薄层色谱法鉴别冠脉宁颗粒的研究

徐晓弘，熊 鑫

大庆油田总医院药学部，黑龙江大庆 163001

冠脉宁颗粒由丹参、葛根、血竭、冰片等14味药材组合而成，具有活血化瘀，行气止痛。用于以胸部刺痛、固定不移、心悸不宁、入夜更甚、舌质紫暗，脉沉弦为主症的冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不足[1]。冠脉宁片处方收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》。本次实验依据相关文献并结合复方中主药的特点，用薄层色谱法对丹参、葛根、当归、红花进行定性鉴别，从而更好地对“冠脉宁颗粒”进行质量控制。

1 试剂与试药

1.1 试药

丹参、葛根、当归、红花（长春宏检药材公司），对照品：人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1、木犀草素（中国药品生物制品检定所）。

1.2 试剂

正丁醇、甲醇、磷酸、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、乙醚。

2 实验方法与结果

2.1 性状

本品呈颗粒状，棕褐色；气香，味微苦。

2.2 鉴定分析

薄层色谱法鉴别参照《中国药典》（2005年版）一部项下薄层鉴别方法，并结合相关的文献对丹参、当归、红花、葛根进行薄层鉴别，再对鉴别结果进行定性分析。

2.2.1 薄层鉴别丹参 取本品5 g，研成细粉。加三氯甲烷50 ml，加热回流1.5 h，滤过后药渣备用，滤液蒸干，残渣加乙醇3 ml使溶解、滤过，滤液作为供试品溶液。丹参在处方中为主药，其有效成分丹参酮ⅡA含量直接影响药效的发挥[2]。所以另取丹参酮ⅡA作为对照品，加入乙醇制成每1 ml含0.5 mg的丹参酮ⅡA对照品溶液。按照《中国药典》（2005年版）一部附录ⅥB薄层色谱法中薄层色谱法进行试验，然后分别吸取4μl上述两种溶液，在同一硅胶G薄层板上分别点样，其中硅胶板的黏合剂是羧甲基纤维素钠，展开剂为苯-乙酸乙酯，配制比例为19∶1，展开，晾干。结果显示：在供试品色谱中，在与对照品色谱斑点相应的位置上，显相同的暗红色斑点。

2.2.2 薄层鉴别红花 红花具有活血通经、祛瘀止痛等功效,其药理作用主要表现为抗凝血、抗血栓[3]，研究结果亦有表明红花具抑制炎症反应的作用。取本样品3 g，加入80%的丙酮25 ml后，进行30 min的超声提取，滤过，滤液作为试验的供试品溶液并浓缩至5 ml。再取3 g红花对照药材细粉，同样以80%的丙酮溶解并超声30 min，所得滤液作为对照溶液。不含红花药材的阴性对照液也按处方的比例制得。按照《中国药典》（2005年版）一部附录ⅥB中薄层色谱法进行试验，吸取对照药材溶液、阴性对照液和三批供试品溶液各5μl，再统一用醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇按 7∶2∶2∶0.4 的比例为展开剂的硅胶H薄层板上分别点样，展开薄层板，晾干。结果：供试品色谱中，与对照品色谱相同位置上，显出的斑点颜色是相同的，无阴性干扰。

2.2.3 薄层鉴别当归 当归主要成分含挥发油和水溶性物质两大类。挥发油中以藁本内酯和正丁烯酉夫内酯为主要成分[4]。取本品内容物约4 g，研细后，加入石油醚（60~90℃）30 ml，经过40 min的超声处理后，滤过并蒸干滤液，用3 ml的无水乙醇将残渣溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的配制则另取5 g当归对照药材，相同于供试品溶液的方法配制完成。按照《中国药典》（2005年版）一部附录ⅥB中薄层色谱法试验方法，对上述两种溶液各吸取5μl，在同一硅胶G薄层板上点样，展开剂以9∶1比例配制的正己烷-醋酸乙酯溶液，展开薄层板，晾干。结果：在365 nm的紫外灯下检视，相应于对照药材色谱的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点[5]。2.2.4葛根的薄层鉴别[6]取本品内容物5 g，加甲醇50 ml，超声提取45 min，滤过，蒸干滤液，用水25 ml加入将残渣溶解，滤过，用乙酸乙酯提取，每次20 ml，共提取5次。合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠吸去多余水分，滤过，蒸干乙酸乙酯，残渣加甲醇1 ml使溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。对照品溶液配制则用甲醇溶解葛根素对照品，制成每1 mg/ml的溶液。另取除葛根外的的阴性样品粉5 g与等量的基质混合进行均匀，同法制得了阴性供试品溶液。分别吸取4μl上述对照品溶液、样品及阴性溶液，再统一以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水按3∶3∶4∶0.8的比例为展开剂的硅胶G薄层板上分别点样，展开薄层板，取出，晾干，置365 nm的紫外线灯下检视，相同于对照品色谱位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点。

3 讨论

活血通络片由丹参、没药（炒）、血竭、鸡血藤、延胡索（醋制）、郁金、当归、制何首乌、桃仁（炒）等14味药组成。以丹参为君药，内可以化脏腑之瘀滞，外可通经而宣导气机。臣药鸡血藤补血活血，疏通经络；延胡索、红花活血化瘀，行气止痛，血竭祛瘀定痛。佐用当归、何首乌和黄精补血生精，养心安神，体现标本兼具之用[7]。本次试验采用薄层色谱法（TLC）对本制剂中的四味药材丹参、当归、葛根、红花进行鉴别研究，对照实验均以四味药材各自的药材中相应有效成分及阴性对照品进行试验。经过多次鉴别实验后，四种药材实验测得的斑点均清晰可见，具有良好的重现性，且阴性无干扰。综上，用薄层色谱法鉴别冠脉宁颗粒的实验具有操作简单、稳定、重现性及专属性都很强的特点，可作为此类中药制剂质量控制的定性依据，为今后标准的进一步修订提供了依据。

[1]张雪慧.HPLC法测定冠脉宁颗粒中丹参素钠的含量[J].现代中医药,2008,28(1):60-61.

[2]贾艳宁,吴丽红,张庆.复方丹参片中丹参提取工艺研究[J].黑龙江医药,2004,17(5):365-366.

[3]徐如英,童树洪.红花的化学成分及药理作用研究进展[J].综述报告,2010,19(20):86-87.

[4]杜天玺,郭延生,华永丽,等.当归炭饮片质量标准研究[J].时珍国医国药,2010,21(9):2156-2158.

[5]中华人民共和国药典委员会.《中华人民共和国药典》[S].北京:化学工业出版社,2005:103,109.

[6]刘红霞,孙志坡,梁军.冠脉宁软胶囊薄层色谱鉴别研究[J].方药纵横,2007,34(3):343-344.

[7]刘万利.冠脉宁片治疗心血瘀阻型胸痹疗效观察[J].中国现代药物应用,2009,3(18):95-96.