GPR30在乳腺癌内分泌治疗耐受中的作用研究

朱克鹏 综述 杨光伦 涂刚 审校

重庆医科大学附属第一医院普外科，重庆 400016

内分泌治疗是乳腺癌患者综 合治疗的重要组成部分，他莫昔芬(tam oxifen，TAM)属于选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator，SE RM)类药物，是目前最基础、有效，且运用历史最悠久的一线内分泌治疗药物，但一旦发生耐药，TAM反而会促进肿瘤的生长。所以长期应用TAM的继发性耐药限制了其临床应用。因此，研究内分泌治疗的耐药机制，同时寻找克服治疗耐药的方法，进而开发相关抗耐药药物有着重要的临床意义。

G蛋白偶联受体-30(G protein-coupled receptor 30，GPR30)是一种新型具有独立作用的膜性结合性雌激素受体(estrogen receptor，ER)，介导表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)和ER等重要信号转导通路，参与乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移等行为。GPR30的激活可能导致了TAM耐药性的发生。本文从GPR30的作用机制和TAM的耐药性机制联系为出发点，探讨GPR30在TAM耐药性中的作用。

1 GPR30及其与EGFR、ERα的关系

1.1 GPR30的发现、功能及亚细胞定位

经典理论认为，雌激素通过细胞内两种核受体ERα、ERβ调控转录反应，但二者并不足以完成雌激素的全部作用。GPR30为一类由375个氨基酸残基组成的7 次跨膜的G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor，GPCR)，1997年Carmeci等［1］在不同细胞中克隆得到GPR30。2005年，Thomas等［2］和Revankar等［3］均证实其可特异性地与雌激素结合，与17β-estradiol(E2)的结合模式与经典的ERα、ERβ均不同，且与二者没有同源性，因此被视为一种具有独立作用的新型ER。

GPR30与雌激素结合导致细胞内钙转移，cAMP增加，在细胞核内合成三磷酸磷脂酰肌醇［phosphatidylinositol(3,4,5)-trisphosphate］。其参与介导了雌激素快速非基因组效应及基因组转录反应，促进细胞增殖和组织生长。GPR30可能参与抑制ERα(+)乳腺癌增殖［4］、SERM的耐药过程［5］，并参与一些恶性肿瘤的发生、发展、迁徙及转移等。

GPR30的亚细胞定位存在争议［6］。Thomas等［2］及Filardo等［7］认为GPR30在细胞膜上结合配体发挥相关病理生理作用。近来研究证实GPR30亦可能定位于细胞内，Gβ、Gγ亚单位合成后定向转运至内质网，在内质网内与Gα亚单位结合形成GPR30，在适当的条件下，胞内GPR30可能向细胞表面易位。研究者在共聚焦荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白(GFP)标记的GPR30主要聚集在乳腺癌细胞的内质网中，同时发现，荧光标记的雌二醇(E2-Alexa 546和E2-Alexa 633)同GPR30-GFP共定位于内质网和高尔基体中，细胞膜外未发现结合位点［3，8］。Funakoshi等［9］研究发现，GPR30位于HeLa细胞及海马CA2锥体细胞的细胞膜，但在雌激素的作用下可以“转位”到细胞质。Cheng等［10］发现GPR30聚集于细胞核周围。Madeo等［11］发现GPR30定位于细胞核内，介导E2诱导乳腺癌相关蛋白(CAF)的增殖和转移。因此，目前多数学者认为GPR30是一种膜性结合性ER，然而较难定位GPR30位置及功能，因为其受细胞类型、细胞内外因素影响［6］。

1.2 GPR30的生理与病理作用

E2、G-1、4-羟他莫昔芬(4-hydroxtamoxifen，OHT)及环境雌激素等配体与GPR30结合后可转活EGFR、上调cAMP和Ca2+，激活相应信号转导途径，最终在各雌激素敏感器官产生细胞增殖等相关反应。Filardo等［12］通过免疫组织化学法检测321例原发性乳腺癌患者的ER、PR和GPER，发现GPR30与ER共同表达的比例为43%，同时发现GPR30过表达与Her-2过表达、肿瘤大小及远处转移相关，提示其是乳腺癌生物学进展的指标之一。但Kuo等［13］在118例乳腺浸润性导管癌中发现GPR30 mRNA的表达与Her-2并无相关性。且无论在基因或蛋白水平，GPR30的表达与患者的年龄及肿瘤的大小、分级、分期、淋巴结转移及淋巴血管侵袭均无相关性，证实其不是影响患者生存率的一个独立因子。Arias-Pulido等［14］在炎性乳腺癌中发现GPR30的表达率为69%，而GPR30与ER的表达呈负相关，与PR、Her-2及EGFR的表达无相关性。GPR30与患者总生存率(overall survival，OS)或无病生存率(disease free survival，DFS)无关，然而GPR30、ER共表达可提高OS并轻微提高DFS，二者均不表达的患者OS和DFS较差,这与之前的结果相反［15-16］。Pandey等［17］研究发现GPR30结合E2、OHT可以使CTGF表达上调，促进乳腺癌细胞增殖和转移。E2、OHT还可通过GPR30刺激甲状腺、卵巢癌及子宫内膜癌细胞增殖［18-20］。Quinn等［21］证实E2与氟为司琼(ICI182780)均可通过GPR30，在整合蛋白(integrin)、Shc、Src样激酶和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)参与下，增强纤维连接蛋白基质组装形成原纤维，促进细胞黏附、播撒和生存，提示ER拮抗剂可能通过GPR30促进肿瘤生长和浸润。近来发现GPR30参与镉诱导乳腺癌细胞增殖，揭示镉与GPR30的结合位点及信号级联过程中相关事件的研究正在进行中［22］。

1.3 GPR30与EGFR及ERα的关系

GPR30是独立于ERα、ERβ的新型雌激素膜性受体，可通过反式激活EGFR，介导E2增殖效应，参与乳腺癌细胞侵袭、转移行为［23］，并且TAM及代谢产物OHT是其激动剂，因此可能在TAM耐药中发挥重要作用。大量研究认为GPR30的生物学效应与EGFR、MAPK/ERK、PI3K/AKT、cAMP等信号传导途径关系密切［6，23-27］，有着密切的互动联系(cross-talk)或存在正反馈回路。Prossnitz等［24-25］证实，E2、OHT等配体与GPR30结合，使G蛋白异三聚体解体，Gβ、Gγ通过百日咳毒素敏感途径激活Src磷酸化，后者激活细胞膜表面的MMP，导致肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的释放，HB-EGF作为EGFR的配体与EGFR结合，激活其下游信号通路，包括促分裂活化因子磷酸化蛋白激酶(MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、PI3K，增加c-fos等转录调节因子的表达，促进细胞增殖和延长细胞周期进展。Filardo等［26］研究发现在表达GPR30的乳腺癌MCF-7细胞系中雌激素可以级联激活MAPK/ERK途径。而在不表达GPR30的乳腺癌MDA-MB231细胞系则不能激活该途径，但MDA-MB231细胞系经转染GPR30 后可恢复该途径激活，从而证实了GPR30介导MAPK/ERK信号途径的重要性。Albanito等［27］在SKBR3乳腺癌细胞中证实EGF活化EGFR信号上调GPR30的表达，EGF激发了一个GPR30介导参与的正反馈环形通路，介导E2增殖效应，增强了EGFR信号作用。

在多种癌组织、胰腺、骨、睾丸及血管内皮等组织细胞中，GPR30和ER有协同作用［28］。Albanito等［20］在ERα(+)BG-1卵巢癌细胞研究中发现，E2或G-1诱导c-fos表达，激发GPR30、ERα表达，活化ERK。抑制EGFR转导途径可抑制上述通路，提示GPR30/EGFR信号依赖ERα表达程度。认为GPR30和ERα运用同一条EGFR信号途径，参与E2、G-1共同刺激卵巢癌细胞增殖生长。Huang等［29］用免疫组化证实在子宫癌肉瘤中，GPR30和ERβ协同过表达，在进展期疾病中二者表达水平增高。GPR30和ERβ表达与ERα及PR无相关性。Sirianni等［30］证实在鼠GC-1精原细胞中，E2、G-1均可激活ERK，上调c-fos的表达，促进细胞增殖，而ERα拮抗剂ICI、EGFR抑制剂、ERK抑制剂以及GPR30基因沉默都可消除相关效应，说明ERα、GPR30之间存在“交谈”，通过EGFR/ERK/c-fos途径介导上述反应。Gao等［31］发现GPR30抑制ERK1/2和ERα磷酸化信号，拮抗雌激素依赖性子宫的发育。

2 TAM的药理作用机制及相关耐药机制

2.1 TAM的药理作用机制

TAM为非甾体类抗雌激素药物，结构与雌激素相似，存在Z型和E型两个异构体。TAM进入细胞内，与ER竞争性结合，形成受体复合物，引起ER构象改变，阻止雌激素活性的发挥，从而抑制乳腺癌细胞的增殖。

然而，对TAM敏感的ER阳性患者在用药过程中仍有1/3发生TAM耐药。研究发现ER与Her-2信号通路之间的“交谈”是TAM耐药的一个重要原因［32］，但这并不能完全解释TAM的耐药性机制，近年来发现GPR30可能是引起TAM耐药的另一始动因素。GPR30在TAM耐药中的作用是当前研究热点之一。

2.2 TAM的相关耐药机制

对于不同的基因和细胞环境，TAM起着部分激动剂/拮抗剂或完全激动剂作用。TAM治疗的乳腺癌细胞产生耐药，实际是促进癌细胞的增殖。目前乳腺癌细胞在TAM治疗过程中发生耐药的生物学机制并不完全清楚，Riggins等［33］认为TAM的先天和获得性耐药与多种机制相关，主要包括：⑴与ERα的表达、下调，ERα突变，ER磷酸化有关；⑵与EGFR/ Her-2、ERK1/2、PI3K/AKT、IGF-1R等信号通路的活化有关；⑶与Cas、c-Scr、BCAR3等分子过表达有关。

相关研究证实，EGFR和(或)Her-2过表达，活化MAPK通路参与促进TAM耐药性的产生［37］。ER与各生长因子信号通路之间的“交谈”是TAM产生耐药的另一个重要原因［35］。多种机制可下调ER途径的各种成分，调节细胞周期，促进肿瘤增殖、分化，其中最重要的是EGFR/Her-2途径［36］。Her-2在乳腺癌中的耐药是通过激活显性负抑制酪氨酸激酶(Akt)或MAPK完成的，这些激酶可以使ER磷酸化，Her-2与ER间的这种相互作用，可能导致乳腺癌细胞对TAM产生耐药。Leary等［37］研究证实在内分泌治疗获得耐药的细胞模型中Her-2表达上调，而Her-2抑制剂拉帕替尼(lapatinib)可恢复内分泌系统的敏感性，在经TAM处理的ERα活性降低的细胞模型中，拉帕替尼可恢复ERα的基因活性功能，提高TAM疗效，这种效应取决于ERα/Her-2的“交谈”特点，提示ERα/Her-2可能在乳腺癌患者TAM耐药中起重要作用。Creighton等［38］通过建立乳腺癌(MCF-7)体内模型，揭示在TAM耐药乳腺癌中，通过ER突变或生长因子信号途径，一定程度上再活化雌激素信号途径产生耐药。上述细胞系活化EGFR及Her-2信号途径产生耐药。当运用Her-2抑制剂吉非替尼(gefitinib)和氟为司琼时，发生TAM耐药时间明显推迟。TAM和吉非替尼可阻止Her-2途径，恢复TAM的抗肿瘤效应。这提示EGFR/Her-2和ER信号通路在ER阳性乳腺癌患者TAM耐药中起重要作用。

3 GPR30在TAM中的耐药性机制

随着对乳腺癌内分泌治疗研究的愈加深入，发现约30%的ER和PR阳性的患者对TAM治疗不敏感或无效，这意味着阻断ER相关信号通路并不能完全抑制癌细胞生长。E2、TAM及代谢产物OHT和ICI182780均能激活GPR30，OHT对ICI182780、ERα是完全或不完全的拮抗剂，而对GPR30则是激动剂，能促进GPR30反式激活EGFR信号途径，从而导致上述药物耐药性的产生。

Ignatov等［39］第一次证实了GPR30在TAM-R乳腺癌细胞中的耐药性机制。用TAM长期处理MCF-7细胞增强其对E2的敏感性，上调GPR30表达，使GPR30从内质网移位至细胞表面，此时TAM被转变成促生长激动剂。GPR30活化c-Src、MMPs，继而激活EGFR信号，下游的MAPK和AKT磷酸化促进包括ER在内的多种基因的转录和细胞增殖。而磷酸化的ER进一步上调GPR30，从而建立一个恶性循环周期，导致TAM耐药性的产生。GPR30上调可增加TAM-R细胞对G-1的敏感性，并促进耐药性的发展。经G-1处理的MCF-7细胞，TAM增强MAPK磷酸化，当敲除GPR30，抑制EGFR信号时，可恢复TAM的生物效应。证实了GPR30 /MAPK信号串联在体外TAM耐药性形成中的重要作用。Mojarrad等［40］通过建立的细胞模型证实，自分泌人类生长激素(human growth hormone，HGH)上调GPR30的表达，增加细胞增殖，降低细胞凋亡，进而导致细胞TAM耐药。Vivacqua等［41］揭示在TAM耐药细胞中，EGF和TGFα活化EGFR/ERK信号通路，反式激活GPR30，上调mRNA、蛋白的表达。诱使c-fos结合活化蛋白1(activating protein 1，AP-1)位点，调节基因转录活性，参与细胞增殖、分化、侵袭和生存。GPR30与EGFR、ERα之间存在着丰富的互动联系，导致TAM耐药性的产生，最重要的是TAM能结合并活化GPR30。Kleuser等［42］认为E2和ICI182780均可通过GPR30抑制转化生长因子(TGF)β信号通路，导致乳腺癌患者内分泌治疗耐药。Ignatov等［43］比较了95例接受TAM或其他辅助治疗的乳腺癌患者子宫内膜组织中GPR30的表达类型发现，在体外TAM通过GPR30刺激MAPK磷酸化和子宫内膜细胞系的细胞增殖，在体内GPR30表达水平与TAM诱导子宫内膜病理相关，而且GPR30可预测疾病的早期发展症状并诱导TAM治疗，从而证实GPR30在TAM诱导子宫内膜癌的发生、发展过程中起重要作用。Albanito等［20］认为GPR30与ERα在内分泌治疗耐药和雌激素敏感性肿瘤的发展过程中，运用同一条EGFR信号通路。国内外一些相关的耐药性机制研究也正在实验当中，相信随着细胞和分子生物学技术的发展会更加全面的揭示GPR30在TAM耐药性中的发生机制，作为新的靶向目标为开发预防和治疗抗肿瘤药物提供机遇［44-45］。

4 小结

尽管人类GPR30与鼠GPR30约有87%相似性，在功能和病理学上仍存在13%差异，GPR30具体是否是雌激素受体，体内作用如何，能否结合雌二醇及其亚细胞定位均存在争议。

我们认为利用G-1［46］、G-15［47］、E3［48］能进一步揭示体内GPR30机制、细胞和生理及生物学功能等，开启针对 GPR30相关疾病的诊断和治疗。E2、OHT和ICI18278做为GPR30激动剂，对GPR30活化信号通路和诱使TAM产生耐药的机制的深入研究，将为开发拮抗GPR30和经典ER途径的药物提供新的平台。

［1］ CARMECI C, THOMPSON D A, RING H Z, et al.Identification of a gene (GPR30) with homology to the G-protein-coupled receptor superfamily associated with estrogen receptor expression in breast cancer［J］. Genomics,1997, 45(3): 607-617.

［2］ THOMAS P, PANG Y, FILARDO E J, et al. Identity of an estrogen membrane receptor coupled to a G protein in human breast cancer cells［J］. Endocrinology, 2005, 146: 624-632.

［3］ REVANKAR C M, CIMINO D F, SKLAR L A, et al. A transmembrane intracellular estrogen receptor mediates rapid cell signaling［J］. Science, 2005, 307: 1625-1630.

［4］ ARIAZI E A, BRAILOIU E, YERRUM S, et al. The G protein-coupled receptor GPR30 inhibits proliferation of estrogen receptor-positive breast cancer cells［J］. Cancer Res, 2010, 70(3): 1184-1194.

［5］ CRAIG JORDAN V, LEWIS-WAMBI J, KIM H, et al.Exploiting the apoptotic actions of oestrogen to reverse antihormonal drug resistance in oestrogen receptor positive breast cancer patients［J］. Breast, 2007, 16(Suppl 2): 105-113.

［6］ MAGGIOLINI M, PICARD D. The unfolding stories of GPR30,a new membrane-bound estrogen receptor［J］. J Endocrinol,2010, 204(2): 105-114.

［7］ FILARDO E，QUINN J, PANG Y, et a1. Activation of the novel estrogen receptor，GPR30，at the plasma membrane［J］. Endocrinology, 2007, 148(7): 3236-3245.

［8］ REVANKAR C M, MITCHELL H D, FIELD A S, et al.Synthetic estrogen derivatives demonstrate the functionality of intracellular GPR30［J］. ACS Chem Biol, 2007, 2(8): 536-544.

［9］ FUNAKOSHI T, YANAI A, SHINODA K, et al. G proteincoupled receptor 30 is an estrogen receptor in the plasma membrane［J］. Biochem Biophys Res Commun, 2006,346(3): 904-910.

［10］ CHENG S B, Graeber C T, QUINN J A, et al. Retrograde transport of the transmembrane estrogen receptor, G-proteincoupled-receptor-30 (GPR30/GPER) from the plasma membrane towards the nucleus［J］. Steroids, 2011, doi:10.1016.

［11］ MADEO A, MAGGIOLINI M. Nuclear alternate estrogen receptor GPR30 mediates 17beta-estradiol-induced gene expression and migration in breast cancer-associated fibroblasts［J］. Cancer Res, 2010, 70(14): 6036-6046.

［12］ FILARDO E J, Graeber C T, Quinn J A, et al. Distribution of GPR30, a seven membrane-spanning estrogen receptor, in primary breast cancer and its association with clinicopathologic determinants of tumor progression［J］. Clin Cancer Res,2006, 12(21): 6359-6366.

［13］ KUO W H, CHANG L Y, LIU D L, et al. The interactions between GPR30 and the major biomarkers in infiltrating ductal carcinoma of the breast in an Asian population［J］. Taiwan J Obstet Gynecol, 2007, 46: 135-145.

［14］ ARIAS-PULIDO H, ROYCE M, GONG Y, et al. GPR30 and estrogen receptor expression: new insights into hormone dependence of inflammatory breast cancer［J］. Breast Cancer Res Treat, 2010, 123(1): 51-58.

［15］ SMITH H O, LESLIE K K, SINGH M, et al. GPR30: a novel indicator of poor survival for endometrial carcinoma［J］. Am J Obstet Gynecol, 2007, 196(4): 386.

［16］ SMITH H O, ARIAS-PULIDO H, KUO D Y, et al. GPR30 predicts poor survival for ovarian cancer［J］. Gynecol Oncol,2009, 114(3): 465-471.

［17］ PANDEY D P, LAPPANO R, ALBANITO L, et al. Estrogenic GPR30 signalling induces proliferation and migration of breast cancer cells through CTGF［J］. EMBO J, 2009, 28(5): 523-532.

［18］ VIVACQUA A, BONOFIGLIO D, ALBANITO L, et al.17b-estradiol genistein, and 4-hydroxytamxifen induce the proliferation of thyroid cancer cells through the G-protein coupled receptor GPR30［J］. Mol Pharmacol, 2006, 70:1414-1423.

［19］ VIVACQUA A, BONOFIGLIO D, RECCHIA A G, et al. The G protein-coupled receptor GPR30 mediates the proliferative effects induced by 17 beta-estradiol and hydroxytamoxifen in endometrial cancer cells［J］. Mol Endocrinol, 2006, 20(3):631-646.

［20］ ALBANITO L, MADEO A, LAPPANO R, et al. G proteincoupled receptor 30 (GPR30) mediates gene expression changes and growth response to 17beta-estradiol and selective GPR30 ligand G-1 in ovarian cancer cells［J］. Cancer Res,2007, 67(4): 1859-1866.

［21］ QUINN J A, GRAEBER C T, FRACKELTON A R, et al.Coordinate regulation of estrogen-mediated fibronectin matrix assembly and epidermal growth factor receptor transactivation by the G protein-coupled receptor, GPR30［J］. Mol Endocrinol, 2009, 23: 1052-1064.

［22］ YU X, Filardo E J, Shaikh Z A.The membrane estrogen receptor GPR30 mediates cadmium-induced proliferation of breast cancer cells［J］. Toxicol Appl Pharmacol, 2010,245(1): 83-90.

［23］ FILARDO E J, QUINN J A, SABO E. Association of the membrane estrogen receptor, GPR30, with breast tumor metastasis and transactivation of the epidermal growth factor receptor［J］. Steroids, 2008, 73(9-10): 870-873.

［24］ PROSSNITZ E R, MAGGIOLINI M. Mechanisms of estrogen signaling and gene expression via GPR30［J］. Mol Cell Endocrinol, 2009, 308(1-2): 32-38.

［25］ PROSSNITZ E R, ARTERBURN J B, SMITH H O, et al.Estrogen signaling through the transmembrane G proteincoupled receptor GPR30［J］. Annu Rev Physiol, 2008, 70:165-190.

［26］ FILARDO E J, QUINN J A, BLAND K I, et al. Estrogeninduced activation of Erk-1 and Erk-2 requires the G protein-coupled receptor homolog, GPR30, and occurs via trans-activation of the epidermal growth factor receptor through release of HB-EGF［J］. Mol Endocrinol, 2000,14(10): 1649-1660.

［27］ ALBANITO L, SISCI D, AQUILA S, et al. Epidermal growth factor induces G protein-coupled receptor 30 expression in estrogen receptor-negative breast cancer cells［J］.Endocrinology, 2008, 149(8): 3799-3808.

［28］ NADAL A, ALONSO-MAGDALENA P, SORIANO S, et al.Role of estrogen receptors alpha, beta and GPER1/GPR30 in pancreatic beta-cells［J］. Front Biosci, 2011, 16: 251-260.

［29］ HUANG G S, GUNTER M J, AREND R C, et al. Coexpression of GPR30 and ERbeta and their association with disease progression in uterine carcinosarcoma［J］. Am J Obstet Gynecol, 2010, 203(3): 242.

［30］ SIRIANNI R, CHIMENTO A, RUGGIERO C, et al. The novel estrogen receptor, G protein-coupled receptor 30, mediates the proliferative effects induced by 17beta-estradiol on mouse spermatogonial GC-1 cell line［J］. Endocrinology, 2008,149(10): 5043-5051.

［31］ GAO F, MA X, OSTMANN AB. GPR30 activation opposes estrogen-dependent uterine growth via inhibition of stromal ERK1/2 and estrogen receptor alpha phosphorylation signals［J］. Endocrinology, 2011, 152(4): 1434-1447.

［32］ ARPINO G, WIECHMANN L, OSBORNE C K, et al.Crosstalk between the estrogen receptor and the HER tyrosine kinase receptor family: molecular mechanism and clinical implications for endocrine therapy resistance［J］. Endocr Rev, 2008, 29(2): 217-233.

［33］ RIGGINS R B, SCHRECENGOST R S, GUERRERO M S, et al. Pathways to tamoxifen resistance［J］. Cancer Lett, 2007,256(1): 1-24.

［34］ HAAGENSON K K,WU G S. The role of MAP kinases and MAP kinase phosphatase-1 in resistance to breast cancer treatment［J］. Cancer Metastasis Rev, 2010, 29(1): 143-149.

［35］ MASSARWEH S, SCHIFF R. Unraveling the mechanisms of endocrine resistance in breast cancer: new therapeutic opportunities［J］. Clin Cancer Res, 2007, 13(7): 1950-1954.

［36］ OSBORNE C K, SCHIFF. Mechanisms of endocrine resistance in breast cancer［J］. Annu Rev Med, 2011, 62: 233-247.

［37］ LEARY A F, DRURY S, DETRE S, et al. Lapatinib restores hormone sensitivity with differential effects on estrogen receptor signaling in cell models of human epidermal growth factor receptor 2-negative breast cancer with acquired endocrine resistance［J］. Clin Cancer Res, 2010, 16(5):1486-1497.

［38］ CREIGHTON C J, MASSARWEH S, HUANG S, et al.Development of resistance to targeted therapies transforms the clinically associated molecular profile subtype of breast tumor xenografts［J］. Cancer Res, 2008, 68(18): 7493-7501.

［39］ IGNATOV A, IGNATOV T, ROESSNER A, et al. Role of GPR30 in the mechanisms of tamoxifen resistance in breast cancer MCF-7 cells［J］. Breast Cancer Res Treat, 2010,123(1): 87-96.

［40］ MOJARRAD M, MOMENY M, MANSURI F, et al. Autocrine human growth hormone expression leads to resistance of MCF-7 cells to tamoxifen［J］. Med Oncol, 2010, 27(2): 474-480.

［41］ VIVACQUA A, LAPPANO R, DE MARCO P, et al. G Protein coupled receptor 30 expression is up-regulated by EGF and TGFa in estrogen receptor a-positive cancer cell［J］.Mol Endocrinol, 2009, 23(11): 1815-1826.

［42］ KLEUSER B, MALEK D, GUST R, et al. 17-Beta-estradiol inhibits transforming growth factor-beta signaling and function in breast cancer cells via activation of extracellular signalregulated kinase through the G protein-coupled receptor 30［J］. Mol Pharmacol, 2008, 74(6): 1533-1543.

［43］ IGNATOV T, EGGEMANN H, SEMCZUK A, et a1. Role of GPR30 in endometrial pathology after tamoxifen for breast cancer［J］. Am J Obstet Gynecol, 2010, 203(6): 595.

［44］ LAPPANO R, MAGGIOLINI M. G protein-coupled receptors:novel targets for drug discovery in cancer［J］. Nat Rev Drug Discov, 2011, 10(1): 47-60.

［45］ PROSSNITZ E R, SKLAR L A, OPREA T I, et al. GPR30:a novel therapeutic target in estrogen-related disease［J］.Trends Pharmacol Sci, 2008, 29(3): 116-123.

［46］ BOLOGA C G, REVANKAR C M, YOUNG S M, et al. Virtual and biomolecular screening converge on a selective agonist for GPR30［J］. Nat Chem Biol, 2006, 2(4): 207-212.

［47］ DENNIS M K, BURAI R, RAMESH C, et al. In vivo effects of a GPR30 antagonist［J］. Nat Chem Biol, 2009, 5(6): 421-427.

［48］ LAPPANO R, ROSANO C, DE MARCO P, et al. Estriol acts as a GPR30 antagonist in estrogen receptor-negative breast cancer cells［J］. Mol Cell Endocrinol, 2010, 320(1-2): 162-170.