]李茹柳,迟莉,石忠峰.白术黄芪汤及其单药提取成分组方对溃疡性结肠炎的治疗作用[J].2007,21(3):223-228.
[2]孙洪凤,李云峰.中药氧灌肠治疗溃疡性结肠炎[J].当代医学,2010,16(25):146-147.
[3]陈江.溃疡性结肠炎中医病机演变特点探析[J].辽宁中医学院学报,2005,7(3):197.
[4]石忠峰,陈慰文,李茹柳,等.白术黄芪汤及其有效成分组方对小鼠溃疡性结肠炎的疗效观察[J].中药新药与临床药理,2007,18(2):87-89.
[5]Shi ZF, Chen WW, Li WM, Gao Y.Purification on total astragalosides by macroporous adsorptive resin[J].Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2005, 36(9): 1322-1325.