高效液相色谱法测定前列舒丸中马钱苷含量

(吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132001)

前列舒丸由熟地黄、薏苡仁、冬瓜子、山茱萸、山药、牡丹皮、苍术、桃仁、泽泻、茯苓、桂枝、附子、韭菜子、淫羊藿、甘草15味中药组方，具有扶正固本、益肾利尿的功效，临床用于肾虚所致的淋证，症见尿频、尿急、排尿滴沥不尽，以及慢性前列腺炎及前列腺增生症见上述症状者[1]。方中山茱萸为主药，马钱苷为其主要有效成分之一，原质量标准中无山茱萸的含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量，笔者采用高效液相色谱法测定了前列舒丸中马钱苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－2010A型高效液相色谱仪，Class－VP色谱工作站。马钱苷对照品(批号为111640－200503，中国药品生物制品检定所，供含量测定用);前列舒丸(威海人生药业集团股份有限公司，批号为20080612，20081024，20090415);乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:四氢呋喃－乙腈 －甲醇－0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87);检测波长:236 nm;流速:0.8 mL/min;柱温:40 ℃;进样量:10 μL;理论板数按马钱苷峰计应不低于4 000。

2.2 溶液制备

取经五氧化二磷减压干燥12 h以上的马钱苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成0.5 g/L的对照品贮备液;再精密量取对照品贮备液适量，加50%甲醇制成20 μg/mL的对照品溶液。取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约2 g，精密称定，加适量硅藻土研匀，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)15 min使溶散，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀滤过;精密量取续滤液 10 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，4 g，内径 1 cm，干法装柱)上，用40%甲醇50 mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液[2]。取除山茱萸以外的处方中其余药材，依法制成丸，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:精密吸取供试品溶液、阴性对照品溶液和对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。可见，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间(马钱苷17.691 min)的色谱峰，阴性试验无干扰，证明方法可行。

线性关系考察:精密吸取马钱苷对照品贮备液(质量浓度为0.5 g/L)适量，置50 mL量瓶中，加甲醇定容，配成质量浓度分别为 5，10，20，40，80 μg/mL 的溶液 5 份，摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、质量浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=－487.96+44 926.66 C，r=0.999 9(n=5)。结果表明，马钱苷质量浓度在5～80 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:精密吸取马钱苷对照品溶液(20 μg/mL)10 μL，在拟订的色谱条件下重复进样5次。结果峰面积的 RSD为0.9%(n=5)，表明仪器精密度较好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，在 0，6，12，18，24 h 时进样测定。结果的 RSD为0.7%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取样品(批号为20090415)5份，按供试品溶液制备方法制备溶液并进样测定。结果含量的 RSD为1.2%(n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20090415，马钱苷含量 0.28 mg/g，平均丸重 9.012 5 g)适量，共6份，分别精密加入低、中、高3种不同质量浓度的马钱苷对照品适量，照供试品溶液制备方法操作，得回收率试验溶液，依法测定。结果见表1。

表1 马钱苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定3批样品中马钱苷峰面积，按外标法计算含量。结果批号为20080612，20081024，20090415的样品中马钱苷平均含量分别为 2.51，2.50，2.52 mg/丸(n=5)。

3 讨论

根据3批样品含量测定结果，最高含量为2.52 mg/丸，最低含量为2.50 mg/丸。综合考虑，建议该制剂中山茱萸的含量以马钱苷计应不低于2.00 mg/丸。

对供试品、对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，结果两者在236 nm波长处有较强吸收，而阴性无干扰，故选择检测波长为236 nm。

所建立的方法结果准确、方法简便，重复性及回收率均理想，故可以作为该制剂的质量控制方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:545，401－402.