针刺上巨虚穴对肠易激综合征大鼠血清一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的影响※

王 威 吕恩基 张 燕 赵金茹

(辽宁中医药大学针灸推拿学院针灸临床教研室，辽宁 沈阳 110032)

肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)是临床上一种常见病，是以慢性或反复出现的腹痛并伴有腹泻、排便习惯和大便性状异常为主要症状而又缺乏胃肠道结构和生化异常的综合征［1-2］，属于一种慢性内脏痛敏。IBS的局部肠道虽然没有明显器质性病变，但研究表明IBS患者对阈下肠道刺激感觉过敏，这也是形成慢性内脏痛敏的基础［3］。文献报道表明，针刺上巨虚穴治疗IBS可获得较好疗效［4］。本研究通过动物实验探讨针刺上巨虚穴对IBS大鼠血清一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响及其可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级雄性 SD大鼠30只，体质量(110±30)g，3周龄，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号:SCXK(京)-2008-0004。每10只大鼠饲养在1个塑料笼内，自由饮食，饲养于12 h光照和12 h黑暗的环境中，在空调恒温室内，室温维持在18～24℃，湿度控制在50% ～70%。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 将30只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和电针组，每组10只。

1.2.2 模型制备 参照用Al-Chaer ED内脏敏感动物模型［1］为基础，稍改进。模型对照组和电针组使用自制的刺激球囊［5-6］，蘸少许医用石蜡油，自大鼠肛门轻柔插入4～5 cm。每次气囊打气，维持肠道压力 7.98 kPa(60 mm Hg)，保留1 min，然后撤气。每次刺激之前，检查球囊的密闭性。给予扩张刺激前，可预先刺激大鼠肛门部，使其排尽大便，以减少粪团对扩张程度的影响。每日操作1次，共持续刺激15 d。

1.2.3 治疗方法 电针组治疗时取大鼠双侧上巨虚穴，使用华佗牌28号、25 mm毫针，通过G6805-1A型电针治疗仪(上海华谊医用仪器厂)，采用疏密波，密波100 Hz/3 s，疏波4 Hz/3 s交替，刺激强度1～3 mA，以大鼠后肢轻轻抖动但不产生嘶叫为度，持续20 min。隔日针刺1次，持续10 d。空白对照组和模型对照组每日陪同电针组抓取、固定，不做任何治疗。

1.3 检测指标及方法

1.3.1 标本采集 将大鼠麻醉后，先用剪刀沿耻骨联合上缘横向剪开，再沿腹白线向上剪开至剑突处使其翻开，进而暴露整个腹腔，把大小肠推出腹腔，放于大鼠左侧，充分暴露大鼠的腹腔右侧，用干棉球擦试，于腹主动脉抽取5 mL血液放入离心管中静置2～3 h，待血凝后以3 500 r/min离心10 min，分离血清500 μL，放入EP管中，置于-80℃冰箱贮藏备用。空白对照组、模型对照组在模型制备结束后进行血液采集，电针组从造模完成后隔日针刺1次，10 d后进行血液采集。

1.3.2 检测指标及试剂盒 采用分光光度计比色法检测NO含量和NOS活性。NO、NOS试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供，严格按照试剂盒说明的操作程序测定大鼠血清NO含量和NOS活性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件包进行统计学分析，数据均以均数±标准差()表示，组间计量资料采用单因素方差分析。

2 结果

各组大鼠血清NO含量、NOS活性比较见表1。

表1 各组大鼠血清NO含量、NOS活性比较pmol/L，

表1 各组大鼠血清NO含量、NOS活性比较pmol/L，

与空白对照组比较，*P ＜0.01;与模型对照组比较，△P ＜0.05

组 别 n NO NOS空白对照组10 57.81 ±10.31 25.82 ±9.71模型对照组 10 91.19 ±9.11* 51.85 ±10.01*电针组 10 64.12±12.01△ 29.22 ±8.38△

由表1可见，模型对照组血清NO、NOS水平均较空白对照组显著升高(P ＜0.01)，电针组血清 NO、NOS水平均较模型对照组有不同程度降低(P＜0.05)。

3 讨论

上巨虚穴属足阳明胃经，是手阳明大肠经的下合穴。根据“合治内腑”的理论，大量的文献和临床研究表明，上巨虚穴具有清热利湿、调理肠腑的功能。IBS是肠道功能紊乱的功能性疾病，病因及发病机制尚未清楚，但与胃肠激素关系密切。Al-Chaer ED等［1］开发的模拟慢性内脏痛动物模型中，痛觉过敏伴随着动力紊乱，类似于IBS患者的动力失调。

NOS广泛分布于消化道，存在3种同工酶，其主要功能是催化L-精氨酸生成NO。NO是非肾上腺素能非胆碱能(NANC)抑制性神经递质，可介导平滑肌松弛，在胃肠道蠕动反射中产生下行性抑制作用，对胃肠黏膜具有保护和损伤双重效应，也对胃肠运动和内脏感觉起重要调节作用［5-7］。实验证实［8］，NO 在生理剂量水平对消化系统起重要的保护作用，合成的NO过少可松弛肠道平滑肌，NO产生过多则可使胃肠道平滑肌对其敏感性增强。因此，NOS活性提高，可导致NO合成增加，引起肠运动加快、内脏感觉敏感性增加，从而出现IBS的一系列症状。

本研究发现，与空白对照组比较，模型对照组NO和NOS含量均明显升高(P ＜0.01)，表明IBS大鼠模型血清NOS和NO含量可能与IBS内脏致敏有关。与模型对照组比较，电针组NO和NOS含量均有下降趋势(P＜0.05)，同时也说明了电针上巨虚穴对慢性内脏痛敏IBS大鼠模型的改善作用机制可能与调节血NO和NOS水平有关。因此，降低IBS模型血清NO和NOS的水平可能是针刺调节IBS胃肠运动，进而改善慢性内脏痛敏症状的机制之一。

［1］Al-Chaer ED，Kawasaki M，Pasricha PJ.A new model of chronic visceral hypersensitivity in adult rats induced by colon irritation during postnatal development［J］.Gastroenterology，2000，119(5):1276-1285.

［2］许国铭.现代消化病学［M］.北京:人民军医出版社，1999:860-862.

［3］高峻.肠易激综合征的病因研究进展［J］.国外医学:消化系疾病分册，2002，22(2):87-89.

［4］王威，白丽，高志雄，等.针刺天枢、上巨虚穴治疗腹泻型肠易激综合征的临床观察［J］.中国误诊学杂志，2008，8(26):6335-6336.

［5］高志雄，王威，吕恩基，等.电针上巨虚对内脏痛敏大鼠5-HT与AWR 评分的影响［J］.山西中医，2010，26(4):53-55.

［6］Stark ME，Szurszewski JH.Role of nitric oxide in gastrointestinal and hepatic function and disease［J］.Gastroenterology，1992，103(6):1928-1949.

［7］Hokari R，Kato S，Matsuzaki K，et al.Reduced sensitivity of inducible nitric oxide synthase-deficient mice to chronic colitis［J］.Free Radic Biol Med，2001，31(2):153-163.

［8］Konturek SK，Konturek PC.Role of nitric oxide in the digestive system［J］.Digestion，1995，56(1):1-13.