幼鼠肝组织超氧化物歧化酶活性检测

张中林, 郑剑玲, 孙宏伟, 齐贺

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一类广泛存在于机体内的金属抗氧化酶[1],其主要功能是特异性地催化超氧阴离子的歧化反应,清除细胞生命活动中产生的超氧阴离子。SOD对防止活性氧(包括O2·和OH·两种自由基)对机体的伤害、预防衰老、抗辐射损伤等有十分重要的作用。本研究以小鼠的肝组织匀浆液为实验材料,检测不同鼠龄的肝组织SOD活力。

1 材料与方法

1.1 实验动物 按单双号法随机选取正常幼鼠(2月龄)、成年鼠(10月龄)和老龄鼠(18月龄)各 10只小鼠,雌雄各半,由辽宁中医药大学实验动物中心(SCXK(京)2004-0001)提供。

1.2 药品与试剂 邻苯三酚:白色粉末(瓯海化工试剂厂,批号:880512);无水乙醇:分析纯(沈阳第一试剂厂,批号:980610);氯仿:分析纯(天津化学试剂厂,批号:090708)50 mmol/L;Tris-HCL缓冲液:pH 8.0。

1.3 实验仪器 722s可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司制造,UV 755B);高速分散器(上海金达上生化仪器厂,XHF-1);离心机(北京医用离心机厂,LD4-2A);电热恒温三用水箱(北京永光明医疗仪器,HH-W 21)。

1.4 实验方法

1.4.1 肝组织匀浆的制备 每组小鼠称体质量,用1%戊巴比妥进行腹腔麻醉(0.4m L/100 g),开腹,取肝组织后用冷生理盐水冲洗,用滤纸吸干外层水分。准确称取0.5 g肝组织,加入1∶9匀浆介质(冷),用高速分散器8 000 rpm研磨0.5 min,匀浆液备用。

1.4.2 酶提取液的制备 肝组织匀浆液用离心机于3 000 rpm离心10 m in,弃去沉淀。取上清液2m L,再加适量氯仿,振混1 m in。再于 3 000 rpm离心10 min,上层则为酶提取液。按常规方法测定SOD活性。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0软件分析处理,计量资料以 x±s表示,组间比较用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

幼鼠组肝组织SOD活性高于成年鼠组,差异有统计学意义(P<0.05)。幼鼠组肝组织SOD酶活性高于老龄鼠组,差异有统计学意义(P<0.01)。成年鼠组肝组织SOD酶活性与老龄鼠组差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同鼠龄小鼠肝组织SOD活性的变化( x±s,n=10)

3 讨论

SOD是生物体内一种最重要的细胞保护酶,尤其表现为对氧自由基的清除上。SOD通过其优先被氧化,或修复氧化引起的损伤而对细胞起到保护作用。在正常机体内,SOD的主要功能就是歧化在体内代谢产生的氧自由基,使之转化为H 2O2及O2,以减轻氧自由基对细胞的损害。机体在正常的生化代谢中不断产生自由基,可产生细胞毒害作用,引起细胞凋亡、衰老,同时机体自身也存在抗氧化系统及时清除自由基,维持体内的平衡状态。目前认为,SOD能有效清除自由基,阻止脂质过氧化,保护机体细胞免受损失[2]。

在正常生理条件下,动物鼠的体内自由基保持低浓度平衡状态[3]。机体内一方面不断产生自由基,而另一方面同时有清除自由基的机制,使机体免受不良影响。如果一旦体内自由基的产生与平衡失调,大量的自由基就会对机体造成不利影响,导致疾病的发生,加速生物的衰老。因此,清除自由基已成为提高机体生命质量,防御机体衰老的一个非常重要的内容[4,5]。

本研究显示幼鼠组肝组织SOD活性高于成年鼠组和老龄鼠组,差异有统计学意义(P<0.05,0.01)。随着幼鼠年龄增长,其肝组织SOD活力呈降低趋势。但成年鼠组肝组织SOD活性与老龄鼠组差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄鼠的肝组织SOD活性比较未见文献报道,有待于进一步探讨。

[1] M cCord JM,Fridovich I.Fridovich.Superoxide dism utase.An enzym ic function for ery th rocuprein(hem ocuprein)[J].JBiol Chem,1969,244(22):6049-6055.

[2] 朱衍,郭世柄,匀海松,等.运动与氧自由基损伤[J].中国运动医学杂志,1990,9(3):161-166.

[3] Lovlin R,Cottle W,Pgke I,et al.A re indices of free redical dam age related to exercises intensity[J].Eu rope Journal Applied Physiol,1987,56(3):313-316.

[4] 印大中,刘希彬.自由基伤害衰老理论的严重缺陷[J].中国老年学杂志,2003,23(2):123-126.

[5] 孙国光,李小林,马岩等.褐藻多糖硫酸酯对老龄鼠过氧化酶和脂褐素的影响[J].中国老年学杂志,2005,25(11):1392-1393.