白蓝4种不同外植体组织培养再生能力的效应

陈华斌，詹国勇，郑耀光，卢永奋，马春梅

（汕头市白沙蔬菜原种研究所，广东汕头，515800）

作物种间杂交在品种的创新、改良方面有良好的优势，但种间杂交的成功率极低，杂交后种胚多数在2～3周内死亡，能存活的种胚也因发育不全而致结籽率极低或不结籽，常规杂交育种很难获得种间一代种子。白蓝（Brassica pekinenis×B.olercea，n=19）是芸薹属蔬菜大白菜和结球甘蓝种间杂交育成的结球性蔬菜，其F1代和后代不易结籽[1]。利用白蓝不同外植体组织培养，建立植株再生体系是获得种质资源的理想途径之一。但由于外植体及其他因素的影响，植株再生速度、脱分化频率和再生能力存在一定的生物效应差异。为此，比较了白蓝4种不同外植体材料离体微繁效果，以期为白蓝建立高效的植株再生体系提供有益的参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以白蓝未开花植株的茎尖、茎段、叶柄和叶片为外植体材料。试验设置3次重复，每个重复10瓶，每瓶外植体数5个。

1.2 培养基成分及培养条件

愈伤组织和不定芽诱导基本培养基为MS，添加2个激素配比浓度6-BA （6-苄基腺嘌呤）、NAA（α-萘乙酸）和1个激素配比浓度IBA（吲哚丁酸），具体见表1。小苗促根培养基：1/2 MS+0.1 mg/L IBA。各培养基均加入蔗糖3%，琼脂0.8%，pH值调至5.8。培养温度（22±1）℃，光照 12 h/d，光照强度 3 000 lx。

1.3 外植体的处理

外植体经自来水表面清洗后放入75%酒精中消毒30 s，无菌水冲洗后用0.1%升汞灭菌，茎段灭菌10 min，茎尖、叶柄、叶片灭菌8 min，灭菌后无菌水涤洗5～6次，吸干水分，植入愈伤组织诱导培养上。外植体大小：茎尖长约0.5 cm，茎段、叶柄1 cm，叶片为1 cm2。愈伤组织诱导、继代培养每10 d更换1次培养基。

1.4 不定芽生根培养

当不定芽2～3片小叶时，从茎基部切下接种于生根培养基进行生根培养。约14 d可完成生根。生根小苗植于泥炭和珍珠岩混合的基质中，14 d后移至大田定植，成活率达95%。

2 结果与分析

2.1 不同外植体愈伤组织诱导率的差异

茎尖在愈伤组织诱导培养基中萌动最早，仅7 d就有乳白色的愈伤组织形成，4周后愈伤组织增大为团块状，质地中等、淡绿色，诱导率为52.4%。茎段形成愈伤组织相对较晚，10 d左右切口处才形成少量淡白色愈伤组织，团块小、质地较硬，诱导率最高，达76.9%。叶柄经更换2次培养基后才萌动分化，愈伤组织团块状、质地疏松、水浸状明显，部分组织类玻璃化，易褐化，诱导率为21.5%。叶片培养约12 d，叶片面积增大、卷曲，只在切口边缘形成愈伤组织，团块小、色泽暗黄，此类组织极易褐化死亡，存活的组织需经多代培养才能获得理想的团块愈伤组织，诱导率仅19.3%。

表1 4种外植体诱导分化的影响效应

2.2 不定芽分化情况

茎尖形成的愈伤组织经35 d的芽分化培养，可获得丛生不定芽，平均分化芽增殖倍数为3.9。不定芽形态正常，叶色绿，生长势强，畸形苗率低。茎段不定芽的分化形成有2种方式：①愈伤组织分化出不定芽，②茎段腋芽直接萌生出不定芽。经腋芽直接萌生的不定芽形成时间更早，最早分化不定芽仅12 d；茎段诱导的不定芽质量好，苗壮、色浓绿、易生根，芽分化率达4.6倍。叶柄形成的愈伤组织，经45 d以上的继代培养，能获得丛生不定芽，芽分化率3.5倍。不定芽质量一般，有部分不定芽叶片粘连或玻璃化。叶片所诱导的愈伤组织经60 d继代培养才能获得丛生不定芽，平均分化率3.1倍。不定芽长势一般，畸形率较高，部分不定芽不具备生长点，仅分化出叶片（表1）。

2.3 生根和驯化

4种不同外植体所诱导的不定芽生根率为95%～98%，无明显差异。在0.1 mg/L IBA的生长调节物质中生根效果好，平均生根4.6条以上。健壮的不定芽生根培养14 d将获得理想的根系。而玻璃化样或水浸状的不定芽生根相对较晚，一般需培养20 d左右才完成生根过程，各生根小苗驯化成活率均在95%以上（表1）。

3 小结与讨论

试验结果表明，白蓝4种不同外植体材料均能诱导出愈伤组织和不定芽。植物外源激素是白蓝再生体系中诱导分化的关键因素之一，如细胞分裂素对外植体愈伤组织、不定芽作用明显，IBA有利于根系的分化。但外源激素浓度的高低对愈伤组织、不定芽、根系的诱导效果不同，高浓度6-BA有利于愈伤组织的形成，而较低浓度的6-BA有利于芽增殖培养，生根阶段则不需添加6-BA。因此在各培养阶段对外源激素的调控是必需的。此外，外植体的生理状态对诱导分化率也有一定的影响，赵建萍[2]发现在艾西丝南瓜子叶的离体培养中，4～5 d苗龄子叶是诱导芽分化的最佳时期，而侯喜林等[3]则发现在矮脚黄不结球白菜子叶离体再生植株中，11～15 d苗龄的子叶分化效果最佳。本试验中叶片诱导分化率低于茎尖、茎段，可能与叶片苗龄偏大有关。

[1]卢永奋，柳江海，谢顺赞，等.白蓝无性繁殖试验初探[J].长江蔬菜，2004（7）：43-44.

[2]赵建萍.‘艾西丝’南瓜子叶的离体培养 [J].园艺学报，1999，26（3）：196-197.

[3]侯喜林，曹寿椿.不结球白菜子叶离体培养再生植株[J].南京农业大学学报，1994，17（3）：60-64.