复方中草药对斜带石斑鱼生长性能及消化酶活性的影响

孔江红 刘襄河 谢钦铭

随着海水鱼类养殖规模不断扩大，养殖环境趋于恶化，各种病害日益剧增，大量抗生素和化学药品的滥用引起抗药性增加，严重影响海水鱼类的品质和人类健康。中草药作为一种新型饲料添加剂，具有天然性、高效、毒副作用小和性能多样化等优点而渐受青睐。中草药含有多种营养成分和生物活性物质，如多糖、甙类、生物碱、有机酸、挥发油等，既能提高水产动物的非特异性免疫功能[1-4]，又能提高消化酶活性，促进营养物质的消化吸收，从而提高水产动物的生长性能[5-9]。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)隶属于鲈形目、鲈亚目、鮨科、石斑鱼属，为暖水性中下层鱼类，是我国南方海水网箱养殖的主要经济鱼类之一，因其生长快、肉质细嫩、味道鲜美而受到人们的青睐。本研究在饲料中添加不同剂量的复方中草药，研究对斜带石斑鱼生长性能、体成分和消化酶活性的影响，探讨其适宜添加量及应用的可行性，旨在为开辟中草药在海水养殖鱼类饲料中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验鱼与饲养管理

试验鱼为福建漳浦水产基地人工培育的斜带石斑鱼幼鱼，平均体重为(19.72±0.22)g，体长为(11.0±0.5)cm。石斑鱼鱼苗运到集美大学海水养殖试验场，放入暂养池驯养15 d后，用浓度为150 ml/m3的福尔马林溶液消毒，选取体格健壮、规格基本一致的个体，随机放入12个150 L的循环流水过滤水族箱中，每组3缸，每缸15尾，称初始体重后开始试验。

每天8:00和17:00定时投喂，每次达到表观饱食。每天监测水质状况，每周清洗玻璃缸，并用氟苯尼考消毒。试验用水为一级沙滤海水，光照为自然光源，用增氧机昼夜持续增氧，每次投喂后半小时吸出粪便，并换水约1/4～1/3，以保持水质清新。试验期间水温25～28℃，pH值8.2±0.3，溶氧浓度＞7.0 mg/l，氨氮浓度＜0.2 mg/l。试验期为42 d。

1.2 试验饲料的配制

中草药为按照一定比例混合的大黄、柴胡、白茅根、槐花、贯众、苦参等13种中草药粉碎后，过80目筛，在饲料中分别添加0%、0.5%、1.0%、2.0%（饲料配方见表1），分别为对照组(CK)、0.5%组(F1)、1.0%组(F2)和2.0%组(F3)。各组饲料原料混匀后，制成3 mm粒径的颗粒饲料，自然风干后装入自封袋中，置于-20℃冰箱中冷藏保存备用。

1.3 样品采集

试验结束后，禁食24 h，每缸鱼整体称重后，随机取5尾鱼，用50 mg/l丁香酚进行麻醉处理，待鱼侧翻即可，测体长、体重，然后将鱼解剖分离出肝脏、胃和肠，用预冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干水分，并于-80℃下保存，用于制备粗酶液。解剖后的鱼体，去头、尾及鳍，于-20℃下保存，用于测定体成分。

表1 饲料组成及营养水平（%）

1.4 生长指标分析

鱼体称重后绞碎，于70℃烘干，用微型粉碎机粉碎，制备鱼体风干样品。测定鱼体风干样品和饲料样品常规成分：水分含量测定采用105℃常压烘箱干燥恒重法；粗蛋白含量测定采用半微量凯氏定氮法（总氮×6.25）；粗脂肪含量的测定采用索氏抽提法（乙醚为抽提液）；灰分含量测定采用马福炉灼烧法（550℃）。

分别按下式计算增重率(weight gain rate,WGR)、饲料系数(feed conversion rate,FCR)、特定生长率(specific growth rate,SGR)、蛋白质效率(protein efficiency ratio,PER)、肝体指数(hepatosomatic indexes,HSI)、肥满度(condition factor,CF)、腹脂率(mesenteric lipid-somatic index,MSI)和存活率(survival rate,SR)。

增重率(%)=100×(Wt-W0)/W0；

饲料系数=FI/(Wt-W0)；

特定生长率(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t；

蛋白质效率(%)=100×(Wt-W0)/Wp；

肝体指数(%)=100×Wl/Wb；

肥满度(%)=100×Wb/L3；

腹脂率(%)=100×Wf/Wb；

存活率(%)=100×Nf/Ni。

式中：W0——平均每尾鱼初始体重(g)；

Wt——平均每尾鱼终末体重(g)；

FI——平均每尾鱼摄食饲料总量(g)；

t——饲喂天数(d)；

Wp——平均每尾鱼摄入蛋白质总量(g)；

Wl——每尾鱼肝脏重量(g)；

Wf——每尾鱼腹脂重量(g)；

Wb——每尾鱼终末体重(g)；

L——每尾鱼终末体长(cm)；

Ni——初始鱼尾数；

Nf——终末鱼尾数。

1.5 粗酶液的制备和消化酶活力测定

称重组织样品，加入10倍体积(V/W)的预冷生理盐水(0～4℃)，并在冰水浴中匀浆10 min。匀浆液用高速冷冻离心机进行离心(4℃、3 000 r/min、20 min)，取上清液，即为消化酶粗提液。

蛋白酶活力的测定参考QB/T 1803—93。准确称取酪素，用少许浓NaOH溶液润湿，溶于一定的缓冲液，调节pH值(肝胰脏、肠7.5，胃2.6)，配成1%的酪素溶液。将1 ml 1%酪素溶液与1 ml粗酶液混合，在一定恒温水浴中反应10 min，用0.4 mol/l三氯乙酸2 ml终止反应，对照为先加三氯乙酸终止反应再加酪素。离心10 min，取1 ml反应液于0.4 mol/l Na2CO35 ml混合，再加1 ml福林试剂，混匀，37℃显色20 min，于660 nm测吸光值。

淀粉酶和粗酶液蛋白含量采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定。

1.6 数据处理

所有试验数据均以平均值±标准差(Mean±SE)表示，用SPSS13.0分析软件进行单因素方差分析(ANOVA)，若存在显著的差异，则采用Duncan's法进行多重比较，P＜0.05为差异显著。

2 结果

2.1 复方中草药对斜带石斑鱼生长性能的影响（见表2）

由表2可知，F1和F2组FAW分别比对照组高4.59%和3.85%，差异显著(P＜0.05)。F1和F2组WGR显著高于对照组和F3组(P＜0.05)，但F1组和F2组差异不显著(P＞0.05)。F2组的FCR和MSI显著低于对照组和F1组(P＜0.05)，F2组与F3组差异不显著(P＞0.05)。F1和F2组SGR显著高于对照组和F3组(P＜0.05)。F1、F2和F3组PER与对照组相比差异显著(P＜0.05)，且F2组显著大于F1和F3组(P＜0.05)，F3组显著大于F1组(P＜0.05)。F2组的CF显著高于对照组和F3组(P＜0.05)，与F1组差异不显著(P＞0.05)。F2组的HSI显著高于F1、F3和对照组(P＜0.05)，F3组也显著高于对照组(P＜0.05)。

表2 复方中草药对斜带石斑鱼生长性能的影响

2.2 复方中草药对斜带石斑鱼体成分的影响（见表3）

表3 复方中草药对斜带石斑鱼体成分的影响(%)

由表3可知，各组水分含量和粗蛋白含量差异不显著(P＞0.05)。F2组粗脂肪含量显著高于对照组(P＜0.05)，但与F1和F3组差异不显著(P＞0.05)。F3组灰分含量显著高于对照组(P＜0.05)，但与F1和F2组差异不显著(P＞0.05)。

2.3 复方中草药对斜带石斑鱼蛋白酶活力的影响(见表4）

由表4可知，随着复方中草药添加量的增加，各消化道部位蛋白酶活力呈现先升高后降低的趋势。F2和F3组胃蛋白酶活力显著高于对照组和F1组(P＜0.05)，且F2组高于F3组，但差异不显著(P＞0.05)。F1、F2和F3组肠蛋白酶活力显著高于对照组(P＜0.05)，且F2组显著高于F1和F3组(P＜0.05)。F1、F2和F3组肝胰蛋白酶活力显著高于对照组(P＜0.05)，且F2组显著高于F1组(P＜0.05)。

表4 复方中草药对斜带石斑鱼蛋白酶活力的影响（U）

2.4 复方中草药对斜带石斑鱼淀粉酶活力的影响(见表5）

表5 复方中草药对斜带石斑鱼淀粉酶活力影响(U)

表5所示，各消化道部位淀粉酶活力于蛋白酶活力的变化趋势相同。F2组胃淀粉酶活力显著高于对照组、F1和F3组(P＜0.05)；F1、F2和F3组肠淀粉酶活力显著高于对照组(P＜0.05)，且F2组显著高于F1组(P＜0.05)；F2组肝胰淀粉酶活力显著高于对照组、F1和F3组(P＜0.05)。

3 讨论

本试验中选用的苦参、大黄、柴胡等13种中草药含有大量皂苷、多糖、甙类、生物碱、有机酸、挥发油等活性物质，进行复方配合后作为饲料添加剂具有促进生长、提高营养物质的利用率和降低饲料系数等作用。邱小琮等[10]在饲料中添加山楂、麦芽等中草药后，异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的增重率明显提高。王吉桥等[11]在饲料中添加金银花、人参、山楂等中草药，牙鲆(Paralichthys olivaceus)的增重率和饲料转化率显著提高。姜志强[12]等在真鲷(Pagrosomus major)幼鱼饲料中添加山楂、麦芽、当归等中草药，2.0%的添加量可极显著提高增重率(P＜0.01)，显著降低饲料系数(P＜0.05)。陆志款等[13]将黄芪、当归、甘草和山楂等配成复方中草药，按0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的添加量连续喂养红笛鲷(Lutjanus sanguineus)56 d，发现试验组鱼的增重率均显著高于对照组。汤菊芬等[14]在罗非鱼(Oreochromis niloticus)的商品饲料中添加1.5%的复方中草药制剂，发现增重率提高10.82%，蛋白质效率提高15.68%，饲料系数降低4.71%。本试验结果表明，在饲料中添加1.0%的复方中草药，斜带石斑鱼的增重率较对照组提高了7.50%(P＜0.05)，蛋白质效率提高了11.99%(P＜0.05)，饲料系数降低了10.85%(P＜0.05)，说明本复方可有效提高斜带石斑鱼的生长性能。

人工养殖鱼类与野生鱼类相比肉质风味有较大差异，源于决定肉质风味的主要成分的含量和比例，如蛋白质、脂肪、游离氨基酸、醛、酯及酚等，而中草药中的某些成分在养殖鱼类体内沉积，可改善肌肉品质。罗庆华等[15]研究报道，杜仲提取物、大蒜素及两者复方制剂能促进草鱼(Ctenopharyngodon idella)生长，改善肌肉品质，添加复方0.04%～0.08%可以协同改善草鱼的生长性能和肉质。胡先勤等[16]在鲫鱼(Carassius auratus L.)的基础饲料中添加500 mg/kg的中药提取物，能显著提高鲫鱼体蛋白质和脂肪含量，改善鱼肉品质。本研究在饲料中添加1.0%的复方中草药，斜带石斑鱼的腹脂率降低35.70%(P＜0.05)，脂肪含量提高7.49%(P＜0.05)，说明本复方中草药能够提高脂肪的利用率，改善石斑鱼的肌肉品质。

消化酶主要是由消化腺和消化系统分泌的具有消化作用的酶类，鱼类的消化主要在消化道中进行，消化酶活性是反映鱼类消化机能的一项重要指标，适宜的中草药添加剂可以提高鱼类的消化酶活性。刘慧吉等[6]将炒苍术、炒白术等中药制成的两种复方中草药添加剂分别以0.5%、1%和2%的剂量添加到花鲈(Lateolabrax japonicus)的基础饲料中，发现花鲈的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均有显著提高(P＜0.05)。邱小琮等[7]研究表明，异育银鲫摄食添加中草药的饲料后，肠道和肝胰脏的蛋白酶和淀粉酶活性明显提高。吉红等[5]在泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)的饲料中添加不同水平的中草药添加剂，能显著提高泥鳅的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性(P＜0.05)。本试验结果表明，添加复方中草药后，斜带石斑鱼胃、肠和肝胰脏的蛋白酶和淀粉酶活性均有所提高，尤其添加量为1.0%时，蛋白酶和淀粉酶活性均显著高于对照组(P＜0.05)。复方中草药进入石斑鱼鱼体消化道后，可以促进消化酶分泌，提高消化酶活性，从而增强鱼体对饲料营养物质的消化吸收，最终提高鱼体的生长性能。

本研究结果表明，在斜带石斑鱼饲料中添加1.0%的复方中草药，可明显提高其生产性能和消化酶活力。

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